các mẫu thu thập
Với quy trình kỹ thuật ELISA phát hiện virus gây bệnh tristeza trên cây có múi được đã xây dựng, chúng tôi tiến hành thử nghiệm trên 20 mẫu cây có múi gồm 10 có kiểu hình bị bệnh tristeza và 10 mẫu có kiểu hình không bị bệnh tristeza. Kết quả thử nghiệm được tổng hợp trong hình 4.8 và bảng 4.2 dưới đây:
Hình 4.8. Kết quả thử nghiệm quy trình ELISA phát hiện bệnh tristeza trên các mẫu thu thập. I. Kết quả phản ứng ELISA; II. Ghi chú thứ tự bổ sung
Bảng 4.2. Kết quả thử nghiệm quy trình ELISA phát hiện bệnh tristeza trên các mẫu thu thập
STT 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
âm tính, chiếm tỷ lệ 10%. Như vậy, kỹ thuật ELISA phát triển trong nghiên cứu này có 9/10 mẫu dương tính thật và 01 mẫu âm tính giả.
Trong số 10 mẫu có kiểu hình không bị bệnh, kỹ thuật ELISA phát hiện đúng 8 mẫu (chiếm tỷ lệ 80%) và có 2 mẫu cho kết quả dương tính, chiếm tỷ lệ 20%. Như vậy, kỹ thuật ELISA phát hiện được 8/10 mẫu âm tính thật và 02 dương tính giả.
Từ kết quả thử nghiệm trên, chúng tôi xác định được độ nhạy và độ đặc hiệu của kỹ thuật ELISA so với kết quả phân tích kiểu hình lần lượt là 90% và 80%.
Phần 5
KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. Kết luận
Từ các kết quả nghiên cứu trên, chúng tôi đưa ra một số kết luận sau:
1. Đã thu thập được 20 mẫu cam, quýt phục vụ cho nghiên cứu trong đó có 10
mẫu có kiểu hình bị bệnh và 10 mẫu có kiểu hình không bị bệnh tristeza.
2. Đã xây dựng được quy trình kỹ thuật ELISA phát hiện virus gây bệnh tristeza trên cây có múi. Quy trình có giới hạn phát hiện là sử dụng 200 µl mẫu có độ pha loãng 8 lần.
3. Đã thử nghiệm quy trình kỹ thuật ELISA trên 20 mẫu cam quýt. Kết quả thử
nghiệm cho thấy, độ nhạy và độ đặc hiệu của kỹ thuật ELISA lần lượt là 90% và 80% so với kết quả phân tích kiểu hình.
5.2. Kiến nghị
Do thời gian có hạn, đề tài còn nhiều nội dung cần tiếp tục nghiên cứu:
- Cần xác định giới hạn phát hiện của kỹ thuật ELISA theo nồng độ của kháng nguyên virus trong mẫu phân tích.
- Cần thử nghiệm kỹ thuật ELISA với số lượng mẫu lớn hơn để xác định chính
xác độ nhạy và độ đặc hiệu của kỹ thuật so với kết quả phân tích kiểu hình. - Cần nghiên cứu xác định kết quả ELISA bằng máy đọc ELISA.
TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tiếng Việt
1. Bộ Nông Nghiệp và Phát Triển Nông Thôn (2020), Tổng diện tích cây ăn quả phân theo địa phương, Số liệu trồng trọt.
2. Nguyễn Minh Châu (2012). Quản lý tổng hợp bệnh vàng lá greening trên cây
có múi ớ các tỉnh phía Nam Việt Nam, Bệnh virus hại thực vật ở Việt Nam 2: 264-277.
3. Bùi Huy Đáp (1960), Cây ăn quả nhiệt đới, tập (1), Nxb. Nông Thôn. 4. La Việt Hồng, Chu Hoàng Hà, Đặng Thị Hương, Lâm Đại Nhân (2011), Nghiên cứu cấu trúc di truyền của một số dòng citrus tristeza gây bệnh trên
cây ăn quả chi Citrus ở Việt Nam. Tạp chí Khoa học Trường ĐHSP Hà Nội 2, 16: 117-126, Hà Nội.
5. Hoàng Thị Thủy (2015). Nghiên cứu đặc điểm sinh học và một số biện pháp kỹ thuật đối với nguồn thực liệu tạo quả không hạt cây có múi. Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp.
6. Hà Minh Trung (2006), Hoàn thi ện công nghệ sản xuất cây có mùi đặc (cam, quýt, bưởi) sạch bệnh greening và các bệnh virus khác ở các tính phía Bắc,
Kỷ yếu Hội nghị tổng kết khoa học và công nghệ nông nghiệp. Nhà xuất bản Nông nghiệp, 190- 205.
