- Nghiên cứu biện pháp phòng bệnh do H. meleagridistrên ngan. - Xác định thuốc điều trị bệnh do H. meleagridistrên ngan. 3.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.3.1. Điều tra tình hình mắc bệnh do H. meleagridis tại huyện Hoài Đức theo đối tượng gia cầm theo đối tượng gia cầm
- Kết hợp với Thú y huyện Hoài Đức để tiến hành khảo sát thực trạng mắc bệnh Histomonosis trên các đối tượng: Gà tây, gà thả vườn, ngan và vịt bằng phương pháp trực tiếp quan sát thực trạng chăn nuôi gà ở các địa phương nghiên cứu và phỏng vấn và phát phiếu điều tra về một số tiêu chí đã xây dựng.
- Thu thập mẫu bệnh phẩm ngan nghi mắc bệnh: trước khi lấy mẫu, ghi chép các thông tin: chủ hộ, địa chỉ, ngày lấy mẫu, tuổi, phương thức chăn nuôi, điều kiện vệ sinh thú y, kiểu nền chuồng, màu sắc phân, các biểu hiện lâm sàng. 3.2.2. Nghiên cứu một số đặc điểm bệnh lý do H. meleagridis gây ra trên ngan
Để xác định các triệu chứng lâm sàng chủ yếu của ngan nghi mắc Histomonosis, được tiến hành:
- Quan sát, ghi chép, thống kê các biểu hiện của ngan khi xuất hiện những dấu hiệu bệnh lý, đồng thời dựa vào các đặc điểm dịch tễ học, những can thiệp trong quá trình bệnh xảy ra cũng như thu thập các thông tin liên quan.
- Phân tích, thống kê để đưa ra những kết quả chính xác.
3.2.3. Phương pháp mổ khám xác định bệnh tích (tài liệu tiêu chuẩn Ngành – Cục Thú y, 2006) – Cục Thú y, 2006)
Để xác định các biến đổi đại thể của các cơ quan, tổ chức của ngan nghi mắc bệnh do H. meleagridis cần tiến hành mổ khám những ngan có biểu hiện triệu chứng lâm sàng của bệnh để kiểm tra bệnh tích đại thể của tất cả các cơ quan theo đúng quy trình kỹ thuật.
Chúng tôi tiến hành mổ khám theo các bước sau: Chuẩn bị mổ khám:
Chuẩn bị đầy đủ các dụng cụ mổ khám đã được vô trùng, hoá chất và trang thiết bị bảo hộ cho người mổ khám.
Phương pháp mổ khám:
Đối với ngan còn sống quan sát từ ngoài vào trong, kiểm tra từng cơ quan riêng biệt, ghi lại những biến đổi từ ngoài vào trong vào biên bản mổ khám. Với ngan chết tiến hành mổ khám theo trình tự sau:
Đặt ngan nằm ngửa trên bàn mổ, dùng dao cắt da giữa vùng bụng và vùng bẹn 2 bên chân, rồi lật chân sang 2 bên.
Cắt da vùng giữa lỗ huyệt và xương lưỡi hái lên tới tận diều bộc lộ vùng cơ ngực.
Kiểm tra tình trạng khô cơ, xuất huyết cơ đùi, cơ ngực và xương lưỡi hái.
Dùng kéo rọc da từ phần diều lên tới tận mỏ bộc lộ diều, khí quản, tuyến thymus để kiểm tra bên ngoài.
Dùng kéo cắt ngang phần cơ giữa lỗ huyệt và xương lưỡi hái, cắt tiếp lên phía trên hai bên sụn qua xương đòn, xương quạ, loại những tổ chức dính nhấc bỏ xương lưỡi hái ra ngoài bộc lộ xoang ngực, xoang bụng.
Quan sát các túi khí và phía ngoài cơ quan nội tạng.
Lấy máu tim và các cơ quan nội tạng dùng cho xét nghiệm. Lấy các cơ quan bộ phận nội tạng dùng cho xét nghiệm.
Loại bỏ màng treo ruột, cắt đứt phía trên dạ dầy tuyến lật toàn bộ cơ quan tiêu hoá phía sau để kiểm tra sau cùng.
Kiểm tra toàn bộ cơ quan sinh dục. Kiểm tra thận ống dẫn liệu.
