3.3.1. Chuẩn bị mẫu
Vỏ quả Bứa khô: Quả Bứa sau khi rửa sạch, hong khô tiến hành bổ quả để loại bỏ phần ruột và hạt. Vỏ quả đƣợc cắt thành mẫu nhỏ có kích thƣớc bằng ngón tay út, đem sấy khô trong tủ sấy ở nhiệt độ 800C trong vòng 28 giờ đến khi vỏ quả khô hoàn toàn, xay thành bột mịn và sử dụng để chiết tách axit hữu cơ.
3.3.2. Chiết tách axit hữu cơ
Chƣng ninh trong nồi áp suất (hình 3.3):
Cân khoảng 10g mẫu vỏ quả khô cho vào cốc thủy tinh 500ml với 150ml nƣớc cất. Thực hiện chƣng ninh trong nồi áp suất ở nhiệt độ 1270C, áp suất 0,15Mpa trong
thời gian 1 giờ. Tiến hành lọc bằng vải lọc muslin và thu dịch chiết, phần xác thực hiện chiết lặp một lần nữa để thu hồi toàn bộ lƣợng axit có trong mẫu. Phần xác sau khi chiết lặp 2 lần không còn vị chua, thử bằng giấy đo pH cho pH trung tính. Dịch chiết có màu nâu đỏ (hình 3.4). Trộn lẫn dịch 2 lần chiết với 4g than hoạt tính và ngâm trong nƣớc ấm 30 phút, sau đó lọc chân không
dùng phễu Buchne. Than hoạt tính đƣợc rửa lại 2 lần, mỗi lần với 10ml nƣớc để thu hồi hết axit. Dịch chiết sau khi xử lý bằng than hoạt tính bị mất màu hoàn toàn (hình 3.5). Trộn lẫn dịch lọc và rửa, cô đặc đến 50ml, xử lý với 100ml etanol 960, 15 phút để kết tủa hết pectin (hình 3.7) (kết tủa màu trắng sữa). Ly tâm khoảng 10–15 phút trong máy ly tâm 4000 vòng/phút hay lọc, tách phần dịch nổi và kết tủa riêng. Phần kết tủa rửa 2 lần với 20ml etanol và ly tâm hoặc lọc để thu hồi hết axit. Trộn các dịch nổi, cô đặc đến thể tích 50ml (hình 3.6) và lƣu giữ ở 40C trong tủ lạnh đến khi sử dụng để chuẩn độ, kiểm tra bằng sắc ký lỏng cao áp (HPLC).
Hình 3.3: Nồi áp suất
Hình 3.7: Kết tủa pectin Hình 3.4: Dịch chiết
chưa tẩy màu
Hình 3.5: Dịch