Phương pháp nghiên cứu

3.5.1. Nghiên cứu đặc điểm sinh học

3.5.1.1. Nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật của Bìm bìm hoa trắng

Phương pháp nghiên cứu được dựa theo phương pháp được Nguyễn Nghĩa Thìn (2008), giới thiệu trong “Các phương pháp nghiên cứu thực vật”.

- Phương pháp kế thừa tài liệu: Kế thừa các nguồn tài liệu, các kết quả của các nghiên cứu đã công bố, các hình ảnh, hình vẽ liên quan đến các loài Bìm bìm hoa trắng có ở Việt Nam đang được lưu giữ tại các thư viện, phòng tiêu bản, phòng bảo tàng thực vật, website trong và ngoài nước.

- Phương pháp thu mẫu: Mỗi cây thu 3-10 mẫu. Mỗi mẫu phải có đầy đủ

các bộ phận, nhất là cành, lá và hoa Cùng một cây thu mẫu ở cả cành non và cành già để thấy được sự biến đổi theo di truyền, cùng một loài thu ở nhiều địa điểm khác nhau để thấy được sự biến đổi theo sinh thái. Mẫu được đeo etiket, các mẫu trên cùng cây phải đánh cùng 1 số hiệu mẫu.

- Phương pháp mô tả phân tích đặc điểm hình thái thực vật: sử dụng

phương pháp hình thái so sánh. Đây là phương pháp cổ điển nhưng cho đến nay vẫn là phương pháp chính và phổ biến nhất. Phương pháp này dựa trên đặc điểm cấu tạo bên ngoài các cơ quan của thực vật, quan trọng nhất là cơ quan sinh sản vì đặc điểm của nó liên quan chặt chẽ với bộ mã di truyền và ít biến đổi bởi môi trường. Đặc điểm thực vật của mẫu cây được quan sát bằng mắt thường, kính lúp soi nổi và mô tả phân tích.

3.5.1.2. Nghiên cứu đặc điểm sinh thực và hạt cây Bìm bìm hoa trắng tồn lưu trong đất

- Nghiên cứu điều tra thực địa:

Phương pháp nghiên cứu được dựa theo phương pháp được Nguyễn Nghĩa Thìn (1997) giới thiệu trong “Cẩm nang nghiên cứu Đa dạng sinh vật”.

- Điều kiện lập tuyến:

+ Không lập tuyến điều tra hạt tồn lưu trong đất ở các lô không có Bìm bìm hoa trắng phát triển và trên các lô rừng trồng sản xuất;

+ Tuyến điều tra phải thẳng, có địa hình mấp mô (ven đường, ven suối), được bố trí tại khu vực gần đường giao thông (để thuận tiện cho việc nghiên cứu, hạt thường thường theo nước mưa trôi về dọc đường giao thông), mỗi khu vực vạch 01 tuyến chính để từ đó lập 04 tuyến điều tra theo hướng phụ;

+ Mẫu được khảo sát ở tầng đất mặt; + Chỉ tiêu theo dõi số hạt/m2.

- Lập ô tiêu chuẩn, đo đạc và quan trắc

Ô tiêu chuẩn được lập cho từng trạng thái rừng đặc trưng ở các đai độ cao khác nhau, theo các hướng sườn khác nhau của bán đáo Sơn Trà. Bậc độ cao xác

định trên bản đồ địa hình và kiểm tra bằng GPS ngoài thực địa các khu vực khác nhau địa hình thấp và địa hình cao tương ứng với các độ cao lần lượt là 50 m, 150 m (địa hình thấp, đất ẩm và địa hình cao, đất ẩm là những địa hình có suối chảy qua). Ở mỗi điểm nghiên cứu đều tiến hành lập các 6 ô tiêu chuẩn cố định để theo dõi, mỗi ô tiêu chuẩn có diện tích 100 m2 (10 m x 10 m). Trong các ô cố định này, chúng tôi lập 05 ô dạng bản cỡ 4 m2 (2 m x 2 m) để xác định một số chỉ tiêu sinh thực. để theo dõi quá trình từ khi cây ra hoa đến lúc hình thành quả để xác định một số chỉ tiêu sinh thực như: Số lượng cụm hoa/m2 cây Bìm bìm che phủ; Số hoa đơn/cụm hoa; Số lượng quả/cụm hoa; Số hạt chắc/quả. Từ đó tính số lượng hạt trên m2 cây Bìm bìm che phủ.

