3. Nội dung nghiên cứu
3.3.2. Ảnh hưởng kết hợp giữa BAP và IBA đến sự phát sinh chồi và sự
IBA là loại auxin tổng hợp nhân tạo. IBA thích hợp trong nuôi mô tế bào thực vật, giai đoạn tạo chồi kết hợp IBA với nhóm cytokinin cho số chồi/mẫu đạt kết quả cao [1], [2], [5], [14]. Tương tự như kết hợp BAP với NAA, chúng tôi thăm dò sự kết hợp giữa BAP 1,0mg/l và IBA ở nồng độ 0,2mg/l; 0,4mg/l; 0,6mg/l; 0,8 mg/l. Kết quả sau 4, 8 tuần nuôi cấy thu được ở bảng 3.6.
Bảng 3.6. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 1,0mg/l và IBA đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên Nồng độ IBA (mg/l) Số chồi/mẫu Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi Chất lượng chồi Sau 4 tuần 0 3,63 ± 0,15 1,36 ± 0,15 2,45 ± 0,12 CT 0,2 4,81 ± 0,29 1,46 ± 0,13 4,14 ± 0,21 CT 0,4 5,74 ± 0,31 1,47 ± 0,17 4,02 ± 0,16 CT 0,6 7,41 ± 0,26 1,52 ± 0,21 3,73 ± 0,15 CT 0,8 5,42 ± 0,33 1,43 ± 0,16 3,22 ± 0,22 TB Sau 8 tuần 0 3,83 ± 0,26 2,85 ± 0,16 6,21 ± 0,21 CT 0,2 5,54 ± 0,36 2,77 ± 0,15 6,32 ± 0,12 CT 0,4 6,48 ± 0,44 2,86 ± 0.08 6, 55 ± 0,14 CT 0,6 10,2 ± 0,36 3,15 ± 0,16 6,78 ± 0,19 CT 0,8 6,12 ± 0,37 2,68 ± 0,71 5,98 ± 0,11 TB
Chú thích: CT: chồi tốt; CK: chồi kém; TB: chồi trung bình.
Kết quả bảng 3.6 cho thấy, kết hợp BAP và IBA đã làm tăng số chồi/mẫu so với đối chứng. Tỉ lệ chồi/mẫu khi môi trường bổ sung IBA nồng độ 0,2; 0,4; 0,6; 0,8mg/l cho kết quả sau 4, 8 tuần tương ứng đạt 4,81; 5,74; 7,41; 5,42 và 5,54; 6,48; 10,2; 6,12 chồi. Sau 8 tuần, số chồi đạt tối đa 10,2 chồi/mẫu ở môi trường bổ sung BAP 1,0mg/l + IBA 0,6mg/l.
A. Sau 4 tuần B. Sau 8 tuần
Hình 3.6. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 1,0mg/l và IBA 0,6mg/l đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng chồi từđoạn thân mang mắt chồi bên
Quan sát thực nghiệm thấy, chồi non được phát sinh không chỉ từ mắt của chồi bên mà còn được tạo ra từ mô sẹo. Mô sẹo tạo ra do cảm ứng phần mô tiếp xúc với môi trường thạch chứa chất kích thích sinh trưởng IBA, nên hiệu quả tạo chồi cao. Sau 4 tuần tạo chồi trên môi trường không có than hoạt tính, chuyển khối đa chồi sang môi trường có than hoạt tính quan sát thấy chồi phát triển tốt.
Môi trường bổ sung BAP 1,0mg/l kết hợp IBA cho số chồi/mẫu, kích thước chồi, tốc độ sinh trưởng của chồi, số lá/chồi cao hơn hẳn so với môi trường bổ sung BAP 1,0mg/l kết hợp NAA.
So sánh kết quả bảng 3.5 và bảng 3.6 chúng tôi nhận thấy, công thức tối ưu cho sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên là môi trường MS + BAP 1,0mg/l + IBA 0,6mg/l + đường sucrose 30 g/l + agar 8,5g/l + than hoạt tính 1g/l (sau khi cấy chuyển cụm chồi) + nước dừa 100ml/l.
