3. Nội dung nghiên cứu
3.3.1. Ảnh hưởng kết hợp giữa BAP và NAA đến phát sinh chồi và sự
NAA là chất điều hoà sinh trưởng nhân tạo, có tác dụng mạnh trong nuôi cấy mô thực vật.
Tỉ lệ auxin/cytokin rất quan trọng đối với việc hình thành hình thái của cây trong hệ thống nuôi cấy in vitro. Tỉ lệ auxin/cytokin nhỏ hơn 1 kích thích chồi phát triển [1], [2], [6], [9], [14]. Vì vậy, chúng tôi kết hợp nồng độ BAP 1,0mg/l với NAA lần lượt 0,2mg/l; 0,4mg/l; 0,6mg/l; 0,8mg/l. Sau 4, 8 tuần nuôi cấy thu được kết quả ở bảng 3.5.
Bảng 3.5. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 1,0mg/l và NAA đến sự phát sinh chồi và sinh trưởng của chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Nồng độ NAA (mg/l) Số chồi/mẫu Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi Chất lượng chồi Sau 4 tuần 0 3,63 ± 0,15 1,36 ± 0,15 2,45 ± 0,12 CT 0,2 3,81 ± 0,29 1,54 ± 0,13 4,23 ± 0,21 CT 0,4 5,63 ± 0,31 1,66 ± 0,17 4,36 ± 0,16 CT 0,6 4,24 ± 0,26 1,52 ± 0,21 4,13 ± 0,15 TB 0,8 3,93 ± 0,33 1,43 ± 0,16 3,42 ± 0,22 TB Sau 8 tuần 0 3,83 ± 0,26 2,85 ±,0,16 6,21 ± 0,21 CT 0,2 4,41 ± 0,29 2,72 ± 0,16 6,02 ± 0,15 CT 0,4 6,53 ± 0,31 2,95 ± 0,14 6,65 ± 0,17 CT 0,6 4,33 ± 0,25 2,78 ± 0,13 5,76 ± 0,12 TB 0,8 4,13 ± 0,31 1,74 ± 0,14 5,68 ± 0,13 CK
Chú thích: CT: chồi tốt; CK: chồi kém; TB: chồi trung bình.
Bảng 3.5 cho thấy, kết hợp BAP và NAA đã làm tăng hiệu quả phát sinh chồi. Số chồi/mẫu tăng cao so với đối chứng. Nếu môi trường bổ sung BAP 1,0mg/l vào môi trường nuôi cấy, số lượng chồi/mẫu tối đa 3,83 chồi. Sau khi bổ sung kết hợp BAP 1,0mg/l với NAA số chồi tăng lên rõ rệt. Kết quả sau 4 tuần nuôi cấy, trên môi trường bổ sung NAA nồng độ 0,2: 0,4; 0,6; 0,8mg/l tỉ lệ chồi/mẫu tương ứng đạt 3,81; 5,63; 4,24; 3,93. Sau 8 tuần nuôi cấy tỉ lệ này đạt 4,41; 6,53; 4,33; 3,13. Qua 2 thời điểm lấy kết quả cho thấy, công thức bổ sung BAP 1,0mg/l + NAA 0,4mg/l cho số chồi/mẫu tốt nhất đạt 6,53. Khi bổ sung NAA nồng độ 0,8mg/l thì tỉ lệ chồi/mẫu thấp hơn hẳn, chứng tỏ quá trình tạo chồi bị ức chế khi nồng độ NAA tăng cao.
Kích thước chồi ở môi trường kết hợp NAA 0,2; 0,4; 0,6mg/l đạt 2,72; 2,95; 2,78cm. Tuy nhiên, nồng độ NAA tăng 0,8mg/l thì kích thước chồi giảm chỉ còn 1,74cm. Nồng độ NAA 0,2mg/l; 0,4mg/l chất lượng chồi đảm bảo, chồi mập và xanh.
A. BAP 1,0mg/l B. BAP 1,0mg/l, NAA 0,4mg/l
Hình 3.5. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 1,0mg/l và NAA 0,4mg/l đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từđoạn thân mang mắt chồi bên
(sau 8 tuần)
Như vậy, môi trường MS bổ sung BAP 1,0mg/l và NAA 0,4mg/l + đường sucrose 30g/l + agar 8,5g/l + than hoạt tính 1g/l + nước dừa 100ml/l là thích hợp cho phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên.
3.3.2. Ảnh hưởng kết hợp giữa BAP và IBA đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi tái sinh từtừđoạn thân mang mắt chồi bên