* Các loại mẫu nghiên cứu:
- Mẫu phân tươi của trâu, bò các lứa tuổi.
- Các mẫu gan của trâu, bò (để thu thập sán lá gan). - Mẫu phân trâu, bò trước khi ủ với chế phẩm sinh học. - Mẫu phân trâu, bò sau khi ủ với chế phẩm sinh học. * Dụng cụ, thiết bị:
- Kính hiển vi quang học, kính lúp.
- Bộ dụng cụ xét nghiệm phân, buồng đếm Mc.Master. - Các dụng cụ phòng thí nghiệm khác.
* Hóa chất:
- Dung dịch glycerin 50%. - Cồn 700.
* Chế phẩm sinh học sử dụng.
Ba loại chế phẩm sinh học sử dụng ủ phân trâu, bò: EMUNIV, EMIC, EMZEO.
3.3. Nội dung nghiên cứu
3.3.1. Điều tra tình hình chăn nuôi trâu, bò, xử lý phân và công tác phòng chống bệnh sán lá gan cho trâu, bò ở huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
- Tình hình chăn nuôi trâu bò ở huyện Hàm Yên - Tuyên Quang.
- Công tác phòng chống bệnh sán lá gan cho trâu, bò ở huyện Hàm Yên - Tuyên Quang.
- Tình hình xử lý phân trâu, bò tại các hộ/trại chăn nuôi trâu, bò trên địa bàn huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang.
3.3.2. Nghiên cứu sự lưu hành bệnh sán lá gan trên đàn trâu, bò của huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
- Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan trâu, bò tại 5 xã. - Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan theo tuổi trâu, bò. - Tỷ lệ và cường độ nhiễm sán lá gan theo mùa vụ.
3.3.3. Xác định loài sán lá gan gây bệnh trên đàn trâu, bò của huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
- Kết quả mổ khám gan trâu, bò thu thập sán lá gan.
- Định loài sán lá gan bằng kỹ thuật hình thái học.
3.3.4. Điều tra thực trạng xử lý phân trâu, bò ở các xã, sự ô nhiễm không khí và trứng giun sán trong phân trâu, bò trước khi xử lý phân
- Điều tra việc xử lý phân.
- Điều tra tình trạng ô nhiễm không khí do phân trâu, bò không được xử lý. - Xác định tổng số trứng giun sán trong phân trâu, bò chưa được xử lý.
3.3.5. Ứng dụng chế phẩm sinh học trong xử lý phân trâu, bò và đánh giá hiệu quả cải thiện tình trạng ô nhiễm không khí và trứng giun, sán trong phân trâu, bò sau khi xử lý phân
- Sử dụng chế phẩm sinh học ủ phân trâu bò.
- Xác định sự cải thiện tình trạng ô nhiễm không khí sau khi xử lý phân trâu, bò.
- Xác định tổng số trứng giun sán trong phân trâu, bò sau khi xử lý.
3.4. Phương pháp nghiên cứu
3.4.1. Phương pháp nghiên cứu sự lưu hành bệnh sán lá gan trên đàn trâu, bò tại một số xã thuộc huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
3.4.1.1. Phương pháp thu thập mẫu phân trâu, bò
Số lượng trâu, bò thu thập mẫu phân được tính theo công thức: n: Số mẫu cần lấy
p1: Xác suất để phát hiện được bệnh (0,95) d: Số con mắc bệnh (d= N x p2)
p2: Tỷ lệ hiện mắc dự đoán N: Tổng đàn vật nuôi
Với tỷ lệ nhiễm sán lá gan dự kiến là 20% và độ tin cậy 95% thì số trâu, bò thu mẫu ở huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang là 300 con.
Trong đó có:
Số lượng trâu: 230 con. Số lượng bò: 70 con.
Thu thập mẫu phân trâu, bò theo phương pháp lấy mẫu chùm nhiều bậc cắt ngang: lấy mẫu ở một huyện, tại huyện này lấy mẫu ở 5 xã, mỗi xã lấy mẫu tại 5 thôn. Tại mỗi thôn lấy mẫu phân ngẫu nhiên của những trâu, bò nuôi tại các hộ/trại chăn nuôi.
Mỗi trâu, bò lấy mẫu phân được ghi lại các đặc điểm như: loại gia súc (trâu/bò), tính biệt (đực/cái), tuổi (kết hợp hỏi chủ hộ và xem độ mòn răng để xác định tuổi), khối lượng cơ thể (ước đoán), trạng thái phân, các biểu hiện lâm sàng (nếu có), các đặc điểm riêng khác, họ tên chủ hộ, ngày lấy mẫu.
Mẫu phân được lấy lúc trâu, bò vừa thải ra hoặc lấy trực tiếp từ trực tràng con vật. Mỗi trâu, bò lấy khoảng 30 gam phân. Để riêng mỗi mẫu phân vào một túi nilon nhỏ, mỗi túi có kèm theo nhãn ghi những thông tin trên.
