Điểm kết thúc ở mỗi phản ứng được xác định bằng kỹ thuật sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography, TLC) Trong đó:
- Pha tĩnh: là tấm sắc ký gồm tấm nhôm mỏng được tráng một lớp silica gel dày 0,25 mm (Merck, Đức)
- Pha động: là hỗn hợp của các dung môi gồm benzen, n-hexan hoặc ethyl acetate với tỷ lệ phối trộn khác nhau Hỗn hợp dung môi được đựng trong một lọ thủy tinh trong suốt có nắp đậy với lượng không cao hơn 1,5 cm tính từ đáy lọ
Tấm sắc ký được cắt thành từng miếng với kích thước 2 cm x 10 cm Dùng bút chì kẻ một đường ngang cách một đầu của giấy sắc ký khoảng 1,5 cm rồi đánh dấu điểm chấm mẫu lên đường kẻ Dùng Pasteur pippette chấm mẫu lên điểm dánh dấu, sau đó đặt giấy sắc ký vào lọ dung môi Quan sát sự di chuyển của dung môi trên giấy, khi dung môi cách đỉnh của giấy sắc ký 1,5 – 2 cm thì lấy giấy sắc ký ra khỏi lọ, dùng bút chì vạch một đường ngang để đánh dấu mực di chuyển dung môi (Hình 3 5) Sau khi bay hơi hết dung môi trên giấy sắc ký, mẫu được làm hiện bằng cách phun dung dịch Potassium permanganate (KMnO4) (đối v ới mẫ u có ch ứ a n ối đôi trong phân tử ) lên b ề mặ t gi ấ y s ắ c ký, ho ặ c phun dung d ịch H2SO4 20% sau đó hơ nóng (mẫ u không có chứ a nối đôi trong phân tử )
Phản ứng chỉ kết thúc khi trong mẫu không còn sự hiện diện của chất phản ứng ban đầu (không có đốm hiện diện của chất phản ứng ban đầu trên đường di chuyển theo dung môi của mẫu
2 5 3 Thẩm định cấu trúc hóa học của mẫu tổng hợp
Mẫu tổng hợp ở mỗi giai đoạn của quy trình sau khi tinh lọc sẽ được thẩm định cấu trúc hóa học bằng kỹ thuật Sắc ký khí - Khối phổ (Gas chromatography - Mass spectrometry, GC - MS) và phương pháp phân tích phổ hồng ngoại (Infrared - IR) (tại khoa Khoa học, trường Đại học Cần Thơ) Đồng thời, mẫu cũng được gởi đến Phòng thí nghiệm Hóa chất sinh thái, trường Đại học Nông nghiệp và Công nghệ Tokyo để phân tích Cộng hưởng từ hạt nhân (NMR)
Phổ khối lượng của mẫu tổng hợp được ghi nhận bằng máy liên hợp sắc ký (GC) – Khối phổ (MS) với GC-MS là Thermo Scientific Trace Ultra (Hình 3 11) Cột sắc ký được dùng trong phân tích là cột mao dẫn DB-5 (0,25 mm ID x 30 m; Agilent Technologies) Sự ion hóa được thực hiện theo kiểu va chạm ion (Electron Impact, EI mode) ở điện thế 70 eV và nhiệt độ 2300C Phổ khối lượng được đặt trong khoảng m/z từ 40-500 Cột sắc ký được dùng trong phân tích là cột mao dẫn DB-23 (capillary column, 0 25 mm ID x 30 m; J&W Scientific) với chương trình nhiệt độ: 800C (trong 2 phút), tăng lên 2100C ở tốc độ 80C/phút và giữ ở 2100C trong 15 phút
Phổ cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) được đo bằng máy Jeol Alpha 300 Fourier transform spectrometer (Nihondenshi, Tokyo, Japan) ở tần số 300,4 MHz (cho phổ 1H) and 75,45 MHz (cho phổ 13C) Dung môi dùng để pha loãng mẫu là deuterium chloroform (CDCl3) và chất nội chuẩn (internal standard) là Tetramethylsilane (TMS)
CHƯƠNG 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3 1 Thời gian, địa điểm và phương tiện tiến hành thí nghiệm3 1 1 Thời gian