C V× 100 Hàm lượng (mg/g) =
Một số hợp chất phân lập từ lá loài Sum liên (Adinandra lienii Hien & Yakovlev)
Hien & Yakovlev)
Đỗ Văn Hiệu1,2, Vũ Thị Kim Oanh3, Nguyễn Hữu Quân 4,Văn Thị Mỹ Huệ1, Phạm Hà Thanh Tùng1, Lê Nguyễn Thành3*, Hoàng Thị Minh Hiền2, Đỗ Hải Hà2
1 Trường Đại học Dược Hà Nội
2 Khoa Dược, Trường Đại học Đại Nam 3Viện Hóa sinh biển và Học viện Khoa học và Công nghệ, Viện Hàn lâm Khoa
học và Công nghệ Việt Nam
4 Đại học Sư phạm Thái Nguyên Email: lethanh@imbc.vast.vn (Ngày gửi đăng: 15/3/2021- Ngày duyệt đăng: 05/5/2021)
SUMMARY
Phytochemical study of Adinandra lienii leaves collected in Lao Cai province led to the isolation of five compounds (1 – 5) by using various chromatographies. Chemical structures of the isolates were identified by comparing their physicochemical and spectroscopic data to published values for (-)-epicatechin (1), (-)-epiafzelechin (2), ursolic acid (3), betulinic acid (4) and sitoindoside I (5). Compounds 2 and 5 were isolated from the Adinandra genus for the first time.
Từ khóa: Adinandra lienii, epicatechin, epiafzelechin, ursolic acid, sitoindosid I.
Đặt vấn đề
Chi Adinandra, họ Ngũ liệt (Pentaphylacaceae) có hơn 100 loài, trong đó có 13 loài đã được phát hiện ở Việt Nam [2]. Theo y học cổ truyền, một số loài trong chi Adinandra được sử dụng điều trị ung thư, đau dạ dày hay rắn cắn [1]. Ở Trung Quốc, loài Adinandra nitida được sử dụng từ lâu đời làm trà uống với nhiều công dụng như chống oxy hóa, chống ung thư, hạ huyết áp. Các nghiên cứu về thành phần hoá học của các loài trong chi Adinandra cho đến nay tập trung chủ yếu vào loài A. nitida và đã xác định các hợp chất thuộc nhóm triterpen, flavonoid với thành phần hoạt chất chính được xác định là camellianin A[4], [5], [6], [7]. Trong quá trình sàng lọc cây cỏ Việt Nam, chúng tôi đã phát hiện một số loài chi Adinandra có tác dụng gây độc tế bào tốt trên một số dòng tế bào ung thư. Nghiên cứu thân cành và lá loài A. hainanensis [3], [8]chúng tôi đã phát hiện loài A. hainanensis có nhiều hợp chất triterpen khác biệt so với loài A. nitida. Cây Sum liên có tên khoa học là Adinandra lienii là loài bản địa ở Việt Nam mà đến nay chưa có nghiên cứu về thành phần hóa học. Tiếp tục hướng nghiên cứu thành phần hoá học các loài thuộc chi Adinandra ở Việt Nam, 5 hợp chất (-)-epicatechin (1), (-)-epiafzelechin (2), acid ursolic (3), acid betulinic (4) và sitoindosid I (5) đã được phân lập từ lá loài A.lienii và được xác định cấu trúc hóa học.
Đối tượng và phương pháp nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu
Mẫu nghiên cứu (cành mang hoa) được thu tại Lào Cai năm 2018 và được Tiến sỹ Nguyễn Hữu Quân (Đại học Sư phạm Thái Nguyên) và GS.TS. Trần Thế Bách, Viện Sinh thái và Tài nguyên giám định tên khoa học là Adinandra lienii
Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 2021, Tập 12, Số 2, trang 40-46
41 Hien & Yakovlev, họ Ngũ liệt (Pentaphylacaceae). Mẫu tiêu bản (AL-01) được lưu giữ tại Khoa Sinh, Đại học Sư phạm Thái Nguyên.