Hình 3.1. Ô tiêu chuẩn được sử dụng để xác định một số chỉ tiêu sinh thực Chỉ tiêu tính:

Đếm số cụm hoa trên 1 ô dạng bản rồi tính số cụm hoa trung bình trên 1 m2 cây Bìm bìm hoa trắngche phủ.

Đếm số hoa đơn trên từng cụm hoa rồi tính số hoa đơn trung bình trên một cụm hoa.

Đếm số lượng quả trên từng cụm hoa, sau đó tính số quả trung bình trên một cụm hoa và tính tỉ lệ đậu quả bằng cách lấy số quả/cụm hoa chia cho số hoa đơn/cụm hoa.

Đếm tổng số hạt/cụm hoa và sử dụng tay bóp để loại các hạt lép, còn lại số hạt chắc/cụm hoa (những hạt chắc thường cứng; hạt lép thường mềm). Tính tỉ lệ hạt chắc bằng cách lấy số hạt chắc chia cho tổng số hạt.

3.5.1.3. Nghiên cứu khả năng tái sinh cây Bìm bìm hoa trắng - Bố trí thí nghiệm

Thí nghiệm được bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên đầy đủ (RCBD) diện hẹp, 3 lần nhắc lại.

Thí nghiệm trong phòng: tiến hành chọn cây đại diện cho các tuổi (đường kính khoảng 2; 5; 10; 15 và 20 cm), mỗi loại đường kính chọn 3 cây để lấy thân chính. Đối với thí nghiệm đánh giá khả năng tái sinh từ cành: lựa chọn 5 cây Bìm bìm có đường kính tương đương nhau (xấp xỉ 10 cm). Tiến hành lấy cành cấp 1 – cành mọc từ thân, cành cấp 2 – mọc từ cành cấp 1, cành cấp 3 – mọc từ cành cấp 2. Cắt thân, các cành thành đoạn dài 50 cm (mỗi loại 45 đoạn). Tương tự thu rễ chính (rễ mọc từ gốc), rễ cấp 1 (rễ nhánh của rễ chính) mỗi loại 45 mẫu. Tiến hành giâm các đoạn thân, cành và rễ (15 đoạn/chậu) vào cát sạch, để trong phòng mát, tưới đủ ẩm (độ ẩm 70-80%).

Thí nghiệm ngoài thực địa: thu mẫu thân, cành, rễ tương tự như thí nghiệm trong phòng. Sau đó giâm các đoạn thân, cành và rễ vào đất (tại nơi thu mẫu thân, cành, rễ của cây Bìm bìm).

Đối với rễ cây, ngoài việc chặt các đoạn rễ giâm vào cát sạch và để trên mặt đất như trên, cũng tiến hành theo dõi các đoạn rễ nằm trong đất: lựa chọn 50 mẫu rễ mọc từ thân cây Bìm bìm sau đó cắt rễ sát thân, để phần rễ nguyên còn lại trong đất và theo dõi.

Đối với thí nghiệm theo dõi khả năng tái sinh của cây Bìm bìm sau khi cắt gốc: lựa chọn mỗi loại tuổi cây (đường kính thân: khoảng 2; 5; 10; 15 và 20 cm) 10 cây, sau đó cắt gốc 20cm và theo dõi khả năng tái sinh của cây.

Thí nghiệm thực địa được tiến hành vào cuối mùa mưa tháng 11- tháng 12 (đất ẩm ướt) và mùa khô tháng 5- tháng 6 (đất khô).

- Chỉ tiêu và phương pháp theo dõi + Theo dõi định kỳ 10 ngày/lần;

+ Xác định tỷ lệ mọc tái sinh từ các đoạn thân, cành và rễ cây Bìm bìm hoa trắng.