3.3.3. Ảnh hưởng kết hợp giữa BAP và IBA đến sự phát sinh chồi và sự sinh trưởng của chồi dừa từ nách lá mầm trưởng của chồi dừa từ nách lá mầm
Kết quả tạo chồi từ đoạn thân mang mắt chồi bên của dừa cạn đối với hai tổ hợp chất kích thích sinh trưởng BAP với NAA và BAP với IBA cho thấy, tổ hợp kích thích sinh trưởng BAP với IBA cho hiệu quả tạo chồi cao. Chúng tôi tiếp tục sử dụng tổ hợp này tạo chồi từ nách lá mầm của dừa cạn. Kết quả tạo chồi sau 6, 10 tuần nuôi cấy đạt kết quả ở bảng 3.7.
Kết quả bảng 3.7 cho thấy, môi trường bổ sung BAP 0,5mg/l kết hợp IBA làm tăng số chồi/mẫu so với đối chứng. Kết quả sau 6 tuần nuôi cấy, khi kết hợp với IBA nồng độ 0,2; 0,4; 0,6mg/l, tỉ lệ chồi/mẫu đạt 4,45; 5,67; 2,14. Sau 10 tuần tỉ lệ này tăng lên 5,25; 7,87; 2,38. Tỉ lệ chồi/mẫu đạt cao nhất BAP 0,5mg/l và IBA 0,4 mg/l, số chồi sau 6, 10 tuần đạt 5,67; 7,87. Tuy nhiên, khi nồng độ IBA > BAP thì tỉ lệ chồi/mẫu giảm, mô sẹo phát triển lớn.
So sánh cùng thời điểm 6 tuần đầu nuôi cấy, môi trường chỉ bổ sung BAP 0,5mg/l cho số chồi/mẫu nhỏ hơn trên môi trường BAP 0,5mg/l kết hợp
với IBA 0,2; 0,4mg/l. Kích thước chồi nuôi cấy trên môi trường bổ sung BAP 0,5 mg/l đạt 1,16cm. Cùng thời điểm như trên, chồi cấy trên môi trường BAP 0,5mg/l kết hợp với IBA 0,2; 0,4mg/l chỉ đạt 0,94; 0,96cm. Tuy nhiên, giai đoạn sau 6 tuần đến 10 tuần nuôi cấy trên môi trường có kết hợp với IBA thì chồi phát triển mạnh. Sau 10 tuần nuôi cấy, trên môi trường kết hợp với IBA 0,2; 0,4mg/l kích thước chồi đạt 2,67; 3,16cm, còn trên môi trường bổ sung BAP 0,5mg/l chỉ đạt 2,36cm.
Giai đoạn 6 tuần đầu, tạo chồi trên môi trường không có than hoạt tính. Sau đó, chuyển khối chồi sang môi trường có than hoạt tính, quan sát thấy chồi sinh trưởng, phát triển tốt.
Bảng 3.7. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 0,5mg/l và IBA đến sự phát sinh chồi sự sinh trưởng của chồi từ nách lá mầm
Nồng độ IBA (mg/l) Số chồi/mẫu Chiều cao chồi (cm) Số lá/chồi Chất lượng chồi Sau 6 tuần 0 2,66 ± 0,24 1,16 ± 0,17 4,65 ± 0,20 CT 0,2 4,55 ± 0,13 0,94 ± 0,15 3,05 ± 0,20 CT 0,4 5,67 ± 0,23 0,96 ± 0,08 3,95 ± 0,20 CT 0,6 2,14 ± 0,22 0,64 ± 0,16 3,65 ± 0,20 CK Sau 10 tuần 0 3,38 ± 0,24 2,36 ± 0,17 6,26 + 0,24 CT 0,2 5,25 ± 0,25 2,67 ± 0,15 6,15 + 0,15 CT 0,4 7,87 ± 0,37 3,16 ± 0,08 6,34 + 0,21 CT 0,6 2,38 ± 0,26 1,94 ± 0,16 3,78 + 0,16 CK Chú thích: CT: chồi tốt; CK: chồi kém
Trong phạm vi thí nghiệm cho thấy, môi trường thích hợp cho sự phát sinh và sự sinh trưởng của chồi từ nách lá mầm là môi trường MS + BAP
0,5mg/l + IBA 0,4mg/l + đường sucrose 30g/l + agar 8,5g/l + than hoạt tính 1g/l + nước dừa 100ml/l. Chúng tôi lựa chọn công thức này tạo để tạo chồi phục vụ quá trình chuyển gen từ nách lá mầm.
A. 6 tuần B. 8 tuần
C. 10 tuần
Hình 3.7. Ảnh hưởng kết hợp của BAP 0,5mg/l và IBA 0,4mg/l