Hóa chất, dung môi, máy móc, trang thiết bị
Dung môi, hóa chất dùng để chiết xuất, phân lập đạt tiêu chuẩn thí nghiệm. Pha tĩnh dùng trong sắc ký cột (CC): Silica gel pha thường (240-430 mesh, Merck) và silica gel pha đảo (RP18 YMC). Sắc ký lớp mỏng được thực hiện trên bản mỏng tráng sẵn (Merck 60 F254). Quan sát bằng đèn tử ngoại bước sóng 254 nm hay phun thuốc thử acid sulfuric 10 %. Phổ cộng hưởng từ nhân (NMR) được ghi trên máy Bruker AM500 FT-NMR Spectrometer, Viện Hóa học. Phổ khối lượng (ESI-MS) được đo trên máy Agilent 1260 LC/MS, Viện Hóa sinh biển.
Phương pháp nghiên cứu
Phương pháp xác định cấu trúc hóa học
Cấu trúc hóa học của các hợp chất được xác định dựa trên thông số vật lý, dữ liệu phổ khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân kết hợp so sánh với các tài liệu đã công bố.
Chiết xuất và phân lập các hợp chất
Lá cây Sum liên (A. lienii) phơi khô, xay nhỏ (2,5 kg) được ngâm chiết với methanol ở nhiệt độ phòng (10 lít/lần/24h × 3 lần). Dịch chiết được cất loại dung môi dưới áp suất giảm thu được cặn MeOH (272 g). Hòa cặn MeOH với 1 lít nước cất và chiết phân bố lần lượt với dung môi n-hexan và ethyl acetat. Cất loại dung môi hữu cơ để thu được các cặn n-hexan (78 g) và ethyl acetat (114 g). Cặn ethyl acetat (110 g) được đưa lên cột silica gel pha thường, rửa giải với hệ dung môi n-hexan/ethyl acetat (tỷ lệ ethyl acetat tăng dần từ 0-100 %) để thu được 12 phân đoạn (E1-E12).
Phân đoạn E8 (8,9 g) được phân tách trên cột silica gel pha thường với hệ dung môi CH2Cl2/ethyl acetat (9/1) thu được 10 phân đoạn (E8.1-E8.10). Phân đoạn E8.5 (166 mg) được tinh chế qua sắc ký silica gel với hệ dung môi n-hexan/ ethyl acetat (3/1) thu được hợp chất 3 (5,4 mg) và 4 (3,9 mg). Phân đoạn E8.10 (4,5 g) được đưa lên cột silica gel pha thường, rửa giải với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (9/1) thu được 10 phân đoạn E8.10.1-E8.10.10. Phân đoạn E8.10.4 (57,2 mg) được phân tách qua cột silica gel pha thường với hệ dung môi CH2Cl2/aceton (8/2) thu được chất 5 (8,3 mg). Phân đoạn E8.10.7 (126 mg) được phân tách qua cột silica gel pha thường với hệ dung môi n-hexan /aceton (8/2) thu được chất 1 (8,3 mg). Phân đoạn E9 (6,4 g) được phân tách qua cột silica gel pha thường, rửa giải với hệ dung môi CH2Cl2/MeOH (9/1) thu được 5 phân đoạn E9.1-E9.5. Phân đoạn E9.4 (780 mg) được phân tách qua cột silica gel pha đảo với hệ dung môi MeOH/H2O (1/3) thu được chất 2 (36 mg).
