Thu thập mẫu lá cây vi ghép, tiến hành tách chiết DNA tổng số theo phương pháp của Dolye và cộng sự năm 1987 với sự biến đổi nhỏ để phù hợp với phòng thí nghiệm. Các bước tách chiết DNA tổng số như sau:
-Cắt nhỏ mẫu lá, chuyển vào ống effendorf loại 2,0 ml sạch, vô trùng. -Bổ sung 1ml lysis buffer + 2 viên bi sắt, chuyển vào máy đồng hóa mẫu. Tiến hành đồng hóa mẫu với 6 chu kỳ, mỗi chu kỳ 4.000 vòng/phút trong 30 giây để thu được dạng dung dịch.
-Ủ mẫu đã đồng hóa ở 65°C trong 1h, cứ 10 phút đảo trộn mạnh bằng máy vortex 1 lần.
-Ly tâm ở tốc độ 12.500 vòng/phút trong 10 phút, thu 600 µl dịch nổi sáng ống eppendorf loại 2ml mới, vô trùng.
-Bổ sung 600 µl dung dịch hỗn hợp phenol: clorofome: isoamin alcohol (theo tỷ lệ 25:24:1, v:v:v), lắc đều.
-Ly tâm ở tốc độ 12.000 vòng/phút trong 10 phút. Thu dịch nổi sang ống eppendorf loại 1,5 ml mới, vô trùng.
-Bổ sung 50µl dung dịch sodium acetate 5M (pH = 5,5) và 500 µl dung dịch isopropanol, đảo trộn nhẹ nhàng.
-Ủ mẫu ở -20°C trong vòng tối thiểu 2h hoặc qua đêm.
-Ly tâm ở tốc độ 12.000 vòng/phút trong 30 phút, loại bỏ dịch nổi, thu cặn. -Bổ sung 1.000µl cồn 70%, đảo trộn bằng máy vortex, ly tâm 12.000 vòng/phút trong 2 phút, loại bỏ cồn 70%.
-Mở nắp effendorf để bay hơi hoàn toàn cồn trong điều kiện phòng thí nghiệm.
-Bổ sung 200µl dung dịch đệm TE 1% đảo trộn nhẹ. Để DNA hòa tan tự nhiên ở nhiệt độ phòng hoặc ủ ở 70oC nếu cần hòa tan nhanh.
-Kiểm tra sản phẩm tách chiết DNA tổng số bằng điện di trên gel agarose 1,0%.