Phần 4 Kết quả và thảo luận
4.1. Kết quả phân lập vi sinh vật từ các mẫu nghiên cứu
Từ 15 mẫu thu thập từ đất sát phần rễ, thân và rễ của cây ngô, cây bắp cải, mồng tơi, cà chua và cây khoai tây tại một số khu vực trên địa bàn TP.Hà Nội và tính Bắc Giang, thông qua quy trình tiền xử lý mẫu, phân tán mẫu (máy lắc) và nuôi cấy trên môi trường chuyên tính bán rắn như đã trình bày tại phần Phương pháp nghiên cứu, thực hiện nuôi cấy và ghi nhận lại các đặc điểm về điểm hình thái, kích thước khuẩn lạc và thời gian mọc của các chủng VSV xuất hiện trên đĩa thạch. Kết quả phân lập chủng giống VSV từ mẫu ban đầu được thể hiện tại Bảng 4.1 dưới đây.
Bảng 4.1. Kết quả phân lập VSV có tiềm năng đối kháng nguồn bệnh
STT Kí hiệu Thời gian mọc Đƣờng kính khuẩn lạc (cm) Đặc điểm khuẩn lạc Loại môi trƣờng phân lập
1 VK01 24h 0,8 Vàng nhạt , tròn nhỏ li ti, nhầy, trơn Bacillus
2 VK 02 24h 0,2 Tròn, trơn, trăng đục, nhỏ li ti như đầu tăm 3 VK 03 24h 0,8 Tròn, trắng đục, lồi
4 VK 04 24h 1,1 Nhăn, trắng, lồi
5 VK 05 24h 0,5 Trắng sữa, viền nhăn, méo
6 VK 06 48h 0,9 Hình đám cây, trắng trong, viền nhăn, trong trơn
7 VK 07 48h 0,3 Tròn, trơn nhầy, trắng sữa
8 VK 08 24h 1,2 Trắng đục, viền nhăn, hình bông 9 VK 09 48h 0,7 Nhỏ, tròn,trắng trong
10 VK 10 48h 0,4 Vàng, tròn, bề mặt xù xì 11 VK 11 48h 1,2 Trắng sữa, tròn, lồi, nhày 12 VK 12 48h 1,0 Tròn, trắng đục, có màng nhày 13 VK 13 24h 0,8 Trắng đục, viền k nhăn,khô
14 VK 14 24h 0,5 Trắng trong,tròn đều, viền không nhăn, lồi 15 VK 15 24h 0,7 Tròn, vàng nhạt, trơn, lồi
16 VK 16 48h 1,1 Tròn, trắng đục vàng, lồi, nhày Alexanderov 17 VK17 48h 1,6 Tròn,trắng đục
STT Kí hiệu Thời gian mọc Đƣờng kính khuẩn lạc (cm) Đặc điểm khuẩn lạc Loại môi trƣờng phân lập 18 VK18 48h 1 Tròn, trong, vàng nhạt, lồi, bóng nhẵn 19 VK19 72h 1,2 Tròn, trắng trong 20 VK20 72h 1,0 Tròn, trắng trong, bề mặt lồi nhẵn 21 VK21 24h 0,9 Hình đám cây, trắng trong, viền nhăn,
trong trơn
22 VK22 48h 0,3 Hình tròn, trơn nhầy, trắng đục 23 VK23 48h 1,2 Trắng đục, viền nhăn, hình bông hoa 24 VK24 48h 0,7 Nhỏ, tròn, trắng trong
25 VK25 48h 1,0 Vàng nhạt, tròn, bề mặt xù xì 26 VK26 48h 1,2 Trắng sữa, tròn, lồi, nhày 27 VK27 48h 1,0 Tròn, trắng đục, có màng nhày 28 VK28 24h 1,2 Trắng đục, viền không nhăn,khô 29 VK29 48h 1,8 Trắng trong,tròn đều, viền nhăn, lồi 30 VK30 48h 2,1 Tròn, trắng đục, viền răng cưa, trơn, lồi
31 VK31 48 1,2 Vàng vani, nhầy, lồi, trơn, đục Môi trường kiểm tra VSV phân giải hợp chất photpho vô cơ khó tan 32 VK32 48 1,1 Trắng trong, lồi 33 VK33 48 0,7 Trắng đục, lồi, nhầy 34 VK34 48 0,5 Vàng đục, trơn 35 VK35 72 0,4 Hồng nhạt, khô, bề mặt xù xì 36 VK36 72 0,9 Trắng trong, lồi , nhầy 37 VK37 24 1,3 Trắng ngà, nhầy 38 VK38 24 1,1 Trắng đục, trơn 39 VK39 24 0,9 Vàng nhạt, tròn, nhầy 40 VK40 48 1,4 Trắng ngà, xù xì,lồi 41 VK41 48 0,9 Vàng nhạt, viền trắng 42 VK42 48 1,1 Trắng đục, trơn nhẵn 43 VK43 48 0,9 Vàng trong, nhầy lồi 44 VK44 48 1,2 Trắng trong, trơn, nhầy
45 VK45 48 1,0 Trắng ngà, tua tủa đầu khuẩn lạc 46 VK46 48 1,5 Trắng trong, trơn
47 VK47 48 1,2 Vàng nhạt,tròn, nhăn 48 VK48 48 0,4 Trắng, tròn đều, viền nhăn 49 VK49 48 0,8 Trắng trong, tròn,lồi
STT Kí hiệu Thời gian mọc Đƣờng kính khuẩn lạc (cm) Đặc điểm khuẩn lạc Loại môi trƣờng phân lập
50 VK50 72h 1,2 Tròn, trắng sữa, lồi, bóng Ashby 51 VK51 72h 1,8 Tròn, trắng đục,lồi nhày
52 VK52 72h 1.4 Vàng nhạt, nhăn, khô, viền răng cưa 53 VK53 72h 2,0 Tròn, trắng trong, lồi, nhày
