3. Nội dung nghiên cứu
3.1. Tách RNA tổng số từ các mẫu chè nghiên cứu
Tất cả các nghiên cứu trên gen đều được bắt đầu từ việc tách chiết một trong hai loại nucleic acid, đó là DNA và RNA. Sản phẩm tách chiết phải đảm bảo một số yêu cầu: tinh sạch, ít bị đứt gãy hay bị phân hủy bởi các tác nhân hóa học hay cơ học, lượng axit nucleic thu được phải đủ lớn đảm bảo cho việc tiến hành các thí nghiệm tiếp theo.
Phân tử RNA không bền, dễ bị phân hủy bởi các enzyme RNase. Hơn nữa, RNase có mặt ở khắc nơi, có hoạt tính cao và rất bền vững với các tác nhân thường dùng để loại bỏ enzyme (việc xử lý nhiệt ở 90oC trong 1 giờ không làm mất hoạt tính RNase). Vì những lý do đó, việc tách chiết RNA đòi hỏi sự thận trọng để tránh mọi tạp nhiễm bởi các RNase từ môi trường: thao tác trong điều kiện vô trùng, mọi dụng cụ, hóa chất đều được khử trùng bằng nhiệt hay DEPC, tránh mọi tiếp xúc với dụng cụ bằng tay trần. Trong nghiên cứu này, chúng tôi tiến hành tách RNA tổng số từ lá 2 mẫu chè Trung du: Trung du xanh và tím theo quy trình tách chiết của bộ kit tách RNA thực vật GeneJET Plant RNA Purification Kit của hãng Thermo Scientific. Mỗi mẫu lại tách RNA tổng số ở 2 trạng thái bảo quản mẫu khác nhau: mẫu tươi và mẫu bảo quản trong RNAlater. Kết quả tách RNA tổng số được điện di kiểm tra trên gel agarose 1% (Hình 3.1) và đo kiểm tra nồng độ bằng máy đo quang phổ (Bảng 3.1).
Hình 3.1. Kết quả điện di kiểm tra sản phẩm tách chiết RNA tổng số
Các mẫu điện di: 1. chè Trung du tím (RNAlater); 2. chè Trung du xanh (RNAlater); Maker (thang chuẩn 1kb); 4. chè Trung du tím; 5. chè Trung du xanh
Qua hình ảnh điện di cho thấy mẫu RNA tổng số tách được xuất hiện các băng đặc trưng cho rRNA. Các mẫu chè Trung du tím (RNAlater), chè Trung du tím và chè Trung du xanh trên ảnh điện di xuất hiện nhiều băng có kích thước khác nhau, vì thế có chứa RNA tổng số tuy nhiên lại xuất hiện băng sáng phía trên cùng chứng tỏ mẫu bị lẫn DNA tổng số. Các mẫu chè Trung du xanh (RNAlater) không thấy rõ các băng sáng có thể do lượng RNA quá ít.
Bảng 3.1. Kết quả kiểm tra nồng độ RNA tổng số từ các mẫu chè Trung Du Mẫu chè Nồng độ (ng/µl) A260/A280
Chè tím (RNAlater) 723.2 2.07
Chè xanh (RNAlater) 161.9 1.93
Chè tím 704.6 2.03
Đồng thời kết quả đo OD cho thấy, mẫu RNA tách được có nồng độ và độ sạch cao. Điều này chứng tỏ rằng các mẫu RNA tổng số tách được khá nguyên vẹn, đảm bảo chất lượng các thí nghiệm sau. Các mẫu RNA tổng số lá chè được bảo quản trong tủ - 70 oC.