(-)-Epicatechin (1) chất rắn màu trắng, [α]20 D -70o (c 0,20, MeOH). ESI-MS (m/z): 291 [M+H]+. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ (ppm): 6,99 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-2′), 6,82 (1H, dd, J = 1,5, 8,0 Hz, H-6′), 6,78 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′), 5,96 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 4,83 (1H, br s, H-2), 4,19 (1H, m, H-3), 2,88 (1H, dd, J = 14,0, 4,0 Hz, H-4a), 2,75 (1H, dd, J = 14,0, 2,5 Hz, H-4b). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ (ppm): 158,0 (C-7), 157,7 (C-9), 157,4 (C-5), 145,9 (C-4′), 145,8 (C-3′), 132,3 (C-1′), 119,4 (C-6′), 115,9 (C-5′),
Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 2021, Tập 12, Số 2, trang 40-46 42 115,3 (C-2′), 100,1 (C-10), 96,4 (C-6), 95,9 (C-8), 79,8 (C-2), 67,5 (C-3), 29,2 (C-4). (-)-Epiafzelechin (2) chất rắn màu trắng, [α]20 D -40,5o (c 0,11, MeOH). ESI-MS (m/z): 275 [M+H]+. 1H-NMR (500 MHz, CD3OD) δ (ppm): 7,33 (2H, d, J = 8,5 Hz, H-2′, H-6′), 6,81 (1H, d, J = 8,5 Hz, H-3′, H-5′), 5,97 (1H, d, J = 2,0 Hz, H- 8), 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-6), 4,89 (1H, br s, H-2), 4,20 (1H, m, H-3), 2,89 (1H, dd, J = 17,0, 5,0 Hz, H-4a), 2,76 (1H, dd, J = 17,0, 3,0 Hz, H-4b). 13C-NMR (125 MHz, CD3OD) δ (ppm): 158,0 (C-9), 157,9 (C-7), 157,7 (C-5), 157,4 (C-4′), 131,6 (C-1′), 129,1 (C-2′, C-6′), 115,8 (C-3′, C-5′), 100,1 (C-10), 96,5 (C-6), 95,9 (C-8), 79,9 (C-2), 67,4 (C-3), 29,3 (C-4).
Acid ursolic (3): chất rắn màu trắng, ESI-MS: m/z 457 [M+H]+. 1H-NMR (500 MHz, CDCl3+CD3OD) δ (ppm): 5,16 (1H, t, J = 7,5 Hz, H-12), 3,12 (1H, m, H- 3), 1,01 (3H, s, H-27), 0,90 (3H, s, H-23), 0,86 (3H, d, J = 6,5 Hz, H-29), 0,85 (3H, s, H-24), 0,74 (3H, s, H-26), 0,70 (3H, s, H-25), 0,80 (3H, d, J = 6,5 Hz, H- 30). 13C-NMR (125 MHz, CDCl3+CD3OD): 180,5 (C-28), 138,0 (C-13), 125,4 (C-12), 78,8 (C-3), 55,1 (C-5), 52,7 (C-18), 47,7 (C-17), 47,5 (C-9), 41,9 (C-14), 39,3 (C-8), 39,0 (C-4), 38,8 (C-19), 38,6 (C-20), 38,5 (C-1), 36,8 (C-10), 36,7 (C-22), 32,9 (C-7), 30,6 (C-21), 27,9 (C-23), 27,9 (C-2), 26,7 (C-15), 24,1 (C- 16), 23,4 (C-27), 23,1 (C-11), 21,0 (C-30), 18,2 (C-6), 16,9 (C-29), 16,8 (C-26), 15,47 (C-25), 15,2 (C-24).
Acid betulinic (4) chất rắn màu trắng, ESI-MS: m/z 457 [M+H]+. 1H-NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 4,67 (1H, d, J = 2,0, Ha-29), 4,55 (1H, br s, Hb-29), 4,30 (1H, br s, OH-3), 2,96 (1H, m, H-3), 1,63 (3H, s, H-30), 0,92 (3H, s, H-27), 0,86 (3H, s, H-23), 0,86 (3H, s, H-25), 0,75 (3H, s, H-26), 0,64 (3H, s, H-24). 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ (ppm): 177,2 (C-28), 150,3 (C-20), 109,6 (C- 29), 76,8 (C-3), 55,4 (C-17), 54,9 (C-5), 49,9 (C-9), 48,6 (C-18), 46,6 (C-19), 42,0 (C14), 40,3 (C-8), 38,5 (C-4), 38,0 (C-1), 37,6 (C-13), 36,7 (C-10), 36,3 (C- 22), 33,9 (C-7), 31,7 (C-16), 30,1 (C-21), 29,2 (C-15), 28,1 (C-23), 27,1 (C-2), 25,1 (C-12), 20,5 (C-11), 18,9 (C-30), 18,0 (C-6), 15,9 (C-26), 15,8 (C-24), 15,7 (C-25), 14,4 (C-27).
