3.1.1.1. Tuổi mắc bệnh của các bệnh nhân
Bảng 3.1. Tuổi mắc UTBT của các bệnh nhân xác định ĐB BRCA1/2
Có ĐB Không Tổng ĐB BRCA1 ĐB BRCA2 Tổng có ĐB p n=06 n=02 n=8 n=12 N=20 Trung bình tuổi 47,67 63,50 51,63 50,58 51,00 0,147 chẩn đoán ± 5,99 ±19,09 ±11,46 ±9,37 ±9,97 Nhận xét:
-Trung bình tuổi mắc bệnh của những bệnh nhân mang ĐB gen BRCA1
-Trung bình tuổi mắc bệnh của những bệnh nhân có mang ĐB gen
BRCA1/2 là 51,63 và không khác biệt với trung bình tuổi mắc bệnh của những bệnh nhân không mang ĐB là 50,58.
3.1.1.2. Đặc điểm hội chứng UT vú và UTBT di truyền (HBOC)
Bảng 3.2. Đặc điểm hội chứng UT vú và UTBT di truyền (HBOC)
Đặc điểm Hội chứng UT vú- Mang Không Tổng Tỉ lệ p
UTBT di truyền ĐB mang ĐB ĐB
Chỉ có người thân mắc UT vú 5 5 10 50%
A hoặc UTBT (a)
0,535
Chỉ mắc kèm UT vú (b) 2 6 8 25%
Cả hai yếu tố (c) 1 1 2 50%
Có người thân mắc UTBT (d) 3 3 6 50%
B Có người thân mắc UT vú (e) 3 3 6 50% 0,535
Không có người thân mắc UT 2 6 8 25%
vú và UTBT (b)
Có người thân mắc UT vú 6 6 12 50%
hoặc UTBT (d+e)
C 0,264
Không có người thân mắc UT 2 6 8 25%
vú và UTBT (b)
D Mắc kèm UT vú (b+c) 3 7 10 30% 0,361
Không mắc kèm UT vú (a) 5 5 10 50%
Tổng ((a)+(b)+(c)) 8 12 20 40%
Nhận xét:
-Trong phân bảng (A) có 10 (50%) bệnh nhân chỉ có người thân mắc UT vú hoặc/và UTBT, 8 (40%) chỉ mắc kèm UT vú, và 2 (10%) có cả 2 yếu tố. Tỉ lệ mang ĐB BRCA1/2 trong tổng số bệnh nhân là 40% (8/20), trong nhóm chỉ có người thân mắc UT vú và/hoặc UTBT (a) là 50%, nhóm chỉ mắc kèm UT vú (b) là 25%, nhóm mang cả hai yếu tố (c) là 50%.
-Ở phân bảng (B) và (C), trong 12 (60%) bệnh nhân có người thân mắc UT (d+e), có 6 bệnh nhân có người thân mắc UT vú (e) và 6 bệnh nhân người
có người thân mắc UTBT (d). Ở phân bảng (D) có 10 bệnh nhân có mắc kèm UT vú (b+c) và 10 bệnh nhân không mắc kèm UT vú (a)
-Không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê khi so sánh các đặc điểm này giữa các bệnh nhân mang và không mang ĐB BRCA1/2.
3.1.2. Kết quả xác định ĐB gen BRCA1 và BRCA2
Kết quả được giải tình tự được so sánh với trình tự chuẩn trên GeneBank bằng phần mềm CLC Main Workbench, phân tích các đặc điểm vị trí của ĐB trên gen BRCA1 và BRCA2, phân tích khả năng gây bệnh trên các cơ sở dữ liệu về đột biến gen BRCA1/2 cho kết quả thể hiện ở Bảng 3.3.
Bảng 3.3. Đột biến gen BRCA1 và BRCA2 ở các bệnh nhân UTBT.
Thay đổi BCCR, Vùng / Thay đổi Loại Ý Ghi
Mã Vị trí nucleotide OCCR gắn với acid amin ĐB nghĩa chú
(1) (2) (3) (4)
KBT8 BRCA1 c.1016delA - - p.Lys339fsTer2 F P 113
Exon 11 dị hợp
KBT2 BRCA1 c.1621C>T OCCR - p.Gln541Ter N P 114
Exon 11 dị hợp
BRCA1 c.2760-2763 p.Thr922fs
KBT6 delACAG OCCR - F P 115
Exon 11 Ter77
dị hợp
KBT4 BRCA1 c.4986+4A>T BCCR23 BRCT/ IVS16+4A>T Ss P 116
Intron 16 dị hợp BACH1
KBT7 BRCA1 c.4997dupA BCCR23 BRCT/ p.Tyr1666Ter N P 117
Exon 17 dị hợp BACH1
KBT3 BRCA1 c.5335delC BCCR23 BRCT/ p.Gln1779fs F P 118
Exon 22 dị hợp BACH1 Ter14
KBT15 BRCA2 c.4022delC OCCR1 - p.Ser1341Ter N P ĐB
Exon 11 dị hợp mới
KBT1 BRCA2 c.5453C>A OCCR1 - p.Ser1818Ter N P 119
Exon 11 dị hợp
Mã bệnh nhân (Phụ lục 5). (1)BCCR – Breast cancer cluster regions: Vùng cụm UT vú; OCCR- Ovarian cancer cluster regions: Vùng cụm UTBT. (2)Loại ĐB: F – ĐB dịch khung (Frameshift mutation); N -ĐB vô nghĩa (Nonsense mutation); Ss – ĐB vị trí cắt (Splice site mutation). (3) Ý nghĩa được kiểm định trên các cơ sở dữ liệu.60 P-gây bệnh (pathogenic). (4) Nguồn tài liệu trích dẫn.