Kiểm tra túi Fabricius về hình dạng, màu sắc, kích thước, dịch bên trong và dịch bên ngoài.
Dùng kéo cắt mở 1 bên cạnh mỏ quan sát xoang miệng. Cắt ngang mỏ trên kiểm tra xoang.
Dọc thực quản tới diều kiểm tra chất chứa bên trong, dịch và mùi. Dọc khí quản kiểm tra dịch và xuất huyết
Kiểm tra xoang bao tim, dịch bên trong, mở và kiểm tra cơ tim chân cầu, xoang và van.
Bộc lộ dây thần kinh cánh ở trước xương sườn thứ nhất, dây thần kinh hông ở trong cơ đùi hoặc trong xoang chậu dưới thận để kiểm tra viêm sưng.
Rạch khớp gối kiểm tra dịch, bẻ xương đùi kiểm tra độ cứng mềm, chẻ xương đùi kiểm tra tuỷ.
Cắt đầu gia cầm ở đốt atlat, lột da, dùng kéo cắt xương cắt sang 2 bên từ lỗ chẩm đến cạnh trước xương đỉnh hộp sọ bộc lộ não. Dùng kéo cong cắt các dây thần kinh lấy não.
Dùng kéo rạch ruột từ dạ dày tuyến xuống tận hậu môn kiểm tra các tổn thương xuất huyết hoại tử.
Kiểm tra các dấu hiệu ngoài da, xoang ngực, xoang bụng, ghi lại kết quả vào biên bản mổ khám.
Tiến hành lấy mẫu máu ở cánh, tim. Lột da và bộc lộ xoang ngực, xoang bụng, tách các cơ quan nội tạng khỏi cơ thể quan sát và chụp ảnh. Tiến hành thu mẫu gan và manh tràng.
3.3.4. Phương pháp làm tiêu bản bệnh lý
Mẫu bệnh phẩm được lấy từ các hộ gia đình có ngan nghi mắc Histomonosis được ngâm trong formol 10%làm tiêu bản vi thể. Phương pháp làm tiêu bản vi thể theo quy trình tẩm đúc bằng parafin, nhuộm Haematoxilin – Eosin (HE). Các bước của quá trình làm tiêu bản vi thể như sau:
Cố định bệnh phẩm
Ngâm miếng tổ chức vào dung dịch formol 10%. Vùi bệnh phẩm
Tiến hành lần lượt các bước sau:
- Rửa focmol: Rửa dưới vòi nước chảy nhẹ trong 24h. - Đưa mẫu vào hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động. Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình
Bảng 3.1. Hệ thống máy chuyển đúc mẫu tự động gồm 12 bình
Bình Hóa chất Thời gian (giờ)
1 Cồn 600C 1:00 2 Cồn 600C 1:00 3 Cồn 700C 1:30 4 Cồn 800C 1:30 5 Cồn 960C 1:30 6 Cồn 1000C 1:30 7 Cồn 1000C 1:30 8 Cồn 1000C 1:30 9 Xylen 1:30 10 Xylen 1:30 11 Parafin 2:00 12 Parafin 2:00 Đúc block
Đúc mẫu bệnh phẩm trong parafin. Cắt dán mảnh và cố định tiêu bản Cắt mảnh: bằng máy microtom.
Tãi mảnh: Dàn lát cắt bằng phẳng trên phiến kính trong nước ấm 480C. Sau đó để tủ ấm 370C đến khi bệnh phẩm khô là có thể đem nhuộm được.
Nhuộm tiêu bản Các bước tiến hành
+ Khử parafin: Cho tiêu bản qua hệ thống xylen gồm 3 lọ: Xylen I: 6h;
Xylen II: 6h; Xylen III: 12h.
+ Khử xylen: Cho tiêu bản qua hệ thống cồn gồm 4 lọ: Cồn 1000: 2 lần (mỗi lần 1 phút);
Cồn 950: 1 lần; Cồn 700: 1 lần; Cồn 500: 1 lần.
+ Nhuộm Haematoxylin (nhuộm nhân)
Nhỏ haematoxylin ngập tiêu bản trong 5 phút, rửa nước. Sau đó cho tiêu bản qua hệ thống cồn:
Cồn 500: 1 lần; Cồn 700: 1 lần; Cồn 950: 1 lần; Cồn 1000: 2 lần. Rửa tiêu bản
+ Nhuộm Eosin (nhuộm bào tương).
