3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN
2.2.4. xuất biện pháp khống chế dịch cúm gia cầm
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.3.1. Phương pháp nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ của bệnh cúm gia cầm ở tỉnh Quảng Ninh giai đoạn 2015 - 7/2020
2.3.1.1. Phương pháp điều tra hồi cứu
Phương pháp điều tra hồi cứu được sử dụng nhằm thu thập, tổng hợp thông tin từ các Trạm thú y, Chi cục Chăn nuôi và Thú y Quảng Ninh, Cục thú y về tình hình chăn nuôi gia cầm, diễn biến dịch cúm gia cầm, kết quả tiêm phòng vacxin, kết quả xét nghiệm giám sát huyết thanh sau tiêm phòng. Từ đó đánh giá được hiệu quả của việc tiêm phòng vacxin cúm trên thực địa của tỉnh Quảng Ninh.
2.3.1.2. Phương pháp phân tích dịch tễ học
Phương pháp phân tích dịch tễ học được dùng để đánh giá một số đặc điểm dịch tễ của bệnh cúm gia cầm trên địa bàn tỉnh Quảng Ninh.
2.3.2. Phương pháp xác định tỷ lệ tiêm phòng vacxin cúm gia cầm và theo dõi độ an toàn sau tiêm độ an toàn sau tiêm
2.3.2.1. Phương pháp xác định tỷ lệ tiêm phòng vacxin cúm gia cầm
Căn cứ vào báo cáo tình hình chăn nuôi tại các huyện, thành, thị trên địa bàn tỉnh Quảng Ninh, kế hoạch và kết quả tiêm phòng hằng năm của Chi cục Chăn nuôi và Thú y để xác định chỉ tiêu này.
2.3.2.2. Phương pháp theo dõi độ an toàn sau tiêm phòng vacxin cúm gia cầm
Sau tiêm phòng vacxin cúm cho đàn gia cầm đợt 1 nửa đầu năm 2020 tại 5 địa phương thuộc tỉnh Quảng Ninh (Thành phố Hạ Long, Thành phố Uông Bí, huyện Bình Liêu, huyện Đầm Hà và huyện Hải Hà), tiến hành lựa chọn khoảng 300 gia cầm tại mỗi huyện, thành và kết hợp với chủ hộ chăn nuôi để theo dõi phản ứng sau tiêm phòng vacxin H5N1 Navet-vifluvac. Nếu gia cầm không xuất hiện bất cứ phản ứng nào khác thường thì kết luận là an toàn; nếu gia cầm có phản ứng như chậm chạp, ủ
rũ, kém ăn hoặc chết thì kết luận là vacxin không an toàn.
2.3.3. Phương pháp lấy mẫu và bảo quản
* Mẫu huyết thanh
Đối tượng lấy mẫu huyết thanh là gà, vịt được tiêm vacxin H5N1 Navet- vifluvac đang nuôi tại tỉnh Quảng Ninh.
Nhổ hết lông tại vị trí lấy máu (mặt dưới cánh). Sát trùng bằng cồn 700 cho nổi rõ tĩnh mạch cánh. Dùng bơm tiêm loại 5ml, chọc kim vào tĩnh mạch theo chiều hướng đầu kim vào phía trong cơ thể gia cầm, lấy từ 2 - 3 ml máu/con, sau đó kéo dài pittong ra đến 5 ml bẻ gập đầu kim, đậy nắp kim lại, để nghiêng cho máu đông tự nhiên, chắt lấy huyết thanh.
* Bảo quản mẫu
Mẫu gửi phải đặt trong hộp bảo quản có nhiệt độ từ 2 - 8ºC trong quá trình vận chuyển. Phiếu gửi bệnh phẩm, danh sách mẫu kèm theo phải ghi rõ ràng, đầy đủ các thông tin cung cấp cho phòng xét nghiệm và phải đựng trong một túi ni lông khác tách biệt với mẫu bệnh phẩm, tránh gây ướt làm thông tin không chính xác.
Mẫu bệnh phẩm gia cầm được Chi cục Chăn nuôi và Thú y tỉnh Quảng Ninh gửi đến cơ quan Thú y vùng II - Hải Phòng để chẩn đoán. Tại đây mẫu được bảo quản ở nhiệt độ -20°C.
