Vận hành
Tối ưu hóa các tham số phụ thuộc hợp chất cho quá trình chuyển đổi MRM
đã chọn. Một cặp MRM bao gồm tiền chất và khối lượng ion sản phẩm. Sử dụng thời gian dừng là 20 ms làm điểm bắt đầu.
2. Sử dụng chức năng tự động hiệu chỉnh (Autotune), như thể hiện bên dưới, hoặc tiếp tục sang bước tiếp theo để thực hiện hàm dốc riêng lẻ:
Hình 15: Thay đổi chế độ quét thành MRM, và thiết lập đoạn quét
3. Sử dụng chức năng Parameter Ramp, mỗi cặp MRM có thể tối ưu hóa riêng. Cường độ tối đa cho mỗi lần chuyển đổi có thể đạt được bằng cách tối ưu hóa thông số Compound- Dependent:
• Năng lượng va chạm
• Điện áp vào
• Collision Cell Lens 2
Đảm bảo đã chọn Run Parameter Ramp và nhấp chuột vào Ramp Settings để mở Scan Ramp Editor.
4. Chọn thông số dốc trong quá trình quét bằng cách chọn hộp kiểm tương ứng trong cột
Select.
5. Thực hiện các thay đổi theo yêu cầu với các giá trị Start, Stop, và Step Size cho mỗi thông số.
Step 1 Step 2
Auto
Step 4 Step 3
chọn Apply All Optimization Points, hoặc nhập thủ công các giá trị được tối ưu hóa vào bảng thông số Mass Ramp.
9. Nếu chấp nhận, lưu chế độ MRM.
10. Điều chỉnh nhiệt độ HSID theo cách thủ công và tìm nhiệt độ HSID tối ưu hóa. 11. Lưu chế độ MRM để sử dụng sau này.
Hình 16: Áp dụng tối ưu hóa cho thông số quét dốc cho mỗi cặp ion MRM
Lưu ý: Một hoặc nhiều thông số phụ thuộc hợp chất cũng có thể được tối ưu hóa tự động (tự động hóa
các quy trình trên) bằng cách sử dụng chức năng Autotune.
Cài đặt thiết bị để tối ưu hóa dòng chảy cao (High Flow) MRM
Cài đặt chia dòng nên được thực hiện để tối ưu hóa thông số nguồn ở tốc độ dòng được sử dụng trong phân tích HPLC. Thường bắt đầu sử dụng thành phần dung môi hoặc dung môi có thành phần nước cao nhất.
Cài đặt chia dòng cho hợp chất quan tâm
1. Cài đặt thiết bị như hình:
Hình 17: Cài đặt chia dòng thiết bị cho hợp chất quan tâm
Lưu ý: Đảm bảo rằng LC được kết nối bằng cách đóng kín.
2. Áp dụng khí dòng chảy cao và vị trí nguồn dòng chảy cao như bảng dưới
Giá trị bắt đầu để tối ưu hóa Thông số nguồn phụ
thuộc dòng chảy 200 L/phút 400 L/phút Chú thích
Khoảng cách dọc của đầu dò (mm)
7-9 10-11 Dòng chảy cao hơn lưu lại ở phía xa hơn
Vị trí kim ESI (mm)
(kim nhô ra) 2.0 2 So với ống tuýp
Khoảng cách ngang của
đầu dò (mm) (núm vặn đen) 2 2 So với phần giữa đầu dò Khí khô 100 120 >100 để làm sạch hệ thống
Khí phun sương 250 300
Điện áp tia điện (Volt) 5500 5500 Chế độ ion hóa phun điện tử (ESI) 3. Cài đặt ống tiêm và LC để chạy ở 10 và 500 μL/phút, tương ứng (hoặc chọn tốc độ dòng,
Thu thập dữ liệu Tạo chế độ LC
Lưu ý: Nếu lập trình loại đĩa vi tấm mới cho Quản lý mẫu MD Sample Manager khi phần mềm Simplicity đang
hoạt động, phần mềm có thể bị lỗi. Tắt phần mềm trước khi thêm hoặc xóa xác định đĩa vi tấm từ bộ phận bơm mẫu tự động.
Lưu ý: Trước khi bắt đầu và kết nối LC, đảm bảo rằng khí và nhiệt đã được bật và được áp dụng để tránh
nhiễm bẩn đầu dò gốm và gây hư hỏng hệ thống.