- Quy định về tuổi trâu, bò: có 4 lứa tuổi trâu, bò được nghiên cứu là:
Từ một đến hai tuổi.
Trên hai tuổi đến 5 tuổi.
Trên 5 tuổi đến 8 tuổi.
Trên 8 tuổi.
3.4.1.2. Phương pháp xét nghiệm mẫu phân
- Sử dụng phương pháp lắng cặn Benedek (1943) để xét nghiệm mẫu tìm trứng sán lá gan.
Nguyên lý: Dùng lực khuấy mẫu trong nước để tách trứng sán lá gan ra khỏi
phân, do tỷ trọng của trứng sán nặng hơn tỷ trọng của nước nên trứng sẽ lắng xuống. Vì vậy, có thể tìm trứng sán trong cặn lắng.
- Quan sát tiêu bản cặn lắng của từng mẫu phân dưới kính hiển vi quang học, độ phóng đại 100 lần để tìm trứng sán lá gan.
- Quy định cường độ nhiễm sán lá gan ở trâu, bò. Có ba mức quy định:
> 300 - 600 trứng/g phân.
600 trứng/g phân
Đánh giá kết quả: Những mẫu phân tìm thấy trứng sán lá gan được xác định là có nhiễm, ngược lại là không nhiễm. Cường độ nhiễm sán lá ganđược xác định bằng phương pháp đếm trứng Mc. Master (đếm số trứng/gam phân trên buồng đếm Mc. Master theo tài liệu của Jorgen Hansen và Brian Perry, 1994) [30].
3.4.2. Xác định loài sán lá gan gây bệnh trên đàn trâu, bò của một số xã thuộc huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
- Mổ khám gan của 50 trâu, bò theo phương pháp mổ khám không toàn diện của Skrjabin (1928), thu thập toàn bộ sán lá gan ký sinh ở gan, ống dẫn mật và túi mật của trâu, bò.
- Định danh các mẫu sán lá gan đã thu thập bằng phương pháp thường quy (làm tiêu bản, nhuộm carmin, quan sát tiêu bản nhuộm bằng mắt thường và kính lúp), dựa theo khóa định loại của Nguyễn Thị Lê và cs, (1996) [11], căn cứ vào đặc điểm hình thái, kích thước và cấu tạo của sán trưởng thành để xác định loài.
3.4.3. Phương pháp nghiên cứu tác dụng của chế phẩm sinh học trong xử lý phân trâu, bò
3.4.3.1. Phương pháp điều tra hình thức xử lý phân trâu, bò tại các địa phương
- Điều tra tình hình xử lý phân trâu, bò tại 50 hộ chăn nuôi. Việc điều tra được thực hiện theo phương pháp phỏng vấn và ghi phiếu điều tra, lựa chọn phương án trả lời trong các hình thức xử lý phân sau:
+ Thải phân trâu, bò trực tiếp ra môi trường.
+ Ủ phân trâu, bò (đánh đống ủ hoặc ủ trong hố ủ). + Xử lý phân trâu, bò bằng bể biogas.
+ Phương pháp khác (bán phân; bón phân tươi trực tiếp cho cây trồng). - Kết quả điều tra các hình thức xử lý phân được tính bằng tỷ lệ (%) số các hộ chăn nuôi trâu, bò có câu trả lời là một trong các hình thức xử lý nói trên trong tổng các hộ có hình thức xử lý phân đã điều tra.
3.4.3.2. Đánh giá sự ô nhiễm môi trường từ phân trâu, bò chưa xử lý
Số trại và hộ đánh giá: 5 hộ.
a). Phương pháp đánh giá sự ô nhiễm do một số loại khí độc từ phân trâu, bò * Đánh giá bằng cảm quan
Điều tra tình hình ô nhiễm không khí trong bán kính 50m xung quanh khu vực 5 hộ chăn nuôi trâu, bò chưa áp dụng biện pháp xử lý phân nào.
Tình hình ô nhiễm không khí được đánh giá qua khứu giác trực tiếp, kết hợp phỏng vấn và ghi phiếu điều tra tại 25 hộ dân sống trong khu vực cách các hộ chăn nuôi trâu, bò trong bán kính 50 - 100m (xung quanh mỗi hộ chăn nuôi phỏng vấn 5 hộ dân).
