C. Bỏn −ớc nổi.
h. Đặc tớnh của thành phẩm (Dermatophagoides pteronyssinus)
3.2. Tách chiết bán thành phẩm
Trong công trình nghiên cứu của chúng tôi, mạt D. pteronyssinus sau khi giám định hình thái học và giám định phân tử, đ−ợc nuôi bằngmôi tr−ờng nấm men saccharonyces cereivisiae, thức ăn tổng hợp (chế biến từ bột ngụ, gạo, đậu tương, bột cỏ, cỏm gạo, khụ dầu lạc, polyvitamine, trứng gà), tỷ lệ 1:1; đõy là mụi trường nuụi mạt tốt nhất trong 5 mụi trường nuụi đó được nghiờn cứu (kết quả nhỏnh 3). Tiến hành nuôi trong buồng kính đặt trong phòng thí nghiệm đảm bảo các điều kiện môi tr−ờng nh− nhiệt độ 25 – 270 C, độ ẩm 75
– 80%, ánh sáng tự nhiên của phòng thí nghiệm, thông khí, chống ngoại nhiễm.
Dựa vào tốc độ phát triển của quần thể mạt, sau khoảng 10 tuần nuôi cấy, là thời gian quần thể mạt phát triển mạnh nhất, môi tr−ờng nuôi bão hoà, số l−ợng mạt ít nhất đạt 5.000/gam môi tr−ờng và độ thuần khiết là hơn 90 %, chúng tôi lấy toàn bộ khay nuôi mạt để tiến hành tách chiết, lúc này l−ợng mạt bụi nhà và các thành phần có thể gây dị ứng đạt hiệu suât cao nhất.
Chúng tôi tiến hành tách chiết dị nguyên theo ph−ơng pháp Ad Ado (là ph−ơng pháp đã áp dụng để tách chiết dị nguyên bụi nhà ở Việt nam tr−ớc đây) và áp dụng ph−ơng pháp tách chiết dị nguyên của Coca kết hợp với ph−ơng pháp Sutherland, có cải tiến theo Phòng Miễn dịch – Dị nguyên, Bệnh viện Tai Mũi Họng Trung −ơng về thời gian, hoá chất.
40
Bảng 3.2. Kết quả tách chiết dị nguyên từ mạt D. pteronyssinus
L−ợng DN thu đ−ợc
(g đông khô)
L−ợng nguyên liệu cho mỗi ph−ơng pháp Coca + Sutherland, có cải tiến Theo Ad Ado Lần 1 (200 g) 2,5 1,8 Lần 2 (200 g) 2,3 1,6 Lần 3 (300 g) 3,4 2,3 Lần 4 (300 g) 3,3 2,2 Lần 5 (200 g) 2,5 1,9 Lần 6 (200 g) 2,2 1,5
1,16g/100g nguyên liệu 0,74 g/100g nguyên liệu Kết quả ở bảng 3.2 thấy trong các mẻ tách chiết, trung bình cứ 100 g kháng nguyên mạt D. pteronyssinus nuôi cấy
- Theo ph−ơng pháp tách chiết dị nguyên của Coca kết hợp với ph−ơng pháp Sutherland, có cải tiến theo Phòng Miễn dịch – Dị nguyên, Bệnh viện Tai Mũi Họng Trung −ơng chúng tôi thu đ−ợc trung bình 1,16 g chế phẩm dị nguyên đông khô;
- Theo ph−ơng pháp Ad Ado chúng tôi thu đ−ợc trung bình 0,74 g chế phẩm dị nguyên đông khô;
41
Nh− vậy ph−ơng pháp theo ph−ơng pháp tách chiết dị nguyên của Coca kết hợp với ph−ơng pháp Sutherland, có cải tiến theo Phòng Miễn dịch – Dị nguyên, Bệnh viện Tai Mũi Họng Trung −ơng là ph−ơng pháp có hiệu quả cao hơn.