2.3.4. Phương pháp nghiên cứu đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch của đàn gà, vịt sau tiêm vacxin H5N1 Navet-vifluvac gà, vịt sau tiêm vacxin H5N1 Navet-vifluvac
2.3.4.1. Bố trí thí nghiệm
Giám sát đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch sau tiêm phòng mũi 1: Sau khi tiêm phòng vacxin H5N1 Navet-vifluvac mũi 1 cho gà, vịt tại các huyện, thành, thị thuộc tỉnh Quảng Ninh đợt tháng 9/2019, tiến hành lựa chọn 5 hộ gia đình nuôi gà và 5 hộ gia đình nuôi vịt thuộc 5 địa phương (Hạ Long, Uông Bí, Bình Liêu, Đầm Hà và Hải Hà), tách riêng đàn 30 gà và 30 con vịt được tiêm phòng để theo dõi lấy mẫu giám sát sau tiêm phòng. Tiến hành lấy mẫu tại các thời điểm 30, 60, 90, 120 và 150 ngày sau tiêm phòng để xác định chỉ tiêu này.
Giám sát đáp ứng miễn dịch và độ dài miễn dịch sau tiêm phòng mũi 2 (tiến hành tương tự mũi 1): Sau khi tiêm phòng vacxin H5N1 Navet-vifluvac mũi 2 cho
gà, vịt tại các huyện, thành, thị thuộc tỉnh Quảng Ninh đợt tháng 3-4/2020, tiến hành lựa chọn 5 hộ gia đình nuôi gà và 5 hộ gia đình nuôi vịt thuộc 5 địa phương (Hạ Long, Uông Bí, Bình Liêu, Đầm Hà và Hải Hà), tách riêng đàn 30 gà và 30 con vịt được tiêm phòng để theo dõi lấy mẫu giám sát sau tiêm phòng. Tiến hành lấy mẫu tại các thời điểm 30, 60, 90, 120 và 150 ngày sau tiêm phòng để xác định chỉ tiêu này.
2.3.4.2. Giám sát huyết thanh
- Đánh giá đáp ứng miễn dịch của các đàn gà nuôi tại một số huyện đã được tiêm vacxin H5N1 Navet-vifluvac tại các thời điểm sau khi tiêm là 30 ngày, 60 ngày, 90 ngày, 120 ngày và 150 ngày. Đàn gà thí nghiệm là đàn gà của hộ gia đình trong tỉnh do thú y cơ sở tiêm phòng và được nuôi dưỡng, chăm sóc như các đàn gà khác trên địa bàn tỉnh.
- Đánh giá đáp ứng miễn dịch của các đàn vịt trong tỉnh đã được tiêm vacxin H5N1 Navet-vifluvac tại các thời điểm sau khi tiêm là 30 ngày, 60 ngày, 90 ngày, 120 ngày và 150 ngày (đến khi vacxin không còn khả năng bảo hộ). Đàn vịt thí nghiệm là đàn vịt của hộ gia đình trong tỉnh do thú y cơ sở tiêm phòng và được nuôi dưỡng, chăm sóc như các đàn vịt khác trên địa bàn tỉnh.
2.3.4.3. Giám định virus phân lập bằng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu HI
Theo hướng dẫn của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn (2005), cách tiến hành phản ứng HI như sau:
* Nguyên lý:
Virus cúm gia cầm có đặc tính gây ngưng kết hồng cầu một số loài gia súc, gia cầm. Nếu gặp kháng thể đặc hiệu tương ứng thì virus bị kháng thể đặc hiệu trung hoà, không còn virus để tiếp xúc với hồng cầu hay nói cách khác kháng thể đã ngăn trở sự ngưng kết hồng cầu của virus. Còn nếu virus không gặp kháng thể đặc hiệu tương ứng, virus sẽ không bị trung hoà và virus sẽ làm hồng cầu ngưng kết lại với nhau.
* Chuẩn bị kháng nguyên
- Chuẩn bị kháng nguyên: là kháng nguyên của virus cúm, loại serotyp virus cúm cần cho yêu cầu kiểm tra.
- Kháng nguyên được chuẩn độ bằng phản ứng HA.