Mức độ ô nhiễm không khí được đánh giá theo 3 mức: không mùi, ít mùi, nặng mùi, Mức độ mùi được phân loại cụ thể như sau:
Mức độ mùi Mô tả
Không mùi Hoàn toàn không ngửi thấy mùi hôi
Ít mùi Có mùi hôi thoang thoảng nhưng không khó chịu Nặng mùi Mùi hôi nồng nặc, gây cảm giác khó chịu, đau đầu
b), Phương pháp xác định các loại trứng giun, sán và tổng số trứng giun, sán trong phân trâu, bò trước và sau khi sử dụng chế phẩm sinh học
- Phương pháp xác định các loại trứng giun, sán trong phân trâu, bò: 5 mẫu phân trâu, bò được xét nghiệm bằng phương pháp phù nổi với dung dịch muối bão hòa để tìm trứng các loài giun tròn và phương pháp lắng cặn để tìm trứng các loài sán lá. Căn cứ vào hình thái trứng để kết luận đó là trứng của những loài giun, sán nào.
- Tổng số trứng của các loài giun, sán trong một mẫu phân được xác định bằng phương pháp đếm trứng trên buồng đếm Mc. Master.
3.4.3.3. Phương pháp đánh giá hiệu quả xử lý phân trâu, bò bằng chế phẩm sinh học
a) Bố trí để ứng dụng chế phẩm sinh học.
Sử dụng 3 loại chế phẩm sinh học với số hộ áp dụng như sau: - 1 hộ sử dụng chế phẩm: EMUVIV để ủ phân trâu bò.
- 2 hộ sử dụng chế phẩm: EMIC để ủ phân trâu bò. - 2 hộ sử dụng chế phẩm: EMZEO để ủ phân trâu bò. Lượng phân ủ ở mỗi hộ chăn nuôi: 4 - 5 tấn
b) Sử dụng chế phẩm sinh học xử lý phân trâu, bò tại các hộ. Cách sử dụng:
* Đối với chế phẩm EMUNIV: Hòa 1 gói (200 gam) vào 5 lít nước sạch, tưới cho 1 tấn phân trâu bò, đánh đống, che bạt, ủ trong 25 ngày - 30 ngày.
* Đối với chế phẩm EMIC: 300 gam chế phẩm hòa với nước sach, tưới cho 1 tấn phân trâu bò, dùng bạt che kín, sau 7 - 10 ngày thì đảo trộn, Ủ trong 25 ngày - 30 ngày.
* Đối với chế phẩm EMZEO: 3 gói EMZEO (mỗi gói 200 gam) hòa với nước, tưới đều cho 1 tấn phân chuồng, đảo trộn, đánh đống, che bạt, ủ trong 25 ngày - 30 ngày.
c). Phương pháp đánh giá hiệu quả xử lý phân bằng chế phẩm sinh học
* Phương pháp đánh giá sự cải thiện môi trường không khí sau khi ứng dụng chế phẩm sinh học xử lý phân trâu, bò
Sau khi dùng chế phẩm sinh học ủ phân trâu, bò tiến hành: đánh giá cảm quan về mùi ở chuồng nuôi trâu, bò và khu vực cách chuồng khoảng 50 - 100m. * Phương pháp đánh giá tác dụng của chế phẩm sinh họcdiệt trứng giun, sán trong phân sau xử lý
So sánh số lượng trứng giun, sán (trong 1 gam phân) ở các mẫu phân đã xử lý với số lượng trứng giun, sán (trong 1 gam phân) ở các mẫu phân trước khi xử lý để đánh giá chế phẩm sinh học có tác dụng diệt trứng giun, sán hay không.
3.4.4. Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thu thập được xử lý theo phương pháp thống kê sinh học (Nguyễn Văn Thiện 2008) trên phần mềm Excel 2010.
Phần 4
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN
4.1. Tình hình chăn nuôi trâu, bò và công tác phòng chống bệnh sán lá gan cho trâu, bò ở các xã thuộc huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang
Bảng 4.1. Thực trạng chăn nuôi và phòng chống bệnh ký sinh trùng cho trâu, bò ở một số xã thuộc huyện Hàm Yên (10 hộ/xã)
Biện pháp sử dụng Bạch Xa Thành Long Minh Hương Hùng Đức Tân Thành Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%) Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%) Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%) Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%) Số hộ áp dụng Tỷ lệ (%) Chăn thả hoàn toàn tự nhiên 6 60,00 3 30,00 1 10,00 0 0,00 3 30,00 Bán chăn thả (có cho ăn tại chuồng) 4 40,00 7 70,00 9 90,00 10 100 7 70,00 Chuồng trại hợp vệ sinh về xây dựng 1 10,00 1 10,00 4 40,00 2 20,00 5 50,00 Vệ sinh tốt chuồng nuôi 1 10,00 1 10,00 4 40,00 2 20,00 5 50,00 Xử lý phân bằng bể biogas 0 0,00 0 0,00 1 10,00 1 10,00 0 0,00 Thu gom phân ủ 1 10,00 2 20,00 3 30,00 0 0,00 3 30,00 Vệ sinh bãi chăn thả 1 10,00 2 20,00 2 20,00 1 10,00 0 0,00 Tẩy sán lá 2 20,00 1 10,00 0 0,00 4 40,00 5 50,00
Chúng tôi đã điều tra thực trạng chăn nuôi và phòng chống bệnh ký sinh trùng cho đàn trâu, bò của các hộ chăn nuôi được chọn ngẫu nhiên tại các xã: Bạch Xa, Thành Long, Minh Hương, Hùng Đức và Tân Thành của huyện Hàm Yên - tỉnh Tuyên Quang.
