Nếu pH của pha động cao, aspartame sẽ bị phân hủy. pH của pha động chỉ nên trong khoảng 2-7, vì lớn hơn 7 hay nhỏ hơn 2 sẽ làm tăng độ tan của các hạt silic trên pha tĩnh. pH tốt nhất để tách các chất phân tích này là vùng axit vì ở vùng pH này, các chất phân tích tồn tại ở dạng axit nên hấp phụ trên pha tĩnh tốt hơn.
Kết quả khảo sát ảnh hưởng bởi pH của pha động (dung dịch hỗn hợp NaH2PO4 (pH = 3; 3,5; 4,0; 4,5) và ACN với tỷ lệ NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v)), được thể hiện trên các hình 3.4-3.7 và bảng 3.1.
Hình 3.4. Sắc ký đồ của hỗn hợp saccharin và aspartame tại pH = 3,0
ĐKTN: thành phần pha động NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v), bước sóng 210 nm, tốc dộ dòng là 1 mL/phút, thể tích bơm mẫu 10 µL
Hình 3.5. Sắc ký đồ của hỗn hợp saccharin và aspartame tại pH = 3,5
ĐKTN: thành phần pha động NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v), bước sóng 210 nm, tốc dộ dòng là 1 mL/phút, thể tích bơm mẫu 10 µL
Hình 3.6. Sắc ký đồ của hỗn hợp saccharin và aspartame tại pH = 4,0
ĐKTN: thành phần pha động NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v), bước sóng 210 nm, tốc dộ dòng là 1 mL/phút, thể tích bơm mẫu 10 µL
Hình 3.7. Sắc ký đồ của hỗn hợp saccharin và aspartame tại pH = 4,5
ĐKTN: thành phần pha động NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v), bước sóng 210 nm, tốc độ dòng là 1 mL/phút, thể tích bơm mẫu 10 µL
Bảng 3.1. Giá trị diện tích pic của saccharin và aspartame phụ thuộc vào pH của dung dịch đệm
pH Diện tích pic (mAu)
Saccharin Aspartame
3,0 11993 2283
3,5 111140 24785
4,0 289818 66659
4,5 28651422 6788626
Từ kết quả nghiên cứu cho thấy, ở các dung dịch đệm NaH2PO4 có pH = 3 - 4, đường vân trong sắc ký đồ không đều, pic của saccharin và aspartame không rõ nét, không cân đối, chân đường nền cao, diện tích pic nhỏ. Với pH = 4,5 pic của saccharin và aspartame nhọn và cân đối hơn, diện tích pic cao hơn, chân đường nền ổn định hơn so với các giá trị tương ứng ở pH = 3 – 4. Trên cơ sở đó, chúng tôi lựa chọn pH của dung dịch đệm NaH2PO4 là 4,5 để thực hiện các thí nghiệm nghiên cứu.
Như vậy, qua các thí nghiệm khảo sát các điều kiện tối ưu cho phép phân tích xác định saccharin và aspartame bằng phương pháp HPLC, chúng tôi lựa chọn các điều kiện thí nghiệm thích hợp thể hiện trên bảng 3.2.
Bảng 3.2. Các điều kiện thí nghiệm thích hợp cho phép phân tích xác định saccharin và aspartame bằng phương pháp HPLC
Các điều kiện Kết quả khảo sát và lựa chọn
Detector DAD Bước sóng 210 nm Cột tách Agilent C18 (250mm× 4,6mm × 5μm) Pha động Dung dịch hỗn hợp NaH2PO4 : ACN = 90 : 10 (v/v) pH dung dịch đệm pha động 4,5