3.1. Chuẩn bị bệnh nhân
Bệnh nhân đ−ợc lấy máu khi đói hoặc ở những thời điểm khác nhau tuỳ theo yêu cầu của xét nghiệm. Mẫu máu không chống đông đ−ợc ly tâm để lấy huyết thanh. Các
mẫu huyết thanh cần đ−ợc định l−ợng càng sớm càng tốt. Nếu ch−a làm ngay có thể l−u giữ đ−ợc vài ngày ở nhiệt độ 2-8 0C, để lâu hơn thì cần bảo quản ở nhiệt độ -20 0C.
3.2. Hóa chất, dụng cụ và thiết bị đo đếm
3.2.1. Hóa chất: các RIA kit đ−ợc các hUng chế sẵn.
3.2.2. Dụng cụ và thiết bị đo đếm:
- Bộ micropipets, máy trộn mẫu, máy lắc mẫu tự động, máy ly tâm, tủ lạnh.
- Thiết bị đo đếm: Máy đo hoạt độ phóng xạ chuyển mẫu tự động hoặc bán tự động có gắn phần mềm để xử lý số liệu bằng computer theo ch−ơng trình đU đ−ợc gài đặt sẵn.
3.3. Qui trình định l−ợng
Tuỳ theo chất cần định l−ợng và Kit của các hUng sản xuất mà trong quy trình thực hiện có các chi tiết khác nhaụ Để minh hoạ, sau đây là qui trình định l−ợng FT3 với kit RIA – FT3 của hUng CIS Biointernational (Pháp).
Một bộ RIA – FT3 kit gồm có:
- 1 lọ 110 ml tracer 125I- FT3 với hoạt tính <150 kBq trong dung dịch đệm. - 7 lọ 0,5 ml huyết thanh chuẩn FT3 có nồng độ từ 0→77 pmol/ l.
- 1 lọ 0,5 ml huyết thanh FT3 cho tr−ớc nồng độ để kiểm tra (Quality Control: QC). - 100 ống làm xét nghiệm đU đ−ợc gắn kháng thể kháng FT3.
Các b−ớc tiến hành:
- Đánh số tất cả các ống nghiệm bao gồm các ống mẫu chuẩn, mẫu kiểm tra, mẫu bệnh nhân.
- Nhỏ 50àl huyết thanh của mẫu chuẩn, mẫu kiểm tra, mẫu bệnh nhân vào từng ống nghiệm đU đ−ợc đánh số.
- Nhỏ 1000 àl tracer 125I- FT3 vào tất cả các ống.
- Lắc các ống bằng máy lắc trong 20 phút ở nhiệt độ phòng. - Loại bỏ dung dịch trong ống (phần F).
- Đo hoạt độ phóng xạ còn lại của từng ống (phần B) trong thời gian 1 phút.
- Xây dựng đồ thị chuẩn. Dựa vào đồ thị chuẩn tính ra nồng độ chất cần định l−ợng trong mẫu huyết thanh bệnh nhân và mẫu kiểm ra (QC).
Một số điều cần l−u ý:
1. Trong qui trình trên, ngoài các ống làm chuẩn, các ống kiểm tra chất l−ợng và ống mẫu bệnh nhân cần làm thêm ống hoạt độ phóng xạ tổng cộng (TC) bằng cách cho vào ống 1000 àl 125I - FT3 sau đó đem đo mà không cần phải làm một thao tác nào khác. 2. Xét nghiệm RIA phải luôn đ−ợc làm kép, mỗi mẫu 2 ống.
3. Các kết quả thu đ−ợc chỉ đáng tin cậy khi:
- TC đo đ−ợc phải trong khoảng 20.000 - 30.000 xung/phút (cpm). - B0 phải bằng: 65 - 75% của TC.
- Các giá trị thu đ−ợc từ mẫu QC sai lệch không quá ± 10% so với giá trị thực. - Không có sai khác trên 5% giữa hai ống nghiệm của bất kỳ mẫu kép nàọ