CHƢƠNG 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1. KẾT QUẢ
3.1.3. Kết quả đánh giá nền di truyền các cá thể mang gen fea*
trong quần thể BC5F1
3.1.3.1. Kết quả đánh giá nền di truyền các cá thể mang gen fea*
trong quần thể BC5F1 ở dòng lai ML10
Sau khi kiểm tra xác định đƣợc 40 cá thế BC5F1 mang kiểu gen fea* dị hợp, lựa chọn 28 cá thể kiểm tra nền di truyền so với dòng nhận gen ML10 bằng chỉ thị phân tử. Sử dụng 31 chỉ thị đa hình giữa dòng cho gen W22 và dòng nhận gen ML10 rải trên 10 NST để xác định nền di truyền ML10 của 28 cá thể mang gen fea* trong quần thể BC5F1 (bảng 3.1). Để tiết kiệm thời gian thực hiện thí nghiệm, 28 cá thể đƣợc thành 3 nhóm sau đó hỗn ADN của các cá thể theo 3 nhóm để tiến hành thực hiện phản ứng PCR. Danh sách chia nhóm nhƣ sau: Nhóm DNA Các cá thể BC5F1 trong nhóm Nhóm 1 ML10-5.1, 2, 10, 11, 13, 15, 21, 26, 30, 31 Nhóm 2 ML10-5.32, 38, 40, 45, 47, 48, 49, 61, 62, 65 Nhóm 3 ML10-5.67, 71, 73, 74, 75, 83, 86, 88
Kết quả xác định nền di truyền các cá thể mang locus gen fea* trong quần thể BC5F1 với 31 chỉ thị đa hình trên 10 nhiễm sắc thể đƣợc thể hiện qua hình 3.13.
Trong số 31 chỉ thị xác định đƣợc 29 chỉ thị xuất hiện băng đồng đồng hợp của cả nhóm 1, nhóm 2 và nhóm 3. Hai chỉ thị umc1160, umc1066 xuất hiện cá thể nhóm 3 băng dị hợp. Các cá thể nhóm 3 tiếp tục đƣợc PCR từng cá thể trong nhóm với hai chỉ thị trên (hình 3.14). Kết quả trên đƣợc thể hiện bảng sau:
Bảng 3.4: Tỉ lệ nền di truyền của các cá thể BC5F1 so với dòng nhận gen ML10
TT Tên cá thể Số chỉ thị đồng hợp/Tổng số chỉ thị đa hình % Recover Tên chỉ thị xuất hiện cá thể dị hợp ML10 Nhóm 1 100 - 1 ML10-5.1 31/31 100 - 2 ML10-5.2 31/31 100 - 3 ML10-5.10 31/31 100 - 4 ML10-5.11 31/31 100 - 5 ML10-5.13 31/31 100 - 6 ML10-5.15 31/31 100 - 7 ML10-5.21 31/31 100 - 8 ML10-5.26 31/31 100 - 9 ML10-5.30 31/31 100 - 10 ML10-5.31 31/31 100 - Nhóm 2 11 ML10-5.32 31/31 100 - 12 ML10-5.38 31/31 100 - 13 ML10-5.40 31/31 100 - 14 ML10-5.45 31/31 100 - 15 ML10-5.47 31/31 100 - 16 ML10-5.48 31/31 100 - 17 ML10-5.49 31/31 100 - 18 ML10-5.61 31/31 100 - 19 ML10-5.62 31/31 100 - 20 ML10-5.65 31/31 100 - Nhóm 3 21 ML10-5.67 31/31 100 - 22 ML10-5.71 31/31 100 - 23 ML10-5.73 29/31 93,5 umc1160, bumc1166 24 ML10-5.74 30/31 96,7 umc1160 25 ML10-5.75 30/31 96,7 - 26 ML10-5.83 31/31 100 - 27 ML10-5.86 30/31 96,7 umc1160 28 ML10-5.88 29/31 93,5 umc1160, umc1166
Trong số 31 chỉ thị xác định đƣợc 29 chỉ thị xuất hiện băng đồng hợp của cả nhóm 1, nhóm 2 và nhóm 3. Hai chỉ thị umc1160, umc1066 xuất hiện băng dị hợp ở các cá thể thuộc nhóm 3. Các cá thể nhóm 3 tiếp tục đƣợc PCR từng cá thể trong nhóm với hai chỉ thị trên. Dựa vào tính toán trên 31 chỉ thị rải đều trên toàn bộ hệ genome. Kết quả đã xác định đƣợc cá thể có nền di truyền tƣơng đƣơng dòng mẹ ML10 nhất, đạt 31/31 số chỉ thị (tỷ lệ 100%) xuất hiện băng ADN tƣơng tự với dòng ML10 là các cá thể thuộc nhóm 1 (ML10-5.1, 2, 10, 11, 13, 15, 21, 26, 30, 31), nhóm 2 (ML10-5.32, 38, 40, 45, 47, 48, 49, 61, 62, 65) và nhóm 3 gồm các cá thể: ML10-5.67, 71, 83. Các cá thể ML10-5.74, 75, 86 đạt 30/31 (tỷ lệ 96,7%) số chỉ thị xuất hiện băng ADN giống với dòng ML10. Cá thể ML10-5.73 và ML10-5.88 đạt 29/31 (tỷ lệ 93,5%) số chỉ thị xuất hiện băng ADN giống với dòng ML10 (bảng 3.5, hình 3.13, 3.14).