Nhận xét:
-Có 6 ĐB gen BRCA1 và 2 ĐB gen BRCA2 được tìm thấy trong 20 bệnh nhân. 8 ĐB đều ở trạng thái dị hợp.
-Trong các ĐB gen BRCA1 có 3 ĐB nằm trên exon 11, 1 ĐB trên intron 16, 1 ĐB trên exon 17, và 1 ĐB trên exon 22, trong khi hai ĐB gen BRCA2
đều có vị trí trên exon 11.
- Có 4 ĐB nằm trên vùng cụm UTBT (OCCR), 03 ĐB nằm trên vùng cụm UT vú (BCCR), còn lại 1 ĐB không nằm trên các loại vùng này.
-Có 3 ĐB gen BRCA1 nằm trên cùng chức năng BRCT gắn với protein BACH1 là c.4986+4A>T, c.4997dupA và c.5335delC
-Trong đó có 3 ĐB dịch khung (BRCA1: c.1016delA, BRCA1: c.2760- 2763delACAG và BRCA1: c.5335delC); 4 ĐB vô nghĩa (BRCA1: c.1621C>T,
BRCA1: c.4997dupA, BRCA2: c.4022delC và BRCA2:c.5453C>A) và một ĐB vịtrí cắt (BRCA1: c.4986+4A>T)
- Dựa vào các cơ sở dữ liệu về khả năng gây bệnh của các ĐB, các ĐB đều làm tăng nguy cơ mắc UT vú và UTBT.
-Có 01 ĐB mới BRCA2:c.4022delC lần đầu được tìm thấy trong nghiên cứu này, chưa từng được công bố.
Từ các kết quả phân tích trên, lập nên sơ đồ vị trí tương đối các đột biến đã xác định trên gen BRCA1 và gen BRCA2 và tương quan với các vùng chức năng của gen (Sơ đồ 3.1 và Sơ đồ 3.2).
Sơ đồ 3.2 Vị trí tương đối các ĐB được xác định trên gen BRCA2
3.1.2.1. Đột biến NM_007294.4(BRCA1):c.1016delA
ĐB BRCA1:c.1016delA phát hiện ở bệnh nhân KBT8 có mẹ mắc UT vú.
Hình 3.1. Giải trình tự gen xác định ĐB BRCA1:c.1016delA
Nhận xét:
-Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
-Ở mẫu KBT8 bằng mồi ngược từ vị trí nucleotide 1016 bao gồm tín hiệu của 6 đỉnh A so với 7 đỉnh A ở mẫu đối chứng và tín hiệu các nucleotide sau vị trí này bị nhiễu (theo chiều giải mã ngược từ phải sang trái), cho thấy KBT8 có ĐB xóa một nucleotide A, dạng dị hợp tử. ĐB làm thay đổi khung đọc của gen BRCA1 và tạo thành mã kết thúc sớm cách vị trí ĐB 2 acid amin.
3.1.2.2. Đột biến BRCA1:c.1621C>T
ĐB BRCA1:c.1621C>T ở bệnh nhân KBT2 có mẹ và 1 chị gái mắc UT vú.
Hình 3.2. Giải trình tự gen xác định ĐB BRCA1:c.1621C>T
Nhận xét:
-Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotide rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
-Ở mẫu KBT2 tại vị trí nucleotide 1621 bao gồm tín hiệu của đỉnh C và đỉnh T cho thấy có ĐB điểm thay đổi nucleotide C thành T, dạng dị hợp tử và ĐB thay đổi bộ ba CAG (mã hóa cho Glutamine) thành TAG (mã kết thúc).
- ĐB này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.
3.1.2.3. Đột biến NM_007294.4(BRCA1):c.2760-2763delACAG
ĐB NM_007294.4(BRCA1):c.2760-2763delACAG phát hiện ở bệnh nhân KBT6 có 1 chị gái và 1 em gái cũng mắc UTBT.