- Pha kháng nguyên 4 HA/25μl: lấy độ pha loãng cuối cùng có phản ứng ngưng kết hồng cầu chia cho 4.
Ví dụ: Hiệu giá HA của kháng nguyên (dịch niệu mô) là 1/127. Đơn vị 4 HA = 127: 4 = 32
Như vậy sẽ trộn 1 phần kháng nguyên (nước trứng) với 31 phần PBS để đạt được dung dịch kháng nguyên 4 HA.
- Chuẩn độ kháng nguyên 4 HA: sau khi pha, kháng nguyên 4HA phải được chuẩn độ lại.
Tiến hành:
+ Cho 25μl PBS vào giếng A1 - C6.
+ Cho 25μl kháng nguyên đã pha vào các lỗ A1 đến C1.
+ Pha loãng kháng nguyên từ cột 1 đến cột 5, sau đó bỏ đi 25μl. + Đối chứng ở cột 6 (gồm PBS và hồng cầu).
+ Cho 25μl PBS vào các lỗ của đĩa (từ A1 - C6).
+ Cho 25μl hồng cầu gà 1% vào các lỗ của đĩa (từ A1 - C6).
+ Lắc đều ở nhiệt độ phòng 30 phút. Đọc kết quả khi hồng cầu ở cột đối chứng lắng hoàn toàn.
Đọc kết quả:
+ Pha chuẩn: kết quả ngưng kết xảy ra ở 2 giếng đầu. + Pha không chuẩn:
Kháng nguyên đặc: nếu ngưng kết đến giếng thứ 3 là thừa kháng nguyên. Như vậy, kháng nguyên HA phải được pha loãng (có thể gấp đôi) để có ngưng kết ở giếng thứ 2.
Kháng nguyên loãng: nếu ngưng kết ở giếng thứ 1 tức là thiếu kháng nguyên, có thể thêm một lượng kháng nguyên (bằng lượng kháng nguyên pha ban đầu) để có ngưng kết ở giếng thứ 2.
* Tiến hành phản ứng HI
Dùng đĩa ngưng kết 96 lỗ chữ V. Ghi mẫu huyết thanh cần kiểm tra và subtyp virus đưa vào phản ứng lên đĩa ngưng kết.
- Cho 25μl PBS vào tất cả các lỗ trên đĩa.
- Cho 25μl huyết thanh kiểm tra vào các lỗ từ A1 - H1 (cột 1).
Pha loãng huyết thanh: pha loãng huyết thanh theo cơ số 2 bằng cách lấy 25μl huyết thanh từ cột 1 chuyển sang cột 2 trộn đều với PBS của lỗ, sau đó lại chuyển 25μl từ cột 2 sang cột 3 cứ làm như vậy huyết thanh được pha loãng đến cột 11 thì hút bỏ đi 25μl huyết thanh. Cột 12 dùng làm đối chứng.
- Nhỏ 25μl kháng nguyên 4HA đã chuẩn bị vào các giếng từ giếng 1 đến 11. Thêm 25μl PBS vào hàng đối chứng hồng cầu (giếng 12).
- Lắc đĩa và ủ ở nhiệt độ phòng 30 phút.
Nhỏ 25μl dung dịch hồng cầu gà (1%) vào tất cả các giếng trong đĩa, lắc đều. Để ở nhiệt độ phòng 40 phút. Đọc kết quả.
Đọc kết quả:
Phản ứng âm tính (-): nếu không có hiện tượng ngưng kết xảy ra. Phản ứng dương tính (+):nếu hồng cầu lắng xuống đáy giếng chữ V.
Hiệu giá HI của mẫu được tính ở độ pha loãng huyết thanh cao nhất còn có hiện tượng ngăn trở ngưng kết hồng cầu. Tức là, virus phân lập và kháng huyết thanh chuẩn tương ứng với nhau.
Theo quy định số 1361/TY - DT ngày 02/12/2005 của Bộ Nông nghiệp và PTNT (2005), ngưỡng bảo hộ hiệu giá (HI) = 4 log2.
Kháng thể cao hiệu giá ≥ 4 log2
Không được bảo hộ hiệu giá < 4 log2
- Cách tính hiệu giá kháng thể: Hiệu giá HI của mẫu được tính ở độ pha loãng huyết thanh cao nhất vẫn còn khả năng ngăn trở ngưng kết hồng cầu hoàn toàn. Độ pha loãng huyết thanh theo cơ số 2.