54 VK54 72h 1,6 Tròn, trắng trong, lồi, nhày 55 VK55 48h 1,2 Tròn, trắng trong, lồi 56 VK56 48h 1,6 Tròn, trắng đục, lồi, bóng , nhày 57 VK57 48h 1,2 Trắng sữa, tròn, lồi,nhày 58 VK58 72h 1,4 Tròn, trắng trong, lồi 59 VK59 72h 1,2 Tròn, trắng đục nhẵn lồi 60 VK60 48h 1,2 Tròn, trắng đục, lồi
Nguồn: Kết quả nghiên cứu (2019)
Kết quả thực hiện phân lập thu được 60 chủng VK dựa trên các đặc điểm riêng biệt về hình thái, kích thước khuẩn lạc và thời gian mọc. Kết quả trình bày tại Bảng 4.1 cho thấy các chủng vi khuẩn phân lập được có hình thái khuẩn lạc rất đa dạng, bề mặt lồi, nhăn, khô hoặc nhầy,…, viền khuẩn lạc tròn hoặc răng cưa, màu sắc phổ biến gồm có màu trắng đục, trắng trong hoặc vàng nhạt, ngoài ra còn một số ít chủng có màu hồng nhạt (Hình 4.1). Đường kính khuẩn lạc của các chủng phân lập được dao động từ 0,2cm-2,1cm, kích thước trung bình đạt 1,05±0,40 cm. Các chủng mọc trên môi trường Ashby có kích thước khuẩn lạc tương đối đồng đều, phổ biến đạt kích thước 1,2-1,4 cm (7/11 chủng).
Thời gian hình thành khuẩn lạc của các tất cả các chủng phân lập được trong khoảng 24-72h. Có 14/60 chủng VK có thời gian mọc rất nhanh trong khoảng 24h đầu nuôi cấy (23,4%), có 35/60 chủng VK xuất hiện sau 48h (58,3%) và 11/60 chủng còn lại (18,3%) chỉ xuất hiện khuẩn lạc sau 72h nuôi cấy. Thời gian mọc của khuẩn lạc liên quan một phần đến khả năng thích nghi của chủng VSV trong môi trường nhân tạo, ưu điểm mọc nhanh của các chủng VSV phân lập sẽ thuận lợi cho quá trình nghiên cứu, tiết kiệm thời gian và chi phí.
Liên quan đến nguồn gốc mẫu phân lập, có 35/60 chủng VK được phân lập từ đất vùng rễ, rễ và/hoặc thân lá của cây ngô, bắp cải và khoai tây, các chủng
còn lại được phân lập từ khu vực trồng một số loại cây như cà chua, cải cúc, dưa chuột và mùng tơi. Có thể thấy phạm vi lấy mẫu khá rộng, đóng góp vai trò quan trọng đối với sự đa dạng về chủng vi khuẩn và môi trường sống của chúng. Đối với mẫu cây ngô, phân lập vi khuẩn được từ cả phần đất sát rễ, thân, rễ của cây. Mẫu cây rau ăn lá hầu như chỉ phân lập vi khuẩn được từ phần rễ và đất sát rễ. Tương tự, mẫu cây khoai tây chỉ phân lập vi khuẩn được từ phần đất sát rễ và phân thân của cây.
Hình 4.1. Một số chủng vi khuẩn đƣợc phân lập phục vụ nghiên cứu chế phẩm sinh học ứng dụng sản xuất nông nghiệp
Các chủng VK được làm thuần và cấy truyền vào ống thạch nghiêng để giữ giống, đánh ký hiệu chủng như trình bày tại bảng 4.1. Tiếp tục tiến hành các thí nghiệm đánh giá sơ bộ đặc tính sinh học của các chủng giống VK phần lập được theo các phương pháp đã được mô tả tại phần Phương pháp nghiên cứu, các thí nghiệm đánh giá bao gồm:
(1) Đánh giá khả năng đối kháng với vi khuẩn Ralstonia solanacearum
gây bệnh héo xanh;
(2) Đánh giá khả năng đôi kháng với vi khuẩn E.carotovora gây bệnh thối nhũn;
(3) Đánh giá khả năng phân giải K khó tiêu trên môi trường có chứa kaolin (Al2O3.2SiO2.2H2O);
(4) Đánh giá khả năng phân giải P khó tiêu trên môi trường kiểm tra VSV phân giải hợp chất photpho vô cơ khó tan (chứa Ca3(PO4)2;
(5) Đánh giá khả năng tổng hợp N trong điều kiện môi trường Ashby không chứa đạm, chỉ thực hiện đối với 11 chủng VK phân lập được trên môi trường chuyên tính cho Azotobacter (VK50-VK60).
Kết quả tổng hợp thí nghiệm đánh giá sơ bộ đặc tính năng sinh học đối với 60 chủng VK được phân lập ban đầu được thể hiện tại Bảng 4.2.