PHẦN III ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3. Nội dung nghiên cứu và các chỉ tiêu theo dõ
Nội dung 1. Đánh giá ảnh hưởng của bổ sung cysteine với sự thành thục tế bào trứng lợn.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn
Nội dung 2. Đánh giá ảnh hưởng của việc bổ sung tế bào đệm với sự phát triển của phôi.
Với nội dung nghiên cứu như trên, thí nghiệm được bố trí như sau:
Thí nghiệm 1: Môi trường nuôi thành thục được bổ sung cysteine ở ba nồng độ khác nhau là: 0,05; 0,1, 0,2 và 0,6mM cysteine và môi trường không bổ sung cysteine (đối chứng) trong hai mức nồng độ oxygen là 5% và 20%.
Thí nghiệm 2: Tế trứng sau khi thụ tinh được tách sạch lớp tế bào cận noãn, tinh trùng xung quanh và được chuyển vào môi trường nuôi phôi. Ba loại tế bào đệm được sử dụng trong nuôi kết hợp với phôi là: Tế bào sợi thai chuột, tế bào biểu mô ống dẫn trứng lợn và tế bào nội mạc tử cung lợn
Các chỉ tiêu theo dõi
1. Tỷ lệ thành thục của tế bào trứng lợn (%):
Số tế bào trứng thành thục/tổng trứng thí nghiệm*100. Được đánh giá ở thời điểm 46 giờ sau khi trứng được đưa vào môi trường nuôi thành thục. 2. Tỷ lệ phân chia của tế bào trứng lợn (%):
Số tế bào trứng phân chia/Tổng số trứng dùng để thụ tinh với tinh trùng đông lạnh-giải đông*100. Được đánh giá ở thời điểm 48 giờ sau khi thụ tinh
3. Tỷ lệ phôi phát triển đến giai đoạn 2-16 tế bào (%):
Số phôi ở giai đoạn 2-16 tế bào/Tổng số phôi chia*100. Được đánh giá ở ngày thứ 6 sau thụ tinh.
4. Tỷ lệ phôi phát triển đến giai đoạn phôi dâu (%):
Số phôi phát triển đến giai đoạn phôi dâu/Tổng số phôi chia*100. Được đánh giá ở ngày thứ 6 sau thụ tinh.
5. Tỷ lệ phôi phát triển đến giai đoạn phôi nang (%):
Số phôi phát triển đến giai đoạn phôi nang/Tổng số phôi chia*100. Được đánh giá ở ngày thứ 6-7 sau thụ tinh.
Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – ĐHTN http://www.lrc.tnu.edu.vn
Được đánh giá bằng số tế bào trung bình/phôi nang. Phôi nang được nhuộm bằng orcein 1% và quan sát dưới kính hiển vi soi nổi để đếm số lượng tế bào. Số tế bào được đếm ba lần và lấy trung bình để đảm bảo độ tin cậy.