Nhỏ Eosin ngập tiêu bản khoảng 5-10 phút, rửa nước. Cho tiêu bản qua hai lọ cồn 1000 mỗi lọ 1 phút.
+ Tẩy cồn, làm trong tiêu bản: Cho tiêu bản đi qua xylen. Gắn Baume canada
Nhỏ một giọt Baume canada lên lamen rồi gắn nhanh lên tiêu bản khi vẫn còn xylen trên tiêu bản. Kiểm tra tiêu bản trên kính hiển vi quang học.
3.3.5. Phương pháp xác định chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa máu
Đối tượng cần xét nghiệm: 20 mẫu máu ngan khoẻ mạnh và 20 mẫu máu ngan có triệu chứng mắc bệnh Histomonis: ủ rũ, sốt cao, ỉa chảy, mào thâm tím, xù lông…
Phương pháp lấy máu làm xét nghiệm:
Vị trí lấy máu: có thể lấy máu ở cánh, tim, hay lấy máu sau khi cắt tiết ngan. Sau khi lấy được máu cho vào ống bảo quản có chất chống đông rồi đưa về phòng xét nghiệm các chỉ tiêu huyết học của máu.
Sử dụng máy đếm huyết học tự động Celdyn-3700 (CD-3700).
Nguyên lý: Máy sẽ tách riêng các dòng tế bào theo kích thước tế bào, có nhân hay không có nhân, theo hình dạng nhân... Đếm trên toàn bộ ống mẫu máu xét nghệm mà không cần tách hay pha loãng mẫu.
Chúng tôi tiến hành nghiên cứu một số chỉ tiêu sinh lý máu như sau: + Số lượng hồng cầu (RBC, triệu/mm3);
+ Tỷ khối huyết cầu (HCT, %);
+ Thể tích trung bình hồng cầu (MCV, μm3 );
+ Lượng huyết sắc tố trung bình hồng cầu (MCH, mg).
3.3.6. Thử nghiệm biện pháp phòng trị bệnh do H. meleagridis gây ra trên ngan Sử dụng và so sánh một số hóa dược trong việc phòng, điều trị bệnh do H. Sử dụng và so sánh một số hóa dược trong việc phòng, điều trị bệnh do H. meleagridisgây ra trên đàn ngan để tìm ra biện pháp phòng bệnh và phác đồ điều trị hiệu quả nhất.
* Thử nghiệm biện pháp phòng bệnh do H. meleagridis gây ra trên ngan Chuẩn bị 4 đĩa petri có một lớp mỏng môi trường Dwyers cải tiến chứa đơn bào H. meleagridis. Mỗi đĩa Petri sẽ được phun một loại thuốc sát trùng khác nhau. Cụ thể:
Lô thí nghiệm 1: sử dụng thuốc sát trùng Virkon. Lô thí nghiệm 2: sử dụng thuốc sát trùng Benkocid. Lô thí nghiệm 3: sử dụng thuốc sát trùng Chloramin. Lô đối chứng: không phun thuốc sát trùng.
Đánh giá kết quả thu được ở 4 lô thí nghiệm để chọn thuốc sát trùng tiêu diệt đơn bào H. meleagridis hiệu quả nhất.
* Thử nghiệm biện pháp điều trị bệnh do H. meleagridis gây ra trên ngan Chúng tôi tiến hành phân chia 45 con ngan mắc bệnh đầu đen theo độ tuổi từ 4 – 12 tuần tuổi và trên 12 tuần tuổi. Mỗi nhóm chia đều thành 3 nhóm nhỏ, có số lượng ngan bằng nhau kết hợp điều trị toàn đàn để thử nghiệm hiệu quả điều trị của 3 hóa dược Sulfatrim, Sulfamono và Zinaprim, thời gian điều trị 5 ngày. Theo dõi sau 10 ngày sau điều trị, những ngan khỏe lại và toàn đàn không còn triệu chứng được coi là đã khỏi bệnh.
