4. Ý nghĩa khoa học
3.5. Phân tích các dòng rễ tơ khoai lang chuyển gen SSIV bằng kỹ thuật PCR
PCR
Để khẳng đi ̣nh các r ễ tơ khoai lang chuyển gen sống sót trên môi trƣờng chọn lọc có mang gen SSIV, chúng tôi tiến hành tách chi ết DNA tổng số của 47
dòng rễ tơ khoai lang.
Sản phẩm tách đƣợc định lƣợng DNA bằng máy quang phổ, sau đó sản phẩm đƣợc tiến hành điê ̣n di trên gel agarose 0,8 %. Kết quả định lƣợng DNA bằng máy đo quang phổ cho thấy các mẫu DNA tách chiết có nồng độ cao, chỉ số A260/280 đạt trong khoảng 1,8-2, điều đó chƣ́ng tỏ các mẫu tách chiết đảm bảo đô ̣ tinh sa ̣ch cho các thí nghiê ̣m tiếp theo. Tiếp đó, chúng tôi tiến hành kỹ thuật điện di DNA tổng số trên agarose 0,8% để kiểm tra chất lƣợng của DNA.
Hình 12. Kết quả tách chiết DNA tổng số một số rễ tơ
Sau khi tiến hành kỹ thuâ ̣t điê ̣n di các mẫu DNA tổng số chúng tôi thấy rằng, DNA tổng số các rễ tơ khoai lang chuyển gen đƣợc cho ̣n để tiến hành kỹ
thuâ ̣t điê ̣n di đều cho băng rõ nét , không bi ̣ đƣ́t gãy, đảm bảo điều kiê ̣n tốt nhất để thực hiện các phản ứng tiếp theo.
Các mẫu DNA sau khi tách đƣợc dùng làm khuôn để tiến hành phản ứng PCR nhân gen SSIV với cặp mồi đặc hiệu SSIV-Frag_F và SSIV-Frag_R. Kết quả sản phẩm PCR thu đƣợc cho thấy 15 mẫu rễ tơ xuất hiện băng DNA có kích thƣớc khoảng 960 bp ứng với băng DNA xuất hiện ở mẫu đối chứng dƣơng và đúng với kích thƣớc gen SSIV dự kiến. Kết quả cho thấy 15 rễ tơ khoai lang đã đƣợc chuyển gen SSIV, với tỷ lệ chuyển gen là 4,85% và 8,74% trên nguồn vật liệu đoạn thân và mảnh lá (Bảng 8). Các dòng này sẽ đƣợc tiếp tục nghiên cứu đánh giá sự biểu hiện gen thông qua hoạt động phiên mã.
Hình 13. Sản phẩm PCR nhân gen SSIV từ DNA tổng số tách chiết từ một số
dòng rễ tơ chuyển gen và không chuyển gen