7. Hoàng Văn (1/2021), Cây ăn quả có múi mang lại giá trị kinh tế cao, Tạp chí Kinh tế nông thôn.
II. Tiếng Anh
8. Ahmad M. H., A. R. J. Eaglesham A.R.J., and Hassouna S. (1981).
Examining serological diversity of “cowpea” rhizobia by the ELISA technique.
Archives of Microbiology 130: 281–287.
9. Aulbach A.D., and Amuzie C.J. (2017). Chapter One - Calcium and Bone Metabolism Indices. Advances in Clinical Chemistry 82: 1-46.
10. Bar-Joseph M., Garnsey S.M., Gonsalves D., Moscovitz M., Punrcifull D.E., Clark M.F. và Loebenstein G. (1979). The use of Enzyme – linked
Immunosorrbenrt assay for detection of citrus tristeza virus .
Phytopathology 69: 190-194.
11. Berk Z. (2016). Diseases and pests. In Citrus Fruit Processing, Academic Press. 83-93.
12. Borah M., Nath P.D. và Saikia A.K. (2014). Biologycal and serological techniques for detection of citrus tristeza virus affecting Citrus species of Assam, India. African Journal of Agricultural Research 9 (52): 3804-3810.
13. Cambra M., Goriris M.T., Marroquin C., Roman M.P. Olmos A.O., Martinez M.C., Hermoso de Mendoza A. Lopez A. and Navarro L. (2000). Incidence and epidemiology of Citrus tristeza virus in the Valencian Community of Spain. Virus Research 71 (1–2): 85-95.
14. Castillo J., Martí M.R., Gowda S., Hilf E.M., Garnsey S.M., and Dawson W.O. (1997). Kinetics of Accumulation of Citrus Tristeza Virus RNAs. Virology
228 (1): 92-97.
15. Cheng C.M., Martinez A.W., Jinlong Gong, Mace C.R., Phillips S.T., Carrilho E., Mirica K.A., Whitesides G.M. (2010). Paper-Based ELISA. Angewandte Chemie 49 (28): 4771-4774.
16. Domínguez A., Guerri J., Cambra M., Navarro L., Moreno P., and Peña L. (2000). Efficient production of transgenic citrus plants expressing the coat protein gene of citrus tristeza virus. Plant Cell Reports 19: 427–433.
17. Gmitter F.G., and Hu X. (1990). The possible role of Yunnan, China, in the origin of contemporary citrus species (Rutaceae). Economic Botany 44: 267–277. 18. Gutherie H. and Picciano M. (1995). Human nutrition. St Louis, MO, USA, Mosby.
19. Knight A.R., Taylor E.L., Lukaszewski R., Jensen K.T., Jones H.E., Carré J.E.,
Isupov M.N., Littlechild J.A. (2018). A high-sensitivity electrochemiluminescence-based ELISA for the measurement of the oxidative stress biomarker, 3-nitrotyrosine, in human blood serum and cells. Free Radical Biology and Medicine 120: 246-254.
20. Moreno P., Ambrós S., Albiach-Marti M.R., Guerri J., and Peña L. (1957). Tristeza virus of citrus: a pathogen that changed the course of the citrus industry. Molecular Plant Pathology 9 (2): 251–268.
21. Reuther W., Batchelor L.D., Webber H.J., et al (1967). The Citrus Industry Volume I: History, World Distribution, Botany, and Varieties . CAB Direct 190– 430.
22. Steinitz M. (2000). Quantitation of the Blocking Effect of Tween 20 and Bovine Serum Albumin in ELISA Microwells. Analytical Biochemistry 282 (2): 232-238.
23. Tanaka Tyozaburo (1969). Taxonomic Problem of Citrus Fruits in the Orient. Bulletin of the University of Osaka. 21: 133-138.
24. Thaitrong N., Charlermroj R., Himananto O., Seepiban C., and Karoonuthaisiri N. (2013). Implementation of microfluidic sandwich ELISA for superior detection of plant pathogens. PLoS One 8 (12): 1-9.
25. United States Department of Agriculture (2021). Citrus: World Markets and Trade. Foreign Agricultural Service.
26. Vela C., Cambra M., Cortés E., Moreno P., Miguet J.G., Pérez De San Román C., and Sanz A. (1986). Production and characterization of monoclonal antibodies specific for citrus tristeza virus and their use for diagnosis. Journal Of General Virology 67 (1): 91-96.
27. Walker H.K., Hall W. D. and Hurst J. W. (1990) Clinical methods: The history,
physical, and laboratory examinations”. 3rd edition. Butterworth Publishers. ISBN-10: 0-409-90077-X.
28. Whitney E. and Rolfes S. (1999). Understanding nutrition. Belmont, Ca., USA, West/Wadsworth. Eighth ed.
29. Xiao Y. and Isaacs S.N. (2012). Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) and Blocking with Bovine Serum Albumin (BSA) - Not all BSAs are alike. Journal of immunological methods 384 (1-2): 148–151.