QUY TRÌNH KỸ THUẬT

II. NUƠI CẤY TẾ BÀO THANH HAO

QUY TRÌNH KỸ THUẬT

NUƠI CẤY DỊCH HUYỀN PHÙ TẾ BÀO THANH HAO TRONG MƠI TRƯỜNG LỎNG TRONG MƠI TRƯỜNG LỎNG

Bước Tên Thời

gian (ngày)

Diễn giải

1 Tạo mơ sẹo 30 -Nguyên liệu: lá cây cấy mơ (1x1cm)

-Lá được nuơi cấy trên mơi trường tạo mơ sẹo và được đặt trong tối: LV + BA (0,5mg/l) + NAA (0,5mg/l)

-Hệ số tăng sinh mơ sẹo 10-12 lần

-Mơ sẹo hình thành sau 30 ngày nuơi cấy 2. Cấy truyền

mơ sẹo

21 -Nguyên liệu: mơ sẹo kích thước 3-4mm cĩ trọng lượng tươi 100mg

-Mơ sẹo được nuơi cấy trên mơi trường cấy truyền mơ sẹo và được đặt trong tối: LV + BA (0,5mg/l) + NAA (0,5mg/l)

-Hệ số tăng sinh mơ sẹo 4-5 lần sau 30 ngày nuơi cấy. Mơ sẹo được cấy truyền sau 21 ngày nuơi cấy trên cùng mơi trường

3. Tạo dịch dhp tế bào

21 -Nguyên liệu: 1g mơ sẹo được cấy vào bình tam giác 300ml (chứa 50ml mơi trường lỏng) -Mơi trường nuơi cấy tạo dhp tế bào: LV + BA (0,5mg/l) + NAA (0,5mg/l) + pepton (1g) -Dịch huyền phù tế bào được cấy truyền sau 21 ngày

4. Cấy truyền dhp tế bào

21 -Nguyên liệu: dhp tế bào (v/v 20%) -Mơi trường cấy truyền dhp tế bào: LV + NAA (0,5mg/l) + NAA (0,5mg/l) + pepton (1g/l)

-Hệ số tăng sinh dph tế bào 14-18 lần -Dhp tế bào được cấy truyền cách quản 21 ngày 5. Nuơi cấy dhp tế bào trong bioreactor 21 -Nguyên liệu: dhp tế bào 300ml + 700ml (bioreactor 1 lít)

-Mơi trường dinh dưỡng khống cơ bản LV cải tiến: LV= [NH4+/NO3- (15/45) + KH2PO4

(200mg/l) + đạm tổng số (40mM)] + NAA (0,5mg/l) + BA (0,5mg/l) + GA3 (1mg/l) + chitosan (150mg/l)

-Dhp được nuơi cấy trong 21 ngày -Ly tâm tách sinh khối (2.000rpm) 6. Chiết xuất

và tinh chế

artemisinin

3 -Quy trình kỹ thuật chiết xuất Thanh hao -Quy trình kỹ thuật tinh chế Thanh hao