Vận hành
Tối ưu hóa hợp chất
Quy trình sau để tối ưu hóa hợp chất thực hiện trong phương pháp ESI Linked. Quy trình này có thể thực hiện ở cả cơ chế âm hoặc dương với nguồn ESI.
1. Xác minh khối lượng phân tử giả ([M+H]+ cho chế độ ion dương hoặc [M-H]- cho chế độ ion âm) bằng phương pháp quét Q1.
2. Ấn New Method và chọn chiều phân cực của hợp chất (Dương hay Âm). 3. Cài đặt quét Q1 scan để quét toàn bộ với các thông số đã đưa ra:
Giá trị thường được sử dụng cho quét toàn bộ MS
Khoảng quét khối lượng Cỡ bước (amu) Thời gian dừng
(ms)
4. Khởi động bơm tại 30 L/phút và đảm bảo ống đi vào máy đo khối phổ.
5. Tab 3Q Source hiển thị các thông số nguồn chung và điện áp đầu vào. Điểm gợi ý bắt đầu cho vị trí đầu dò với tốc độ dòng chảy thấp là:
Lưu ý: Phương pháp chung trong bảng sau cho cơ chế dương. Khi chuyển sang cơ chế âm,
chuyển đổi tín hiệu điện áp tia điện, điện áp đầu vào, năng lượng va chạm và buồng va chạm 2.
Bước 1 Bước 1 Bước 1
Bước 2 Bước 3
Thông số nguồn phụ thuộc dòng Giá trị
Khoảng cách ngang của đầu dò 6
Khoảng cách dọc của đầu dò 6
Vị trí kim điện 2
Khí khô 60
Nhiệt độ HSID (°C) 250
Khí phun sương 100
Nhiệt độ nguồn (°C) 0
Điện áp tia điện 5500
Thông số phụ thuộc hợp chất Giá trị dương Q1
6. Bắt đầu quét và tìm kiếm chất phân tích (hợp chất quan tâm) trong phổ đầy đủ:
Hình 12: Phương pháp quét dương Q1 quét toàn bộ phổ của Reserpine
Lưu ý: Tối ưu hóa vị trí đầu dò và trạng thái nguồn.
7. Khi nhìn thấy đỉnh cần quan tâm, phóng to đỉnh quan tâm bằng cách thay đổi phạm vi khối, cỡ bước và thời gian dừng (ms).
• Khối lượng quan tâm (ví dụ, 609.3 cho Reserpine).
• Cửa sổ khối lượng 10 amu.
• Cỡ bước 0.1.
• Thời gian dừng 10 ms.
8. Cường độ tín hiệu khối gốc (quét Q1) > 500,000 cps nhưng không quá 5e6 cps. Tối ưu để có được độ nhạy MS/MS hợp lý (thường sử dụng nồng độ 10pg/μL đến 100pg/μL).
9. Nếu cần giảm độ nhạy, hãy giảm nồng độ hợp chất.
10. Tăng cường thông số điện áp đầu vào (EV) bằng cách nhấp vào hàm dốc trên phần mềm. Có thể sử dụng giá trị mặc định trong tùy chọn Dốc (Ramp) cho quét EV. Start.
11. Khi quá trình ramp kết thúc, chấp nhận tối ưu hóa EV bằng cách nhấp chuột phải vào bên trong vùng dữ liệu để hiện menu ngữ cảnh; chọn Parameter Ramp/Apply to All, hoặc gõ giá trị tối ưu hóa thủ công vào bảng tham số Mass.
12. Phần mềm sẽ lưu giá trị tối ưu hóa cho EV. Bỏ chọn hàm dốc (Ramp function) và thu thập 10 lần quét (quét tổng) cho phân tích quan tâm.
13. Lưu phương pháp quét Q1 và (tùy chọn) lưu báo cáo thu thập 10 lần quét; điều này có thể có ích về sau.
Xác định mảnh sản phẩm của hợp chất quan tâm
Lưu ý: Chọn mảnh khối phổ cao hơn bất cứ khi nào có thể để cung cấp ít nhiễu hơn so với khối phổ thấp.
1. Cài đặt Experiment Type thành Product Scan. Nhập chính xác khối lượng gốc và cài đặt khối lượng bắt đầu và khối lượng dừng, cỡ bước và thời gian dừng.
Khối lượng bắt đầu và khối lượng dừng (20 đến khối lượng gốc)
Cỡ bước 0.1 amu
Thời gian dừng 1 ms.
2. Bắt đầu quét. Khi nhìn thấy tín hiệu (trọng lượng, khối lượng gốc), dừng chạy.
3. Tăng cường năng lượng va chạm bằng cách sử dụng hàm dốc, và chọn tùy chọn Sum
Scan.
4. Bắt đầu quét. Khi đoạn dốc kết thúc, chọn hai đoạn cao nhất quan sát được và phóng to.
Hình 13: Thiết lập chế độ quét toàn bộ
5. Khi các mảnh đã được phát hiện, quét sản phẩm trên ion sản phẩm đã lựa chọn với cửa sổ rộng 10 amu (thời gian dừng 10 ms), và xác định khối lượng chính xác cho từng đoạn.
• Cỡ bước 0.1 amu
Bước 1 Bước 2
Hình 14: Quét sản phẩm với nhiều mảnh sản phẩm quan tâm
6. Bắt đầu quét và chạy trong 0.5 phút, và sau đó ngừng quét.
7. Tăng cường năng lượng va chạm bằng cách sử dụng hàm dốc (ramp function).
8. Sau khi hoàn thành quét dốc, mỗi cửa sổ peak sẽ hiển thị giá trị mà tại đó đỉnh ở cường độ lớn nhất. Nhấp chuột phải vào bên trong khu vực dữ liệu để hiển thị trình đơn ngữ cảnh và chọn tùy chọn Parameter Ramp/Apply to All, hoặc nhập thủ công các giá trị tối ưu hóa vào bảng tham số Mass.
9. Bỏ chọn hàm dốc và chạy 10 lần quét (quét tổng). 10. Lưu phương pháp và báo cáo dữ liệu thu thập được.
11. Thay đổi Experiment Type thành MRM (sử dụng cùng một phương pháp) và làm theo hướng dẫn bên dưới.
Bước 4
Tối ưu hóa các tham số phụ thuộc hợp chất cho quá trình chuyển đổi MRM