Trên tab LC Method, có thể tải chế độ LC hiện có để sửa đổi hoặc sử dụng, hoặc tạo phương thức LC mới đáp ứng yêu cầu.
Để tải một phương thức LC hiện có
1. Trên thanh thực đơn, chọn tab LC Method.
2. Nhấp vào Load Method. Hộp thoại Open LC Method duyệt thư mục xuất hiện.
3. Xác định vị trí và chọn tệp phương thức LC mong muốn (.method), và bấm OK. Phương thức LC đã chọn được mở ra, và điền vào các trường tab LC Method:
4. Tối ưu hóa phương thức LC theo yêu cầu:
5. Trên bảng điều khiển QSight MD Sample Manager, bấm vào tab Parameter Setup. 6. Mở rộng phần Setup bằng cách điều khiển mũi tên , và xác định thông số cài đặt theo
yêu cầu.
7. Mở rộng Load Sample, Inject Sample, và Post Wash lần lượt, và sửa đổi bất cứ cài đặt nào theo yêu cầu.
Để tạo phương thức LC mới
1. Trên thanh thực đơn, chọn tab LC Method.
2. Bấm vào New Method. Mẫu phương thức LC mặc định được khởi tạo: 3. Xác định thông số mong muốn theo yêu cầu:
4. Trên bảng điều khiển QSight MD Sample Manager, bấm vào tab Parameter Setup. Trong danh sách Scripts thả xuống, chọn tập lệnh phương thức mong muốn. Sau đó xác định điều kiện phương thức bơm mẫu tự động mong muốn.
5. Trên bảng điều khiển QSight MD Binary Pump, chọn điều kiện phương thức bơm nhị phân mong muốn.
6. Trên thanh thực đơn, bấm vào Save Method, và lưu phương thức vào vị trí mong muốn bằng tên tệp duy nhất.
Tạo danh sách lô/loạt (batch)
Để tạo danh sách mẫu được phân tích, thứ tự lấy mẫu, và vị trí mẫu trong bộ phận bơm mẫu tự động. Có thể:
• Sử dụng danh sách lô/loạt đã có (tệp .xml)
• Chọn các mẫu từ danh sách lô/loạt đã có
• Tạo một lô/loạt mới
Tạo danh sách lô/loạt mới
1. Chọn tab Batch List Creator.
2. Bấm vào New Batch List. Phần mềm tự động tạo một lô/loạt mới. Tên lô/loạt bao gồm ký tự B với ngày khi lô/loạt được tạo.
Khi lô/loạt đã được đưa ra theo hàng sẽ được tự động lưu theo thời gian; điều này giúp phân biệt các lô/loạt khác nhau được đưa ra trong cùng một ngày.
Lưu ý: Để bắt đầu với danh sách lô/loạt đã có, bấm vào nút Load Batch List.
3. Nhập số lượng mẫu được phân tích trong trường Number of samples.
4. Trong trường Sample Name (Start with), nhập tên mẫu cho mẫu đầu tiên trong danh sách. Phần mềm sẽ tạo tên tuần tự cho tất cả các mẫu trong danh sách, đến tổng số mẫu được chỉ định.
Ví dụ:
Tổng số mẫu: 10
Tên mẫu (Bắt đầu với): Mẫu 0001 (Sample0001) Như vậy sẽ tạo 9 mẫu bổ sung được gắn nhãn:
Mẫu0002 (Sample0002) đến Mẫu0010 (Sample0010)
Lưu ý: Nếu muốn ghi đè lên tính năng tự động đánh số và đánh số mẫu theo cách thủ công, hãy bao
7. Bấm vào Add to List. Phần mềm tạo danh sách các mẫu được chỉ định. Để thay đổi bất kỳ thông số nào cho bất cứ mẫu nào hoặc để bổ sung mẫu vào danh sách, chỉ cần nhập vào trường bên cạnh tên mẫu được yêu cầu.
8. Tùy chọn, kiểm tra đĩa mẫu và vị trí lọ bằng cách bấm vào Tray Configuration.
9. Khi hoàn thành, bấm vào Submit to Acquisition Queue. Mẫu đã sẵn sàng để phân tích.
Sắp xếp lô/loạt thu nhận được