Tiến hành: Hút 1000microL dịch chiết
Thêm 500microL dung môi+ 4000 microL nước cất Thêm 300microL NaNO2, lắc đều để phản ứng 5 phút
Sau đó thêm 300microL AlCl3 10% + 2000microL NaOH 1M Để 15 phút sau đó đem đo OD ở bước sóng 510nm.
Tiến hành lặp lại thí nghiệm 3 lần trên 3 quả khác nhau (cùng giống). Công thức tính hàm lượng flavonoid (mgCAE/g CK):
HL flavonoid = M a V A b OD . . ). (
Trong đó: OD là độ hấp thụ quang của mẫu ở bước sóng 510nm; b là hệ số phương trình đường chuẩn;
A độ pha loãng;
V là thể tích chiết (ml);
a là hệ số phương trình đường chuẩn; M là khối lượng mẫu (g).
3.6.6. Xác định hàm lượng polyphenol (ISO 145021-2005)Chiết mẫu: Chiết mẫu:
Cân 0.4g mẫu đã đông khô vào ống falcon sạch. Mỗi công thức lặp lại 3 lần, cân đến mẫu cuối cùng.
Hút thêm vào 8ml ethanol 70%, lắc đều.
Chiết trong bể ổn nhiệt ở 30°C trong 3 giờ, 15 phút lắc 1 lần. Ly tâm với tốc độ 3500 vòng/phút ở 4°C trong 10 phút. Chiết dịch trong sang ống falcon sạch để phân tích. Tiến hành thí nghiệm:
Chuẩn bị ống falcon 15ml sạch.
Hút 125µl dung dịch mẫu vào từng ống falcon, mỗi công thức lặp lại 3 lần.
Thêm 375µl nước cất.
Thêm vào 2.5ml dung dịch folin (đã pha loãng 10 lần từ dung dịch folin 0,1N).
Để dung dịch phản ứng trong 4 phút.
Thêm 2ml dung dịch Na2CO3 7.5% và lắc đều. Để dung dịch ở nhiệt độ phòng trong bóng tối 2 giờ. Tiến hành so màu ở bước sóng 760nm.
Tính toán kết quả: Hàm lượng polyphenol:
F= ( &)∗(∗
∗"
Trong đó: F là hàm lượng Polyphenol (mgGAE/g) A là độ pha loãng