Hình 3.15: Cấu trúc hóa học của hợp chất 3
Hợp chất 3 được phân lập dưới dạng bột màu vàng. Công thức phân tử của hợp chất 3 được thiết lập là C13H14O4 thông qua sự xuất hiện của tín hiệu ion giả phân tử [M+Na]+ tại m/z 257.0796 (tính toán lý thuyết cho công thức C13H14NaO4+, 257.0784), cho thấy sự có mặt của 7 liên kết đôi tương đương.
47
Hình 3.16: Phổ HR-ESI-TOF-MS của hợp chất 3
Phổ 1H NMR của hợp chất 3 ghi nhận tín hiệu của proton thơm đặc trưng ở vị trí meta với nhau tại H 6.63 (d, J = 2.4 Hz, H-6) và 6.66 (d, J = 2.4 Hz, H-8) gợi ý sự có mặt của một vòng benzene thế ở 4 vị trí 1,2,3,5 (Bảng 3.3). Ngoài ra, tín hiệu của một proton olefin tại H 6.06 (s, H-3), một nhóm methylene tại H 2.69 (dd, J = 7.6, 12.8 Hz, Ha-1) và 2.65 (dd, J = 7.6, 12.4 Hz, Hb-1), một nhóm oxymethine tại H 4.19 (m, H-2), và 2 nhóm methyl tại H 1.27 (d, J = 6.0 Hz, H3-3) và 2.71 (s, 2-CH3) cũng được ghi nhận trên phổ 1H NMR của hợp chất 3.
48
Trên phổ 13C NMR của hợp chất 3 ghi nhận tín hiệu của 13 cacbon,
trong đó có một cacbon cacbonyl tại C 182.0 (C-4), 6 cacbon của vòng thơm [trong đó có 4 cacbon không liên kết với proton tại C 167.1 (C-5), 143.7 (C- 7), 163.1 (C-9), và 115.9 (C-10)], một liên kết đôi thế ba vị trí tại C 161.5 (C- 2) và 118.0 (C-3), cùng với các tín hiệu đặc trưng của một nhánh 1-propyl-2- ol tại C 44.2 (C-1), 66.4 (C-2) và 23.1 (C-3) (Bảng 3.3).
Hình 3.18: Phổ 13C NMR (100 MHz, CD3OD) của hợp chất 3
Các dữ kiện phổ này cho gợi ý hợp chất 3 có dạng khung chromone,
dạng khung cũng được phát hiện phổ biến ở vi nấm biển. Theo đó, tiến hành so sánh số liệu phổ của hợp chất 3 với một hợp chất chromone đã biết cho kết quả hoàn toàn tương đồng [161] (Bảng 3.3). Điều này cũng phù hợp với các dữ kiện phổ khối lượng phân giải cao và số liên kết đôi tương đương. Trên cơ sở các phân tích phổ và so sánh với tài liệu tham khảo, cấu trúc hóa học của hợp chất 3 được xác định là 5-hydroxy-7-(2'-hydroxypropyl)-2-methyl-
49
Bảng 3.3: Số liệu phổ 1H và 13C NMR của hợp chất 3
Vị trí C# Ca,b Ha,c (dạng peak, J = Hz)
2 161.6 161.5 3 118.1 118.0 6.06 (s) 4 182.1 182.0 5 167.2 167.1 6 112.6 112.5 6.63 (d, 2.4) 7 143.8 143.7 8 101.8 101.7 6.66 (d, 2.4) 9 163.1 163.1 10 116.0 115.9 1 44.3 44.2 2.69 (dd, 7.6, 12.8) 2.65 (dd, 7.6, 12.4) 2 66.5 66.4 4.19 (m) 3 23.2 23.1 1.27 (d, 6.0) 2-CH3 23.6 23.5 2.71 (s)
# Ccủa 5-hydroxy-7-(2'-hydroxypropyl)-2-methyl-chromone đo trong CD3OD [161], a CD3OD, b 100 MHz, c 400 MHz
Như vậy, bằng các phân tích quang phổ cấu trúc hoá học của 3 hợp chất phân lập được từ P. oxalicum CLC-MF05 đã xác định như ở hình 3.19.
Hình 3.19: Cấu trúc hoá học của hợp chất 1-3 từ P. oxalicum CLC-MF05 3.4. Kết quả hoạt tính kháng viêm của hợp chất
3.4.1. Ảnh hưởng của hợp chất 1-3 đến khả năng sống sót của tế bào BV2
Hoạt tính kháng viêm của các hợp chất phân lập được từ vi nấm biển
Penicillium oxalicum CLC-MF05 được đánh giá thông qua khả năng ức chế sự sinh sản NO và PGE2 trong tế bào BV2 được kích thích bởi LPS được thực hiện như mục 2.3.4.2. và 2.3.4.3. Trước khi thử khả năng ức chế sản sinh NO và PGE2 trên tế bào BV2, các hợp chất 1-3 được đánh giá ảnh hưởng đến sự