III. NUƠI CẤY RỄ TƠ THANH HAO
TRONG LỎNG Bướ c Tên Th ờ
gian (ngày) Diễn giải 1 Tạo rễ chuyển gen 30 -Nguyên liệu: lá (0,3x0,3cm)
-Lá được nuơi cấy trên mơi trường B5 cĩ bổ
sung acetosyringone (AS) 100µM lây nhiễm với dịng vi khuẩn ATCC 11325 trong 2 ngày. Sau đĩ rửa sạch lá
-Lá được cấy trên mơi trường B5 + 500mg/l cefotaxime để diệt vi khẩn. Được cấy chuyển 3 lần. Thử ELISA
-Lá chuyển gen được nuơi cấy trên mơi trường B5 + NAA (0,5mg/l) để tạo rễ chuyển gen
2. Cấy truyền rễ chuyển gen trên agar
21 -Nguyên liệu: rễ chuyển gen (15-20mm) -Mơi trường nuơi cấy rễ chuyển gen: B5 + NAA (0,5mg/l)
-Hệ số tăng sinh 4-6 lần -Cấy truyền sau 21 ngày 3. Nuơi cấy rễ
chuyển gen trong lỏng
21 -Nguyên liệu: rễ chuyển gen (100mg/∆300ml) -Mơi trường MS cải tiến: [đạm nitrate
(30mM), tỷ lệ NH4+/NO3- (1/5), đường sucrose (50g/l), KH2PO4 (1,5mM), GA3 (5mg/l), NAA (0,5mg/l)]
-Hệ số tăng sinh 14-16 lần -Cấy truyền sau 21 ngày 4. Cấy truyền
rễ chuyển gen trong lỏng
21 -Nguyên liệu: rễ chuyển gen (100mg/∆300ml) -Mơi trường MS cải tiến
-Hệ số tăng sinh 14-16 lần -Cấy truyền sau 21 ngày 5. Nuơi cấy rễ
chuyển gen trong bioreactor
21 -Nguyên liệu: rễ chuyển gen (4g/ 200ml/ bioreactor bán chìm nổi)
-Mơi trường MS điều kiện: MS cải tiến + 26+2oC + 16 giờ chiếu sáng /ngày + pH=6 -Hệ số tăng sinh 14-16 lần
-Thu họach ngày thứ 21 6. Chiết xuất
và tinh chế
artemisinin
3 -Quy trình kỹ thuật chiết xuất Thanh hao -Quy trình kỹ thuật tinh chế Thanh hao
Kết luận
Mơi trường khống B5 thích hợp cho quá trình nuơi cấy phát sinh rễ. Sự phát sinh rễ mạnh mẽ với mẫu nuơi cấy là lá và nồng độ NAA (0,5mg/l). Cytokinin (BA, kinetin) và IAA, IBA khơng thích hợp cho quá trình phát sinh rễ.