Phác đồ điều trị cụ thể như sau: * Phác đồ 1:
- Sulfatrim 1g/10kg thể trọng ngan 1 lần/ngày/bơm trực tiếp vào miệng. - ParaC 1g/10kg thể trọng, trộn thức ăn.
- Hepaplus 1ml/10kg thể trọng, trộn thức ăn. * Phác đồ 2:
- ParaC 1g/10kg thể trọng, trộn thức ăn. - Hepaplus 1ml/10kg thể trọng, trộn thức ăn. * Phác đồ 3:
- Zinaprim 1g/10kg thể trọng ngan 1 lần/ngày/bơm trực tiếp vào miệng. - ParaC 1g/10kg thể trọng, trộn thức ăn.
- Hepaplus 1ml/10kg thể trọng, trộn thức ăn. 3.3.7. Phương pháp xử lý số liệu
Các số liệu thu thập được xử lý bằng phần mềm Microsoft Excel và phần mềm thống kê sinh học Minitab 16.
PHẦN 4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. TÌNH HÌNH MẮC BỆNH DO H. MELEAGRIDIS TRÊN ĐÀN GIA CẦM TẠI HUYỆN HOÀI ĐỨC CẦM TẠI HUYỆN HOÀI ĐỨC
Tỷ lệ mắc đơn bào H. meleagridis của gia cầm nuôi ở mỗi địa phương là một chỉ tiêu đánh giá cụ thể tình hình mắc của đàn gia cầm tại địa phương đó. Từ đó giúp người chăn nuôi có biện pháp phòng trị bệnh hiệu quả. Chúng tôi đã tiến hành khảo sát ngẫu nhiên tỷ lệ mắc đơn bào H. meleagridis đàn gia cầm gồm gà tây, gà thả vườn, ngan, vịt tại một số xã tập trung nuôi nhiều gia cầm tại huyện Hoài Đức – Hà Nội. Kết quả được thể hiện ở bảng 4.1 và biểu đồ 4.1.
Bảng 4.1. Tình hình mắc bệnh do H. meleagridis theo đối tượng gia cầm tại huyện Hoài Đức
Đối tượng Số lượng Số con
mắc Tỷ lệ mắc
Số con
chết Tỷ lệ chết gia cầm (con) (con) (%) (con) (%)
Gà Tây 220 71 32,27e 60 84,51a
Gà thả vườn 8042 103 1,28f 31 30,10c
Ngan 10065 45 0,45g 30 68,18b
Vịt 8253 0 0,00h 0 0,00d
Ghi chú: Theo cột dọc các giá trị mang chữ cái khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).
Qua bảng 4.1 cho thấy trong số 220 con gà tây được khảo sát thì có 71 con bị mắc bệnh, chiếm tỷ lệ 32,27%, có 60 con chết chiếm tỷ lệ 84,51%. Tiếp đến là gà thả vườn, có 8042 con khảo sát thì có 103 con mắc bệnh (chiếm 1,28%), số con chết là 31 con (chiếm tỷ lệ 30,10%). Trong số 10065 con ngan được khảo sát thì có 45 con mắc bệnh (chiếm 0,45%), 30 con ngan chết, chiếm tỷ lệ 68,18%. Ở vịt có thể mang trùng nhưng chưa thấy biểu hiện bệnh. Như vậy, trong các loại gia cầm gà tây, gà thả vườn, ngan, vịt thì gà tây có tỷ lệ con mắc bệnh cao nhất; sau đó đến gà thả vườn, ngan; vịt không có biểu hiện mắc bệnh. Tỷ lệ chết do đơn bào H. meleagridis ở gà tây là cao nhất, sau đó là ngan (mặc dù ngan có tỷ lệ mắc bệnh thấp hơn so với gà thả vườn), tiếp đến là gà thả vườn và vịt không bị chết do đơn bào H. meleagridis. Tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ chết do đơn bào H. meleagridis ở các đối tượng gia cầm khác nhau là khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).
Tỷ lệ mắc bệnh và tỷ lệ chết do H. meleagridis theo đối tượng gia cầm được thể hiện rõ hơn tại hình 4.1 và 4.2 dưới đây.