Kết quả được thể hiện ở bảng 4.1 cho thấy:
Tại xã Hùng Đức, tất cả các hộ điều tra thực trạng chăn nuôi trâu, bò bằng phương thức chăn thả hoàn toàn hoạc tự nhiên và kết hợp cho ăn thêm thức ăn tại chuồng có 10/10 hộ điều tra áp dụng chiếm tỷ lệ 100%. Tại xã Minh Hương, đa số các hộ điều tra thực trạng chăn nuôi trâu, bò bằng phương thức chăn thả tự nhiên và kết hợp cho ăn thêm thức ăn tại chuồng có 9/10 hộ điều tra áp dụng chiếm tỷ lệ 90%. Tại xã Thành Long và Tân Thành, các hộ điều tra thực trạng chăn nuôi trâu, bò bằng phương thức chăn thả tự nhiên và kết hợp cho ăn thêm thức ăn tại chuồng có 7/10 hộ điều tra áp dụng chiếm tỷ lệ 70%. Tại xã Bạch Xa, các hộ điều tra thực trạng chăn nuôi trâu, bò bằng phương thức chăn thả tự nhiên và kết hợp cho ăn thêm thức ăn tại chuồng có 4/10 hộ điều tra áp dụng, tỷ lệ 40%.
Thực hiện điều tra các hộ xây dựng chuồng trại hợp vệ sinh. Có 50% số hộ áp dụng tại xã Tân Thành; 40% ở xã Minh Hương; 20% ở xã Hùng Đức và 10% ở hai xã Bạch Xa và Thành Long xây dựng chuồng trại tương đối hợp vệ sinh.
Thực hiện điều tra các hộ có biện pháp đảm bảo vệ sinh chuồng nuôi. Chỉ có 50% số hộ áp dụng tại xã Tân Thành; 40% ở xã Minh Hương; 20% ở xã Hùng Đức và xã Bạch Xa và Thành Long thực hiện biện pháp này chỉ chiếm 10% mỗi xã trong tổng số 10 hộ điều tra.
Thực hiện điều tra các hộ xử lý phân bằng bể Biogas thì có: Xã Minh Hương và Hùng Đức mỗi xã có 1/10 hộ điều tra sử dụng biện pháp này chiếm tỷ lệ 10%; còn ba xã khác không có hộ nào sử dụng biện pháp này.
Thực hiện điều tra các hộ thu gom phân để ủ: Có rất ít hộ đã điều tra thực hiện biện pháp xử lý phân thu gom để ủ. Đối với xã Minh Hương và Tân Thành là hai xã có số hộ thu gom phân để ủ nhiều nhất, song đó tỷ lệ các hộ cũng chỉ chiếm 30%, xã Thành Long cũng chỉ chiếm 20%, xã Bạch Xa chiếm 10% số hộ điều tra.
Đặc biệt tại xã Hùng Đức điều tra 10 hộ không có hộ nào thực hiện biện pháp thu gom phân để ủ.
Thực hiện điều tra các hộ vệ sinh bãi chăn thả trâu, bò có xã Thành Long và Minh Hương mỗi xã có 2/10 hộ thực hiện chiếm 20%; xã Hùng Đức và Bạch Xa có 1/10 hộ thực hiện chiếm 10%; xã Tân Thành không có hộ nào thực hiện.
Thực hiện điều tra các hộ tẩy sán lá gan: Có 50% số hộ tại Tân Thành, 40% số hộ tại Hùng Đức, 20% số hộ tại Bạch Xa, 10% số hộ tại Thành Long, 0% số hộ tại Minh Hương thực hiện tẩy sán lá gan cho đàn trâu, bò nuôi trong gia đình. Rất nhiều số hộ điều tra tại 5 xã của huyện Hàm Yên ít hiều biết về tác động của sán lá gan đồi với cơ thể của đàn trâu, bò. Nên còn nhiều chủ quan với việc tẩy sán cho gia súc.
Như vậy, tổng quan công tác phòng chống bệnh sán lá gan ở trâu, bò tại 5 xã: Hùng Đức, Tân Thành, Minh Hương, Thành Long, Bạch Xa còn ít được quan tâm. Đa số các hộ điều tra chăn nuôi trâu, bò đều chưa chú ý đến xây dựng chuồng trại