- Bố trí thí nghiệm thực địa đánh giá khả năng tái sinh của cây Bìm bìm hoa trắng từ phần gốc còn lại sau chặt

Bố trí thí nghiệm diện rộng tại Khu Bảo tồn thiên nhiên Sơn Trà - Đà Nẵng đối với cây Bìm bìm hoa trắng.

+ Lựa chọn các cây: Mỗi loại Bìm bìm lựa chọn 5 loại đường kính thân (tương ứng với 5 tuổi cây): 2; 5; 10; 15 và 20 cm, mỗi loại đường kính chọn 20 cây trên diện tích 1.300 m2. Dùng dao sắc chặt gốc cách mặt đất 20-30 cm;

+ Chỉ tiêu theo dõi: Quan sát số cây nảy mầm trở lại, số mầm/gốc, chiều dài và đường kính mầm (sử dụng thước dây đo chiều dài mầm và thước kẹp palme đo đường kính mầm) vào các thời điểm sau chặt 7; 15; 30; 45 và 60 ngày.

Tính tỷ lệ (%)cây tái sinh sau chặt 30, 45 và 60 ngày.

3.5.1.4. Nghiên cứu khả năng nảy mầm từ hạt cây Bìm bim hoa trắng - Bố trí thí nghiệm đánh giá khả năng nảy mầm từ hạt Bìm bìm

Cách thu hạt Bìm bìm cho thí nghiệm: Vào tháng 6, hái quả toàn bộ quả

theo từng m2 đưa về phòng thí nghiệm bóc lấy toàn bộ hạt chắc, loại bỏ hạt lép bằng cách dùng tay bóp nhẹ nếu hạt lép sẽ bị bẹp lại. Số hạt chắc cần cho thí nghiệm là 300 hạt Bìm bìm hoa trắng.

Bố trí thí nghiệm: Bố trí thí nghiệm diện hẹp, 3 lần nhắc lại. Hạt của cây

Bìm bìm hoa trắng được gieo trong chậu vại. Chậu vại chứa cát, độ ẩm khoảng 70-80%, gieo 10 hàng x 10 hạt/hàng (100 hạt/thùng). Giữ đất đủ ẩm trong suốt quá trình thí nghiệm.

- Chỉ tiêu theo dõi: số hạt và tỷ lệ nảy mầm của hạt sau gieo 5; 10; 15; 20;

25; 30; 35; 40 và 45 ngày.

3.5.2. Nghiên cứu các biện pháp phòng trừ cây Bìm bìm hoa trắng

Bằng kinh nghiệm của thế giới kết hợp với kinh nghiệm phòng trừ cây Trinh nữ thân gỗ (Mimosa pigra L.) (Nguyễn Hồng Sơn và cs., 2007; Nguyễn Hồng Sơn và Phạm Văn Lầm, 2010) tại Việt Nam để phòng trừ cây Bìm bìm một cách hiệu quả có thể áp dụng nhiều biện pháp khác nhau. Tuy nhiên, việc lựa chọn và áp dụng biện pháp nào phù hợp phụ thuộc vào đặc điểm xâm hại, điều kiện địa lý, hệ sinh thái, điều kiện kinh tế, xã hội...của từng vùng.

3.5.2.1. Nghiên cứu hiệu quả và khả năng ứng dụng biện pháp cắt gốc cây Bìm bìm trưởng thành

Nghiên cứu được tiến hành trên thực địa, kiểu thí ngiệm diện rộng với cây Bìm bìm trưởng thành hoa trắng. Sử dụng thước kẹp palme để đo đường gốc hoặc thước dây để đo chu vi gốc sau đó tính ra đường kính.

Bố trí thí nghiệm: Lựa chọn mỗi tuổi cây 50 cây, (đường kính gốc khoảng 2; 5; 10; 15 và 20 cm) đánh số thứ tự từ 1 đến 50, dùng dao sắc cắt cách gốc 10- 15 cm, sau đó để nguyên cây phơi khô trên mặt đất. Đối chứng là công thức không cắt gốc.