Hình 3.13. Kết quả kiểm tra nền di truyền nhóm cá thể BC5F1 của 31 chỉ thị trên 10 nhiễm sắc thể
(Thứ tự các mẫu từ trái qua phải: Nhóm 1-Nhóm 2- Nhóm 3- ML10- W22, sử dụng Ladder 20bp)
Hình 3.14. Kết quả kiểm tra nền di truyền của các cá thể BC5F1 thuộc nhóm 3 với các chỉ thị umc1160 và umc1166
3.1.3.2. Kết quả đánh giá nền di truyền các cá thể mang gen fea*
trong quần thể BC5F1 ở dòng lai BL10
Đối với tổ hợp lai BL10/W22 ở thế hệ BC5F1 xác định đƣợc 41 cá thể mang kiểu gen dị hợp fea*. Lựa chọn 27 cá có kiểu hình đẹp để xác định nền di truyền so với dòng nhận gen BL10 bằng 26 chỉ thị đa hình giữa dòng cho gen W22 và dòng nhận gen BL10 (bảng 3.2). Để tiết kiệm thời gian thực hiện thí nghiệm, 27 cá thể đƣợc thành 3 nhóm sau đó hỗn ADN của các cá thể theo 3 nhóm để tiến hành thực hiện phản ứng. Ba nhóm ADN hỗn nhƣ sau:
Nhóm ADN Các cá thể trong nhóm
Nhóm 1 BL10-5.1, 3, 4, 5, 6, 7, 12, 14, 15, 29
Nhóm 2 BL10-5.36, 37, 40, 43, 45, 46, 47, 49, 50, 51
Nhóm 3 BL10-5.62, 69, 70, 74, 79, 81, 82.
Kết quả xác định nền di truyền của các nhóm cá thể so với giống nền thể hiện hình 3.15. Kết quả cho thấy, trong 26 chỉ thị, xác định đƣợc 24 chỉ thị xuất hiện băng đồng hợp ở cả 3 nhóm cá thể. Còn lại 2 chỉ thị umc1160 trên NST1 xuất hiện băng dị hợp ở cá thể nhóm 1 và chỉ thị phi070 (NST6) xuất hiện ở
nhóm cá thể số 3. Các cá thể trên tiếp tục đƣợc PCR từng cá thể trong nhóm với hai chỉ thị trên (hình 3.16). Dựa vào kết quả hình 3.15, hình 3.16 và bảng 3.5, cho thấy:
Xác định đƣợc 21 cá thể có nền di truyền cao nhất 100% so với dòng BL10, 26/26 số chỉ thị (đạt tỉ lệ 100%) xuất hiện băng đồng hợp tƣơng tự dòng bố BL10, cụ thể là 7 cá thể thuộc nhóm 1 (BL10-5.3, 4, 5, 7, 12, 15, 29) và toàn bộ cá thể thuộc nhóm 2 (BL10-5.36, 37, 40, 43, 45, 46, 47, 49, 50, 51) và 4 cá thể thuộc nhóm 3 (BL10-5.62, 69, 70, 79). Còn lại các cá thể BL10- 5.1, BL10-5.6, BL10-5.12, BL10-5.62, BL10-5.74, BL10-5.81, BL10-5.82 đạt 25/26 số chỉ thị tƣơng đồng với dòng bố BL10, có tỷ lệ nền di truyền so với giống nhận gen BL10 đạt 96,7%.
Bảng 3.5. Tỉ lệ nền di truyền của các cá thể BC5F1 so với dòng nhận gen BL10
STT Tên cá thể Số chỉ thị đồng hợp/Tổng số chỉ thị đa hình % Recover Tên chỉ thị xuất hiện cá thể dị hợp BL10 26/26 Nhóm 1 1 BL10-5.1 25/26 96,7 umc1160 2 BL10-5.3 26/26 100 - 3 BL10-5.4 26/26 100 - 4 BL10-5.5 26/26 100 - 5 BL10-5.6 25/26 96,7 umc1160 6 BL10-5.7 26/26 100 - 7 BL10-5.12 25/26 96,7 umc1160 8 BL10-5.14 26/26 100 - 9 BL10-5.15 26/26 100 - 10 BL10-5.29 26/26 100 - Nhóm 2 11 BL10-5.36 26/26 100 - 12 BL10-5.37 26/26 100 - 13 BL10-5.40 26/26 100 - 14 BL10-5.43 26/26 100 - 15 BL10-5.45 26/26 100 - 16 BL10-5.46 26/26 100 - 17 BL10-5.47 26/26 100 - 18 BL10-5.49 26/26 100 - 19 BL10-5.50 26/26 100 - 20 BL10-5.51 26/26 100 - Nhóm 3 21 BL10-5.62 25/26 96,7 phi070 22 BL10-5.69 26/26 100 - 23 BL10-5.70 26/26 100 - 24 BL10-5.74 25/26 96,7 phi70 25 BL10-5.79 26/26 100 - 26 BL10-5.81 25/26 100 phi70 27 BL10-5.82 25/26 96,7 phi70
Hình 3.15. Kết quả kiểm tra nền di truyền nhóm các cá thể BC5F1 của 26 chỉ thị trên 10 nhiễm sắc thể
(Thứ tự các mẫu từ trái qua phải: Nhóm 1-Nhóm 2- Nhóm 3- BL10- W2, sử dụng Ladder 20bp)
Hình 3.16. Kết quả kiểm tra nền di truyền của các cá thể BC5F1 thuộc nhóm 1 và nhóm 3 với các chỉ thị umc1160 và phi070
Lựa chọn cá thể ML10-5.61 ở thế hệ BC5F1 của tổ hợp lai ML10/W22 và cá thể BL10-5.4 ở thế hệ BC5F1 của tổ hợp lai BL10/W22 có nền di truyền 100% so với giống nền, tự thụ và thu hạt gieo vào vụ Thu 2019.
3.1.4. Kết quả chọn lọc các cá thể trong quần thể BC5F2 mang gen fea* bằng chỉ thị phân tử