Sistoindosid I (5) chất rắn màu trắng. ESI-MS m/z [M+H]+ 815. 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ (ppm): 5,37 (1H, m, H-6), 4,48 (1H, dd, J = 12,5, 4,5 Hz, H-6′a), 4,38 (1H, d, J = 7,5 Hz, H-1′), 4,28 (1H, br d, J = 12,5Hz, H-6′b), 3,4-3,6 (5H, m, H-3, 2′, 3′, 4′, 5′), 1,01 (3H, s, H-19), 0,92 (3H, d, J = 6,5Hz, H-21), 0,88 (3H, t,
J = 7,0Hz, Me-16″), 0,85 (3H, t, J = 7,5Hz, Me-29), 0,84 (3H, d, J = 6,5 Hz, Me- 27), 0,82 (3H, d, J = 6,5 Hz, Me-26), 0,68 (3H, s, Me-18). 13C NMR (125 MHz, CDCl3) δ (ppm): 174,7 (C-1″), 140,3 (C-5), 122,2 (C-6), 101,2 (C-1′), 79,6 (C-3), 76,0 (C-3′), 74,0 (C-5′), 73,6 (C-2′), 70,1 (C-4′), 63,2 (C-6′), 56,8 (C-14), 56,1 (C-17), 50,2 (C-9), 45,9 (C-24), 42,3 (C-13), 39,8 (C-12), 38,9 (C-4), 37,3 (C-1), 36,7 (C-10), 36,2 (C-20), 34,2 (C-2″), 34,0 (C-22), 31,9 (C-7, 8, 14″), 29,2−29,7 (C-2, 4″−13″), 28,3 (C-16), 26,1 (C-23), 25,0 (C-3″), 24,3 (C-15), 23,1 (C-28), 22,7 (C-15″), 21,1 (C-11), 19,8 (C-27), 19,4 (C-19), 19,0 (C-26), 18,8 (C-21), 14,1 (C-16″), 12,0 (C-29), 11,9 (C-18).
Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 2021, Tập 12, Số 2, trang 40-46
43 Chất 1 thu được là chất rắn màu trắng. Phổ khối ESI-MS cho pic ion giả phân tử m/z [M+H]+ 291 gợi ý 1 có công thức phân tử C15H15O6 (M=290). Phổ
1H NMR của 1 cho các tín hiệu đặc trưng của hợp chất flavanol với tín hiệu hai 2 proton vòng thơm ở vị trí meta tại δH 5,96 (1H, d, J = 2,0 Hz, H-8), 5,94 (1H, d, J
= 2,0 Hz, H-6), 3 proton thuộc hệ ABX tại δH 6,99 (1H, d, J = 1,5 Hz, H-2′), 6,82 (1H, dd, J = 1,5, 8,0 Hz, H-6′), 6,78 (1H, d, J = 8,0 Hz, H-5′) và các tín hiệu thuộc vòng pyran tại δH 4,83 (1H, br s, H-2), 4,19 (1H, m, H-3), 2,88 (1H, dd, J = 14,0, 4,0 Hz, H-4a), 2,75 (1H, dd, J = 14,0, 2,5 Hz, H-4b). Phổ 13C-NMR cho 15 tín hiệu carbon bao gồm 12 tín hiệu vòng thơm δC 95,9-158,0 ppm trong đó có các tín hiệu carbon gắn với oxy tại δC 158,0 (C-9), 157,7 (C-7), 157,4 (C-5), 145,9 (C-4′), 145,8 (C-3′), 3 tín hiệu vòng pyran tại δC 79,8 (C-2), 67,4 (C-3) và 29,2 (C-4). Tín hiệu proton H-2 xuất hiện dưới dạng singlet rộng gợi ý hai proton H-2 và H-3 ở cùng một phía, trên cơ sở các số liệu phổ NMR, MS và góc quay cực [α]20
D -70o (c 0,20, MeOH), kết hợp so sánh với tài liệu tham khảo [9], chất