Hiệu quả diệt gốc (%) = số gốc chết sau cắt/tổng số gốc cắt. Hiệu quả diệt thân cây (%) = số cây chết sau cắt/tổng số cây cắt. Chỉ tiêu và phương pháp theo dõi:

- Theo dõi định kỳ 1 tháng/lần (liên tục trong 9 tháng) số mầm mọc tái sinh trên gốc và trên các cành.

- Số gốc, thân cây chết sau xử lý.

3.5.2.2. Nghiên cứu hiệu quả và khả năng ứng dụng biện pháp nhổ cây Bìm bìm hoa trắng mới mọc từ hạt

- Bố trí thí nghiệm:

Nghiên cứu được tiến hành theo hình thức thí nghiệm diện rộng với diện tích ô thí nghiệm 1000 m2 có 4 công thức, không nhắc lại.

+ Công thức thí nghiệm: Công thức 1 – nhổ cây con 1 tháng/lần.

Công thức 2 – nhổ cây con 3 tháng/lần.

Công thức 3 – nhổ cây con 9 tháng/lần.

Công thức 4 – đối chứng (không nhổ cây con).

- Phương pháp theo dõi: Mỗi công thức tiến hành đếm số cây con tại 10

điểm cố định trên 2 đường chéo góc, mỗi điểm 10 m2. Đếm số tất cả cây con mới mọc tại các điểm trên “Phương pháp nghiên cứu Bảo vệ thực vật tập III” (Viện Bảo vệ thực vật, 2000).

- Chỉ tiêu theo dõi: Mật độ cây con mới mọc tại từng ô thí nghiệm.

- Hiệu quả phòng trừ được hiệu đính theo công thức Henderson – Tilton. 3.5.2.3. Nghiên cứu hiệu quả và khả năng sử dụng thuốc trừ cỏ để diệt cây con Bìm bìm hoa trắng mới mọc từ hạt

Nghiên cứu được tiến hành theo hình thức thí nghiệm diện hẹp, nhắc lại 3 lần, diện tích 300 m2/ô với 2 hoạt chất là Metsulfuron Methyl và Glyphosate, mỗi loại được thí nghiệm với 4 liều lượng khác nhau:

Công thức Loại thuốc và liều lượng sử dụng Ghi chú

CT1 Metsulfuron methyl-lượng 20 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT2 Metsulfuron methyl-lượng 40 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT3 Metsulfuron methyl- lượng 80 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT4 Metsulfuron methyl-lượng 120 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT5 Glyphosate – lượng 1.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT6 Glyphosate – lượng 2.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT7 Glyphosate – lượng 3.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT8 Glyphosate – lượng 4.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT9 Đối chứng Không phun thuốc

Ghi chú: hoạt chất Metsulfuron methyl – thuốc đại diện là Ally 20DF; hoạt chất Glyphosate – thuốc đại diện là Roundup 480SC

Dụng cụ phun rải: sử dụng bìm bơm động cơ Honda WJR 4025 – dung tích 25 lit, phun đều toàn bộ bề mặt lá cây Bìm Bìm.

Chỉ tiêu và phương pháp theo dõi:

- Hiệu quả xử lý cây Bìm Bìm sau thời điểm phun 10; 20; 30; 40; 50; 60: được xác định thông qua tỷ lệ cây chết trước và sau thí nghiệm;

- Hiệu quả phòng trừ được hiệu đính theo công thức Henderson – Tilton. 3.5.2.4. Nghiên cứu hiệu quả và khả năng sử dụng thuốc trừ cỏ để diệt cây Bìm bìm trưởng thành bằng hình thức phun lên lá

Nghiên cứu được tiến hành theo hình thức thí nghiệm diện hẹp, nhắc lại 3 lần, diện tích 300 m2/ô với 2 loại thuốc trừ cỏ Metsulfuron Methyl và Glyphosate, mỗi loại được thí nghiệm với 4 lượng dùng khác nhau, cụ thể:

Công

thức Loại thuốc và liều lượng sử dụng Ghi chú

CT1 Metsulfuron methyl-lượng 40 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT2 Metsulfuron methyl-lượng 80 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT3 Metsulfuron methyl- lượng 120 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT4 Metsulfuron methyl-lượng 150 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT5 Glyphosate – lượng 2.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT6 Glyphosate – lượng 3.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT7 Glyphosate – lượng 4.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT8 Glyphosate – lượng 5.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT9 Đối chứng Không phun thuốc

Ghi chú: hoạt chất Metsulfuron methyl – thuốc đại diện là Ally 20DF; hoạt chất Glyphosate – thuốc đại diện là Roundup 480SC

Dụng cụ phun rải: sử dụng bìm bơm động cơ Honda WJR 4025 – dung tích 25 lit, phun đều toàn bộ bề mặt lá cây Bìm Bìm.

Chỉ tiêu và phương pháp theo dõi:

- Hiệu quả xử lý cây Bìm Bìm sau 1, 2, 3 và 6 tháng: được xác định thông qua tỷ lệ cây chết trước và sau thí nghiệm;

- Hiệu quả phòng trừ được hiệu đính theo công thức Henderson – Tilton. 3.5.2.5. Nghiên cứu hiệu quả và khả năng sử dụng thuốc trừ cỏ để diệt cây Bìm bìm trưởng thành bằng biện pháp tiêm thuốc trừ cỏ vào thân cây

Bố trí thí nghiệm diện hẹp, theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh, 3 lần nhắc lại, diện tích 300 m2/lần nhắc lại. Thuốc trừ cỏ được sử dụng là thuốc trừ cỏ chọn lọc hoạt chất Metsulfuron Methyl – thuốc thương phẩm đại diện là Ally 20DF và thuốc trừ cỏ không chọn lọc có hoạt chất Glyphosate – thuốc thương phẩm đại diện là Roundup 480SC, mỗi loại thuốc được thí nghiệm với 4 liều lượng khác nhau như sau:

Công

thức Loại thuốc và liều lượng sử dụng Ghi chú

CT1 Metsulfuron methyl-lượng 40 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT2 Metsulfuron methyl-lượng 80 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT3 Metsulfuron methyl- lượng 120 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT4 Metsulfuron methyl-lượng 150 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ chọn lọc CT5 Glyphosate – lượng 2.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT6 Glyphosate – lượng 3.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT7 Glyphosate – lượng 4.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT8 Glyphosate – lượng 5.000 g a.i./ha Thuốc trừ cỏ không chọn lọc CT9 Đối chứng Không tiêm thuốc

Ghi chú: hoạt chất Metsulfuron methyl – thuốc đại diện là Ally 20DF; hoạt chất Glyphosate – thuốc đại diện là Roundup 480SC

Thuốc Roundup 480SC sử dụng trực tiếp (không hòa với nước); thuốc Ally 20DF hòa với nước theo tỷ lệ 1 gói Ally 20DF (1,5g) hòa với 30 ml nước.

Dụng cụ tiêm thuốc: sử dụng xilanh có dung tích 50 ml hoặc 500 ml tùy theo từng cây (tùy theo đường kính thân).

Chỉ tiêu và phương pháp theo dõi:

- Hiệu quả xử lý cây Bìm bìm sau 1, 2, 3 và 6 tháng: được xác định thông qua tỷ lệ cây chết trước và sau thí nghiệm;

- Hiệu quả phòng trừ được hiệu đính theo công thức Henderson – Tilton. 3.5.3. Phương pháp xử lý số liệu

Số liệu được tính toán bằng phần mềm excel và xử lý theo chương trình thống kê sinh học IRRSTAT 5.0.và Công thức Henderson - Tilton.

Công thức Henderson - Tilton:

Hiệu lực của thuốc % = (1- Ta x Cb ) x 100

Ca Tb

Trong đó: Ta là mật độ (MĐ) cây sống ở công thức TN sau xử lý;