Nhận xét:
- Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
- Ở KBT6 tại vị trí nucleotide 2764 exon 11 bao gồm tín hiệu của đỉnh A và đỉnh T và tín hiệu các nucleotide sau vị trí này bị nhiễu cho thấy ĐB xóa 4 nucleotide ACAG, dạng dị hợp tử, làm thay đổi khung đọc của gen BRCA1 và tạo thành mã kết thúc sớm cách vị trí ĐB 77 acid amin. ĐB này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.
3.1.2.4. Đột biến NM_007294.4(BRCA1):c4986+4A>T
ĐB NM_007294.4(BRCA1):c4986+4A>T ở bệnh nhân KBT4 mắc UT vú, có em gái UTBT.
Hình 3.4. Giải trình tự gen xác định ĐB BRCA1:c.4986+4A>T
Nhận xét:
- Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
-Ở mẫu KBT4 tại vị trí nucleotide 4986+4 trên intron 16 xuất hiện tín hiệu của một đỉnh A và một đỉnh T, cho thấy ĐB điểm thay thế A thành T, dạng dị hợp tử và làm thay đổi vị trí cắt (splice site) ở intron 16 trong quá trình hoàn thiện mRNA. ĐB này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.
3.1.2.5. Đột biến BRCA1:c.4997dupA
ĐB BRCA1:c.4997dupA ở bệnh nhân KBT7 có chị mắc UT vú.
Hình 3.5. Giải trình tự gen ĐB BRCA1:c.4997dupA
Nhận xét:
-Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
-Ở mẫu KBT7 bằng mồi ngược tại vị trí giữa nucleotid 4997 và 4998 trên exon 17 xuất hiện thêm tín hiệu của một đỉnh A và tín hiệu các nucleotid sau vị trí này bị nhiễu (theo chiều giải mã ngược từ phải sang trái). Cho thấy mẫu KBT7 có ĐB điểm chèn thêm một nucleotide A, dạng dị hợp tử và làm thay đổi bộ ba TAC (mã hóa Tyrosine) thành TAA (mã kết thúc). ĐB này không phát hiện được ở mẫu đối chứng
3.1.2.6. Đột biến NM_007294.4(BRCA1):c.5335delC
ĐB NM_007294.4(BRCA1):c.5335delC xác định ở bệnh nhân KBT3 có dì ruột mắc UTBT.
Nhận xét:
-Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA1, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu
-Ở mẫu KBT3 bằng mồi ngược tại vị trí nucleotide 5335 có tín hiệu của đỉnh C và đỉnh T, và tín hiệu các nucleotide sau vị trí này bị nhiễu (theo chiều giải mã ngược từ phải sang trái) cho thấy ĐB xóa một nucleotide C, dạng dị hợp tử làm thay đổi bộ ba CAA (mã hóa Glutamine) thành bộ ba AAC (mã hóa Asparagine) dẫn đến sai khung đọc của gen BRCA1 và tạo thành mã kết thúc sớm cách vị trí ĐB 14 acid amin. ĐB c.5335delC này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.
3.1.2.7. Đột biến NM_000059.4(BRCA2):c.4022delC
ĐB NM_000059.4(BRCA2):c.4022delC xác định ở bệnh nhân KBT15 mắc UTBT và UT vú.
Hình 3.7. Giải trình tự gen xác định ĐB BRCA2:c.4022delC
Nhận xét:
- Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA2, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu
- Ở mẫu KBT15 tại vị trí nucleotide 4022 bao gồm tín hiệu của đỉnh C và đỉnh A và tín hiệu các nucleotide sau vị trí này bị nhiễu, cho thấy ĐB xóa một nucleotide C, dạng dị hợp tử làm thay đổi bộ ba TCA (mã hóa Serine) thành TAA (mã kết thúc). ĐB c.4022delC này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.
3.1.2.8. Đột biến NM_000059.4(BRCA2):c.5453C>A
ĐB NM_000059.4(BRCA2):c.5453C>A xác định ở bệnh nhân KBT1 mắc UTBT kèm UT vú.
Hình 3.8. Giải trình tự gen xác định ĐB BRCA2:c.5453C>A
Nhận xét:
-Sản phẩm giải trình tự rõ nét, các đỉnh màu tương ứng các nucleotid rõ ràng, tương đồng với trình tự gen BRCA2, chứng tỏ sản phẩm PCR đặc hiệu.
- Ở mẫu KBT1 tại vị trí nucleotide5453 bao gồm tín hiệu của đỉnh C và đỉnh A cho thấy ĐB điểm thay đổi nucleotide C thành A, dạng dị hợp tử và làm thay đổi bộ ba TCA (mã hóa cho Serine) thành TAA (mã kết thúc). ĐB c.5453C>A này không phát hiện được ở mẫu đối chứng.