- Mẫu huyết thanh sau khi tiêm vacxin cúm gia cầm có HGKT ≥ 4log2 được coi là dương tính.
2.3.5. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu được được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện và cs., 2008), trên phần mềm Excel 2010.
Chương 3
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC ĐIỂM DỊCH TỄ CỦA BỆNH CÚM GIA CẦM Ở TỈNH QUẢNG NINH CÚM GIA CẦM Ở TỈNH QUẢNG NINH
3.1.1. Xác định sự phân bố bệnh cúm gia cầm tại các huyện, thành, thị của tỉnh Quảng Ninh từ năm 2015 - 7/2020 Quảng Ninh từ năm 2015 - 7/2020
Tiến hành điều tra dịch cúm trên đàn gia cầm của Quảng Ninh trong giai đoạn 2015 - 7/2020, thấy dịch cúm gia cầm xảy ra vào tất cả các năm điều tra. Tuy nhiên, mỗi năm dịch cúm gia cầm lại xảy ra ở các địa phương khác nhau và với quy mô lớn nhỏ khác nhau. Diễn biến cụ thể của dịch cúm gia cầm tại các địa phương thuộc tỉnh Quảng Ninh được thể hiện qua bảng 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả xác định sự phân bố bệnh cúm gia cầm tại các huyện, thành, thị của tỉnh Quảng Ninh từ năm 2015 - 7/2020 Địa phương điều
tra (Huyện, thành, thị)
Số xã xảy ra dịch cúm gia cầm Số năm có dịch tại các địa phương 2015 2016 2017 2018 2019 7/2020 Ba Chẽ 1 1 - - - - 2/6 Bình Liêu - - - - - - 0 Cẩm Phả - - - - - - 0 Đầm Hà - 1 - - - 1 2/6 Hải Hà 1 1 2 - 1 - 4/6 Đông Triều - - - - - - 0 Quảng Yên - 2 2 1 - - 3/6 Hạ Long - - - - - - 0 Hoành Bồ - - - - - - 0 Uông Bí - - - - - - 0 Móng Cái - - 1 2 - 1 3/6 Vân Đồn - - - - - - 0 Tiên Yên - - - 1 1/6 Cô Tô - - - - - - 0 Tổng số xã có dịch trong năm 2 5 5 3 1 3
Kết quả bảng 3.1 cho thấy: Dịch cúm gia cầm xảy ra ở 6/14 địa phương của tỉnh Quảng Ninh bao gồm: huyện Ba Chẽ, huyện Đầm Hà, huyện Hải Hà, thị xã Quảng Yên, huyện Tiên Yên và thành phố Móng Cái. Trong 5 năm điều tra, dịch cúm gia cầm xuất hiện lẻ tẻ tại các huyện, thành của tỉnh Quảng Ninh, cụ thể:
* Tính theo năm:
Năm 2015: dịch cúm gia cầm xảy ra trên dần gia cầm của 2/14 địa phương của tỉnh Quảng Ninh, đó là huyện Ba Chẽ và huyện Hải Hà. Dịch đã được ghi nhận tại 2 xã thuộc 2 huyện nói trên.
Năm 2016: Dịch cúm gia cầm xảy ra với quy mô rộng hơn năm 2015. Dịch xảy ra tại 4/14 địa phương của tỉnh, bao gồm: huyện Ba Chẽ, huyện Đầm Hà, huyện Hải Hà và thị xã Quảng Yên. Dịch đã được ghi nhận tại 5 xã thuộc 4 huyện; tăng 3 xã so với năm 2015.
Năm 2017: Dịch cúm gia cầm vẫn tiếp tục xảy ra tại huyện Hải Hà và thị xã Quảng Yên; xuất hiện thêm ổ dịch mới tại Thành phố Móng Cái, ghi nhận 5 xã có gia cầm bị cúm.
Năm 2018: tại thị xã Quảng Yên và Thành phố Móng Cái, dịch cúm gia cầm vẫn tiếp tục xảy ra, ghi nhận 3 xã có gia cầm bị cúm.