Hình 4.1. Tỷ lệ mắc bệnh do H. meleagridis theo đối tượng gia cầm
Hình 4.2. Tỷ lệ chết do H. meleagridis theo đối tượng gia cầm
4.2. TÌNH HÌNH MẮC BỆNH DO H. MELEAGRIDIS TRÊN NGAN TẠI HOÀI ĐỨC HOÀI ĐỨC
4.2.1. Tình hình mắc bệnh do H. meleagridis trên ngan tại các xã khác nhau tại huyện Hoài Đức tại huyện Hoài Đức
Cùng với sự kết hợp của Thú y huyện Hoài Đức, chúng tôi tiến hành khảo sát tình hình mắc bệnh do H. meleagridis trên ngan tại một số xã khác nhau, nuôi nhiều ngan trên toàn huyện. Kết quả được trình bày tại bảng 4.2.
Bảng 4.2. Tình hình mắc bệnh do H. meleagridis trên ngan tại các xã khác nhau tại huyện Hoài Đức (n = 10065)
Xã khảo sát Số con theo dõi (con) Số con mắc bệnh (con) Tỷ lệ mắc (%) Đức Thượng 1863 9 0,48b Tiền Yên 1120 6 0,54a Vân Canh 1877 7 0,37c Đắc Sở 1560 7 0,45b Kim Chung 1870 9 0,48b An Khánh 1775 7 0,39c Tổng 10065 45 0,45
Ghi chú: Theo cột dọc các giá trị mang chữ cái khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).
Từ kết quả bảng 4.2 cho thấy: ngan ở các xã được khảo sát đều mắc đơn bào H. meleagridis. Tuy nhiên, tỷ lệ mắc ở mỗi xã là khác nhau. Trong đó, tỷ lệ ngan mắc bệnh cao nhất ở xã Tiền Yên (0,54%); sau đó đến xã Đức Thượng và Kim Chung (0,48%), xã Đắc Sở (0,45%), xã An Khánh (0,39%) và thấp nhất ở xã Vân Canh (0,37%). Sự sai khác về tỷ lệ ngan mắc bệnh ở các xã Đức Thượng, Đắc Sở và An Khánh là không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05), tương tự sự sai khác về tỷ lệ ngan mắc bệnh ở các xã Vân Canh và An Khánh cũng không có ý nghĩa thống kê (P > 0,05). Tuy nhiên, sự sai khác này giữa xã Tiền Yên với 2 nhóm xã trên đều có ý nghĩa thống kê (P < 0,05).
Kết quả này được thể hiện rõ hơn tại hình 4.3.
Hình 4.3. Tình hình mắc bệnh do H. meleagridis trên ngan tại các xã khác nhau tại huyện Hoài Đức
Sở dĩ có sự khác nhau về tỷ lệ ngan mắc bệnh đầu đen giữa các xã trong huyện là do ảnh hưởng của nhiều yếu tố: tình trạng vệ sinh thú y, địa hình, phương thức chăn nuôi, lứa tuổi, chế độ nuôi dưỡng, mật độ ngan nuôi ... Đặc biệt, ở xã Tiền Yên có nhiều hộ nuôi ngan với số lượng nhiều, nuôi lâu năm, nuôi gối đàn, không có thời gian để trống chuồng, phơi đất để diệt mầm bệnh. Có nhiều hộ nuôi ngan để tận dụng diện tích đất vườn do đó không đầu tư vào chuồng trại, trang thiết bị chăn nuôi, không chăn nuôi ngan theo quy trình kỹ thuật tiên tiến. Công tác vệ sinh thú y, quy trình sử dụng vắc xin, ngan chưa được thực hiện triệt để. Do nuôi kế đàn nên việc khử trùng, tiêu độc định kỳ khó thực hiện, tạo cơ hội cho mầm bệnh lưu cữu trong môi trường chăn nuôi. Đó là những nguyên nhân dẫn tới tỷ lệ mắc bệnh đầu đen ở ngan tại các xã khác nhau. Ngan nuôi tại Vân Canh và An Khánh có tỷ lệ mắc đơn bào H. meleagridis thấp hơn (0,37% - 0,39%). Giải thích vấn đề này, chúng tôi cho rằng đây là một căn bệnh mới, trong khi ở các địa phương này đa số gà được nuôi chuồng kết hợp với chăn thả ngoài tự nhiên với mật độ tương đối thưa,