đốn số lượng Coli bằng kỹ thuật MPN - Most Probable Number).
* Nguyên tắc:
Định lượng tổng coli bằng phương pháp lên men nhiều ống dựa theo TCVN 2652 - 78 và TCVN 2681 - 78 Tiêu chuẩn nước uống - Phương pháp phân tích hĩa lý và vi khuẩn của nước. Phương pháp được tiến hành trên cơ sở lên men đường lactoza và sinh hơi trong các mơi trường lỏng, ở nhiệt độ 370C/24h và dựa trên tính chất sinh ánh kim loại của các khuẩn lạc mọc trên mơi trường cứng (thạch Endol,…) để tính số lượng coli trên nhiều ống của nhiều nồng độ pha lỗng khác nhau theo bảng MPN.
* Tiến hành:
Tùy theo độ bẩn của nước (nước đã xử lý, nước sơng, thải sinh hoạt,…) để chọn độ pha lỗng của mẫu nước.
- Nước đã khử trùng bằng clo, nước javen, clorua vơi, chiếu tia. Phân tích ở các nồng độ sau:
+ 5 ống loại 10 ml nước mẫu hoặc 1 ống loại 50 ml, 5 ống loại 10 ml; 5 ống loại 1 ml. + Hoặc 5 ống loại 10 ml; 5 ống loại 0,1 ml; 5 ống loại 0,01 ml hoặc 5 ống loại 0,1 ml; 5 ống loại 0,01 ml; 5 ống loại 0,001 ml.
- Nước thải thành phố, nước cạnh chuồng gia súc, cạnh hố xí pha lỗng được tiến hành pha lỗng cách khác.
Các nồng độ trên đều pha lỗng bằng dung dịch nước muối sinh lý NaCl hoặc dung dịch đệm phosphas.
Trên giá đựng ống nghiệm cĩ nhiều lỗ, mỗi hàng 5 ống nghiệm trong chứa các ống Durham - khoảng 50x6mm, đặt ngược để thu khí sinh ra trong q trình lên men. Cho vào mỗi ống nghiệm 1 ml nước cần phân tích. Đặt giá vào tủ ấm cĩ nhiệt độ 370C hoặc 430C. Chọn những ống CLD (Canh Lactơ phenol đỏ) dương tính - thấy men và sinh hơi (chỉ thị phenol chuyển thành màu vàng và cĩ bọt hơi trong ống Durham). Chỉ tính ngược lại những ống cĩ nồng độ pha lỗng nhất.
Hình 13
Sau khi giữ 24 giờ, các ống được đánh giá theo sự sinh khí. Kết quả dương tính về sinh khí sẽ là bằng chứng sơ bộ về sự cĩ mặt của các coliforms. Số ống dương tính sẽ được đếm và được dùng để tính số lượng thường gặp của coliforms dựa theo một bảng thống kê. Phép thử khẳng định được tiến hành bằng cách cấy mẫu dương tính vào một ống nghiệm khác.
Giả sử các khuẩn lạc của các ống lên men sinh hơi trên thạch Endol đều cĩ ánh kim ta sẽ cĩ được hộp số, tra bảng chỉ số MPN sẽ tìm được số E. coli và từ đĩ cĩ thể tính ra chỉ số coli hay colitit.