Năm 2019: Theo báo cáo của Chi cục Chăn nuôi và Thú y, dịch cúm gia cầm xảy ra tại 3/14 địa phương của tỉnh Quảng Ninh, đó là huyện Hải Hà, huyện Tiên Yên và Thành phố Móng Cái. Tại các địa phương, dịch cúm gia cầm được phát hiện và không chế rất kịp thời nên ngay khi bệnh xảy ra đã được các cơ quan chức năng khoanh vùng và dập dịch tránh lây lan rộng.
Đầu năm 2020: Dịch cúm gia cầm tiếp tục xảy ra tại huyện Đầm Hà, huyện Tiên Yên và thành phố Móng Cái; tại mỗi huyện, thành nói trên, bệnh chỉ xảy ra tại 1 hộ gia đình sau đó được khoanh vùng và dập dịch kịp thời nên dịch không lây lan trên diện rộng. Từ tháng 2 - 7/2020 không có ổ dịch cúm gia cầm nào xảy ra trên địa bản tỉnh Quảng Ninh.
* Tính chung theo địa phương (huyện, thành, thị): Trong các năm xảy ra dịch cúm gia cầm, có địa phương xảy ra dịch trong 4/5 năm điều tra, có địa phương xảy
ra dịch trong 3 năm, 2 năm, 1 năm và có địa phương không thấy xảy ra dịch cúm gia cầm trong suốt 6 năm, cụ thể:
Huyện Hải Hà là địa phương xảy ra dịch cúm gia cầm thường xuyên nhất qua các năm điều tra (4/6 năm có dịch). Dịch xảy ra liên tục trong các năm 2015, 2016, 2017 và 2019.
Thị xã Quảng Yên và thành phố Móng Cái là 2 địa phương có 3/6 năm điều tra xuất hiện dịch cúm gia cầm. Tại thị xã Quảng Yên, dịch xuất hiện liên tiếp trong 3 năm từ 2016 - 2018. Tại thành phố Móng Cái dịch xảy ra vào năm 2017, 2018 và nửa đầu năm 2020.
Trong 6 năm điều tra, huyện Ba Chẽ và huyện Đầm Hà ghi nhận dịch cúm gia cầm xảy ra trong 2 năm. Dịch cúm gia cầm xảy ra trong năm 2011 và 2012 tại huyện Ba Chẽ; trong năm 2016 và 2020 tại huyện Đầm Hà.
Huyện Tiên Yên sau 5 năm không xuất hiện dịch cúm trên đàn gia cầm, đến đầu năm 2020, dịch xảy ra tại 1 hộ gia đình trên đàn gà 900 con.
Như vậy, diễn biến dịch không có tính chất chu kỳ mà có thể kéo dài liên tục nhiều năm tại một huyện, thành. Đồng thời, có thể thấy dịch cúm gia cầm tại Quảng Ninh trong giai đoạn 2016 - 2018 diễn ra khá phức tạp với quy mô lớn hơn so với 2 năm còn lại. Năm 2019, nửa đầu 2020 do đã thực hiện tốt các phương pháp phòng chống dịch nên khi có dịch xảy ra thì chủ hộ chăn nuôi đã kịp thời báo cáo với cơ quan chức năng để phối hợp khoanh vùng và dập dịch nên dịch chỉ xảy ra với quy mô nhỏ tại duy nhất 1 hộ gia đình.
Năm 2017, Hoàng Thị Ngọc Lan cũng đã nghiên cứu về bệnh cúm gia cầm tại tỉnh Quảng Ninh giai đoạn 2013 - 2017 và cho biết, trong tất cả các năm điều tra, năm nào tại Quảng Ninh cũng xảy ra dịch cúm gia cầm, tuy nhiên đợt dịch năm 2013 là gây thiệt hại nặng nề nhất cho ngành chăn nuôi gia cầm tại Quảng Ninh.
3.1.2. Tình hình bệnh cúm gia cầm giai đoạn 2015 - 7/2020
Tiến hành điều tra tỷ lệ gia cầm mắc bệnh cúm H5N1 trên địa bàn tỉnh Quảng Ninh từ năm 2015 đến tháng 7/2020, kết quả trình bày tại bảng 3.2.