trong dược liệu bẹ cây móc bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao
Đào Thị Vui1, Trần Hồng Linh1, Nguyễn Thị Phương2, Nguyễn Thị Hà Ly2, Phương Thiện Thương2
1Trường Đại học Dược Hà Nội
2Viện Dược liêu Tác giả liên hệ: daothivui@yahoo.com (Ngày gửi đăng: 19/12/2020 - Ngày duyệt đăng: 27/4/2021)
SUMMARY
A method for simultaneous quantification of 5-hydroxymethylfurfural (5-HF) and 4-hydroxybenzoic acid (4-HB) in the collar of Caryota mitis using HPLC-UV technique was developed and validated. The HPLC analysis was carried out on a Lichrospher RP-18 column at 25 oC, with mobile phase of acetonitrile and 0.1 % aqueous phosphoric acid in gradient condition, the flow rate of 0.7 mL/min, detection wavelength at 254 nm. All calibration curves displayed a good linear relationship (r2=0.999). The validation results displayed the good accuracy, repeatability, linearity, and selectivity according to the ICH guideline. The contents of 5-HF and 4- HB in the collar of Caryota mitis were determined to be 1.01 mg/g and 0.16 mg/g, respectively. The developed method could be used for determination of the quality of the collar of Caryota mitis with 5-hydroxymethylfurfural and 4-hydroxybenzoic acid as chemical markers.
Từ khóa: bẹ cây móc, Caryota mitis, acid 4-hydroxybenzoic, 5- hydroxymethylfurfural, sắc ký lỏng hiệu năng cao
Đặt vấn đề
Cây móc có tên khoa học là Caryota mitis Lour., là một loài thực vật có hoa thuộc họ Arecaceae. Ở nước ta, cây móc được tìm thấy ở nhiều địa phương. Theo y học cổ truyền, bẹ của cây móc có vị đắng chát, tính bình, được sử dụng trong các trường hợp kiết lỵ, đi ngoài ra máu, rong kinh, băng huyết và có trong một số bài thuốc cầm máu [1], [2], [3]. Cho đến nay, mới chỉ có một số ít nghiên cứu về thành phần hóa học và tác dụng sinh học của bẹ cây móc Caryota mitis Lour. [5]. Hầu hết các nghiên cứu trong nước và trên thế giới đã công bố về thành phần hoá học và tác dụng sinh học của các bộ phận khác nhau (dầu hạt, lá) từ cây Caryota mitis Lour.. [8], [9], trong đó một số chất đã được phân lập và chứng minh có tác dụng sinh học đặc trưng như rutin, quercetin, kaempferol, acid chrologenic... Qua khảo sát thực nghiệm cho thấy các chất này không thấy có (hoặc có rất ít) trong bộ phận bẹ cây móc. Từ bộ phận bẹ cây móc, nhóm nghiên cứu đã chiết xuất, phân lập và xác định cấu trúc của 02 hợp chất gồm: 5-hydroxymethylfurfural và acid 4-hydroxybenzoic. Trong 2 hợp chất này, acid 4-hydroxybenzoic là hoạt chất đã được chứng minh có một số tác dụng sinh học nhưkháng khuẩn, chống dị ứng, hạ đường huyết, chống viêm, chống kết tụ tiểu cầu, chống oxy hóa [7]. Hợp chất 5-hydroxymethylfurfural cũng được chứng minh có một số tác dụng sinh học như chống oxy hóa, chống tăng sinh [11], tuy nhiên 5- hydroxymethylfurfural còn là chất gây độc, có thể có ảnh hưởng xấu đến sức khỏe con người, được DĐVN và một số tiêu chuẩn qui định giới hạn trên trong thực phẩm, dược phẩm [6], [10], vì vậy hàm lượng 5-HF trong mẫu bẹ cây móc cũng cần được kiểm soát.
Từ những thực tiễn trên, nhóm nghiên cứu tiến hành nghiên cứu xây dựng, phát triển phương pháp HPLC-UV phân tích định lượng đồng thời các chất 5-
Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 2021, Tập 12, Số 2, trang 25-32
26 hydroxymethylfurfural và acid 4-hydroxybenzoic trong dược liệu bẹ cây móc nhằm góp phần tiêu chuẩn hóa chất lượng dược liệu, kiểm soát hàm lượng 5- hydroxymethylfurfural trong bẹ cây móc.
Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu
Đối tượng nghiên cứu là bộ phận bẹ cây móc thu hái tại huyện Chương Mỹ, Hà Nội vào tháng 11 năm 2018. Mẫu cây được xác định tên khoa học là Caryota mitis
Lour., họ Cau (Arecaceae) bởi Ths. Nghiêm Đức Trọng, Bộ môn Thực vật, Trường Đại học Dược Hà Nội. Các mẫu nghiên cứu được lưu giữ tại Bộ môn Dược lý, Trường Đại học Dược Hà Nội.
Chất đối chiếu
Hai hợp chất đối chiếu 5-hydroxymethylfurfural (ký hiệu là 5-HF) và acid 4- hydroxybenzoic (ký hiệu là 4-HB) được phân lập từ dược liệu bẹ cây móc. Thông tin về các hợp chất này được trình bày trong bảng 1. Độ tinh khiết của 2 chất 5-HF và 4- HB được xác định bởi HPLC, tính theo phần trăm diện tích pic, kiểm tra với 3 hệ dung môi khác nhau, quan sát tại các bước sóng 210 nm, 254 nm và 366 nm.
Bảng 1. Thông tin về 2 chất đối chiếu dùng trong nghiên cứu
Tên chất 5-HF 4-HB
Công thức phân tử C6H6O3 C7H6O3
Công thức cấu tạo
Dữ liệu phổ xác định cấu trúc NMR (1H, 13C); MS; IR NMR (1H, 13C); MS; IR
Độ tinh khiết 94% 95%
Hóa chất
Hóa chất, dung môi sử dụng cho HPLC như methanol (MeOH), acetonitril (ACN), acid phosphoric (H3PO4)được mua của hãng Merck (Đức). Các dung môi hóa chất dùng để xử lý mẫu đạt tiêu chuẩn tinh khiết phân tích (P.A.).
Thiết bị
Hệ thống HPLC (Shimadzu, Nhật Bản) gồm: bơm LC–20AD, bộ tiêm mẫu tự động SIL–20AHT, detector UV-VIS, Cột Lichrospher RP-18 (250 x 4,6 mm; 5µm); phần mềm Labsolution để điều khiển chương trình, truy xuất hình ảnh và số liệu trên máy HPLC.
Phương pháp nghiên cứu
Chuẩn bị các dung dịch đối chiếu 5-HF và 4-HB
Dung dịch đối chiếu 5-HF: Cân và pha chính xác một lượng chất đối chiếu 5-HF trong methanol để thu được dung dịch có nồng độ chính xác khoảng 0,4 mg/ml. Từ dung dịch này, tiến hành pha loãng bằng methanol theo các tỷ lệ khác nhau để thu được các dung dịch đối chiếu 5-HF có nồng độ lần lượt là 42,8; 32,1; 21,4; 10,7; 4,28; 2,14 µg/ml dùng để xây dựng đường chuẩn.
Dung dịch đối chiếu 4-HB: Cân và pha chính xác một lượng chất đối chiếu 4-HB trong methanol để thu được dung dịch có nồng độ chính xác khoảng 0,3 mg/ml. Từ dung dịch này, tiến hành pha loãng bằng methanol theo các tỷ lệ khác nhau để thu
Nghiên cứu Dược & Thông tin thuốc, 2021, Tập 12, Số 2, trang 25-32
27 được các dung dịch đối chiếu 4-HB có nồng độ lần lượt là 34; 25,5; 17; 8,5; 4,28; 1,7
µg/ml dùng để xây dựng đường chuẩn.
Chuẩn bị dung dịch mẫu thử
Cân chính xác một lượng bột dược liệu khoảng 1,00 g (đã nghiền thành bột) vào bình nút mài 100 ml. Thêm 50 ml methanol 80 %, lắc đều. Đun hồi lưu cách thủy ở nhiệt độ 70 oC trong 60 phút. Lọc lấy dịch qua giấy lọc vào bình định mức 50 ml, bổ sung vừa đủ thể tích bằng methanol 80 %. Lọc qua màng lọc 0,45 µm thu được dung dịch mẫu thử dùng cho phân tích sắc ký HPLC.
Thẩm định phương pháp phân tích
Phương pháp phân tích được đánh giá về tính tuyến tính, độ lặp lại, hiệu suất thu hồi, giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) theo hướng dẫn của ICH [4].
Tính kết quả