1. Những phản ứng liên hệ đến nguồn thức ăn có nitơ
1.1. Phản ứng Indol: Một số vi khuẩn như E.coli có enzyme Tryptophanase chuyển được tryptophan thành Indol. tryptophan thành Indol.
Nuôi cấy vi khuẩn ở nước pepton không chứa đường sau 18 - 24 giờ ủ ở 37oC, nhỏ 2-3 giọt thuốc thử Kovac’s (para dimethyl amino benzaldehyt trong rượu isoamyl và HCl), màu đỏ xuất hiện trong vòng 5 phút cho biết phản ứng dương tính.
1.2. Khả năng tạo thành H2S:
Nhiều vi khuẩn sử dụng những hợp chất có chứa S thiosulfat thì có thể tạo thành H2S. H2S phản ứng với FeSO4 ở trong môi trường và tạo thành FeS màu đen.
FeSO4 + H2S → FeS↓ + H2SO4
Ở phòng xét nghiệm người ta thường khảo sát khả năng tạo thành H2S ở môi trường KIA chứa FeSO4 và Na2S2O3.
1.3. Phản ứng phân giải urê:
Vi khuẩn có enzyme urease làm phân giải urê và tạo thành NH3. NH2
O = C + H2O → CO2 +
NH3 NH2
NH3 kiềm hóa môi trường đổi chỉ thị màu đỏ phenol thành màu đỏ cánh sen.
2. Những phản ứng liên hệ đến nguồn thức ăn có carbon
2.1. Khả năng lên men đường: Trong quá trình phát triển, vi khuẩn có thể lên men đường vàtạo thành acid làm đổi chỉ thị màu đỏ phenol từ màu đỏ sang màu vàng. Người ta cấy vi tạo thành acid làm đổi chỉ thị màu đỏ phenol từ màu đỏ sang màu vàng. Người ta cấy vi khuẩn vào ống chứa pepton, cao thịt, 1% đường và chỉ thị màu, phản ứng dương tính khi môi trường chuyển sang màu vàng.
Trường hợp vi khuẩn có enzyme hydrogenlyase thì tạo thành hơi phát hiện bằng ống Durham.
HCOOH → H2 + CO2
2.2. Phản ứng đỏ methyl (MR, Methyl Red): Những vi khuẩn như E.coli có khả năng lênmen glucose sinh ra hỗn hợp nhiều acid làm cho pH của môi trường giảm đến ≤ 4,5, phát men glucose sinh ra hỗn hợp nhiều acid làm cho pH của môi trường giảm đến ≤ 4,5, phát hiện bằng chỉ thị đỏ methyl, chỉ thị này đổi màu đỏ lúc pH ≤ 4,5.
Nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường MR – VP, sau 24 giờ thêm 3 giọt đỏ methyl vào. Phản ứng dương tính lúc môi trường trở thành màu đỏ.
2.3. Phản ứng Voges-Proskauer (VP): Những vi khuẩn như Enterobacter aerogenes có khảnăng lên men glucose, sản phẩm chuyển hóa ngoài acid còn có acetoin, hợp chất này bị năng lên men glucose, sản phẩm chuyển hóa ngoài acid còn có acetoin, hợp chất này bị khử oxy tạo thành diactyl, chất này tham gia vào phản ứng tạo màu với thuốc thử VP. Nuôi cấy vi khuẩn ở môi trường MR - VP, sau 24 giờ thêm vài giọt thuốc thử. Để ở phòng thí nghiệm trong 30 phút, không đậy nắp ống nghiệm, phản ứng dương tính làm xuất hiện màu đỏ.
2.4. Khả năng sử dụng Citrate: Khác với E.coli. Các loài Klebsiella và Enterobacter sử dụngCitrate như nguồn carbon duy nhất. Citrate như nguồn carbon duy nhất.
Cấy vi khuẩn bằng cách ria trên bề mặt ống thạch nghiêng Citrate Simmons chứa chỉ thị màu xanh bromothymol. Sau 24 giờ vi khuẩn sử dụng Citrate để phát triển và do đó làm kiềm hóa môi trường. Phản ứng dương tính cho thấy môi trường chuyển từ màu lục sang màu xanh dương.
3. Những phản ứng liên hệ đến enzyme
Thử nghiệm enzyme cho phép phân biệt các nhóm vi khuẩn khác nhau. Những thử nghiệm enzyme thường được thực hiện bao gồm các thử nghiệm sau:
3.1. Thử nghiệm catalase: một số vi khuẩn có khả năng sinh catalase là enzyme thủy phânH2O2 làm xuất hiện oxy. H2O2 làm xuất hiện oxy.
catalase
H2O2 H2O + ½O2
Phản ứng này được ứng dụng để phân biệt tụ cầu và liên cầu cũng như nhận biết những vi khuẩn khác.
3.2. Thử nghiệm coagulase: coagulase là enzyme do một số loài vi khuẩn tiết ra có thể làmđông huyết tương người và thỏ. Thử nghiệm coagulase được ứng dụng để xác định tụ cầu đông huyết tương người và thỏ. Thử nghiệm coagulase được ứng dụng để xác định tụ cầu gây bệnh.
3.3. Thử nghiệm Oxydase: một số vi khuẩn có enzyme Oxydase. Trong không khí enzymenày phản ứng với thuốc thử p - phenyenendieamine để tạo thành một hợp chất này phản ứng với thuốc thử p - phenyenendieamine để tạo thành một hợp chất indolphenol có màu xanh dương (hoặc tím).
Thử nghiệm này được sử dụng để nhận biết lậu cầu, cầu khuẩn màng não, phẩy khuẩn tả…