BＶng 4.21 Chえ tiêu vi sinh cてa sＶn phｂm
Lo衣i vi khu育n M泳c t嘘k"8c K院tqu違 A挨p"x鵜 tính
TSVSVHK 103 100 CFU/g
Coliforms 50 3 CFU/g
E. coli 3 < 3 MPN/g
Staphylococcus aureus 3 < 3 MPN/g
Clostridium perfringens 10 Khơng phát hi羽n CFU/g
Listeria monocytogons Khơng cĩ Khơng phát hi羽n CFU/g
Salmonella Khơng cĩ Khơng phát hi羽n CFU/25g
Nhｆn xét và bàn luｆn
S違n ph育o"8ƒr"泳pi"8逢嬰c tiêu chu育p"e挨"u荏 c栄c"pi pj."8ƒr"泳ng yêu c亥u c栄a tiêu chu育n Vi羽t Nam v隠 s違n ph育o"fkpj"f逢叡ng cao d衣ng b瓜t, khơng gia nhi羽v"vt逢噂c khi
75
EJ姶愛PI"7: K蔭T LU一N VÀ KI蔭N NGH卯
5.1 K蔭T LU一N
Qua quá trình làm nghiên c泳u, tơi cĩ m瓜t s嘘 k院t lu壱n sau:
‚ Quá trình l詠a ch丑n ngu欝n nguyên li羽u khá 鰻p"8鵜nh t瑛 Vissan v噂i thành ph亥p"fkpj"f逢叡ng 鰻p"8鵜nh, pj逢 育m (75,1'+."j o"n逢嬰ng protein (22,6%), lipid (1,710%), tro (0,5%). Vi羽c l詠a ch丑n n衣e" n逢pi" ejq" m院t qu違 hàm
n逢嬰ng béo trong nguyên li羽w"dcp"8亥u th医p, ch雨 kho違ng 6,867% (tính theo ch医t khơ tuy羽v"8嘘i) giúp cho quá trình nghiên c泳u tách béo d宇f pi"j挨p0
‚ Thơng s嘘 c栄a quá trình lo衣i béo phù h嬰p nh医t là:
Ü Dung mơi: n – hexan
Ü T益 l羽 th鵜t/dung mơi: 1/10
Ü Nhi羽v"8瓜 x穎 lý: 80oC
Ü Th運i gian: 45 phút
Ü Th運i gian s医{"8吋 lo衣i b臼 dung mơi t欝p"f逢<"52"rj¿v"*荏 90oC)
‚ Thơng s嘘 c栄a quá trình th栄y phân phù h嬰p nh医t là:
Ü Enzyme: alcalase
Ü T益"n羽"e挨"ej医v1p逢噂e<"318
Ü N欝pi"8瓜"]G1U̲<5.76'"*v逢挨pi"泳pi"jq衣v"8瓜"79.95UI/g)
Ü pH: 7,49.
Ü Nhi羽v"8瓜<"54,7oC.
Ü Th運k gian: 197 phút.
Mjk"8„, 8瓜 nh噂t d鵜ch th栄{"rj¤p"8衣t c詠c ti吋u là 2,240 ± 0,092 cP và m泳e"8瓜 quá trình th栄y phân DH 8衣t c詠e"8衣i là 31,390 ± 0,138 % thì kh嘘k"n逢嬰ng phân t穎 m衣ch peptide t壱p trung 荏 rj¤p"8q衣p":.7mFc"x "j o"n逢嬰ng acid amin mj»pi"vjc{"8鰻i so v噂i vt逢噂c th栄y phân.
S違n ph育m b瓜t 8衣m sau khi s医y cĩ giá tr鵜 fkpj"f逢叡ng cao *8衣m cao) và j o"n逢嬰ng béo th医p, 8ƒr"泳ng yêu c亥u vi sinh cp"vq p"ejq"pi逢運i s穎 d映ng.
76
5.2 KI蔭N NGH卯
Do th運i gian làm lu壱p"x<p"e„"gi噂i h衣n nên tơi ej逢c"pijk‒p"e泳u nh英ng v医p"8隠 sau
8¤{.8隠 ngh鵜 8逢嬰c nghiên c泳u ti院p 荏 các lu壱p"x<p"ucw<
‚ Nghiên c泳u k院t h嬰p c栄a các lo衣i enzyme protease (x穎 lý alcalase tr逢噂c
ucw"8„"m院t h嬰p flavourzyme) nh茨m v<pi"jk羽u qu違 th栄y phân, gi違m kích
vj逢噂c phân t穎 c栄a s違n ph育m b瓜v"8衣m th栄y phân.
‚ Vì là b逢噂e"8亥u xây d詠ng rj逢挨pi"rjƒr"nq衣k"dfiq"p‒p"v»k"8ã ch丑n nguyên li羽u là n衣e"n逢pi"e栄a th鵜t l嬰p"e„"j o"n逢嬰ng béo th医p nh医t. Tuy nhiên chi phí cho nguyên li羽u cao d磯p" 8院n giá thành s違n ph育m c pi" u胤 cao. Tơi ki院n ngh鵜 cĩ th吋 xây d詠pi"rj逢挨pi"rjƒr"vj栄y phân trên nguyên li羽u là ph映
ph育m c栄a quá trình gi院t m鰻 l嬰n, ch鰯ng h衣p"pj逢"rj亥n th鵜t v映n…
‚ Nghiên c泳u và t嘘k"逢w"swƒ"vtình s医y phun 8吋 gi違m th医t thốt vitamin mà v磯p"8違m b違o ch医v"n逢嬰ng s違n ph育m.
77
TÀI LI烏U THAM KH謂O
Tài li羽w"vtqpi"p逢噂c
1. Nguy宇n C違nh. Quy hoＴch thばc nghiうm. Nhà xu医t b違p"A衣i h丑c Qu嘘c gia Tp. H欝 Chí Minh, 2004, 117 trang.
2. Lê Th鵜 H嬰p, Nguy宇n Th鵜 Lâm. Tài liうu tｆp huＸp"fkpj"f⇔だng lâm sàng. Vi羽n
fkpj"f逢叡ng, 2008, 371 trang.
3. H瓜k" A欝pi" F逢嬰e" Ak吋n Vi羽t Nam. F⇔ぢe" Akあn Viうt Nam IV. B瓜 Y T院, 2009, 1467 trang.
4. Tr亥n Bích Lam, Tơn N英 Minh Nguy羽v."Akpj"Vt亥n Nh壱t Thu. Thí nghiうm hĩa
sinh thばc phｂm. Nhà xu医t b違p"A衣i h丑c Qu嘘c gia Tp. H欝 Chí Minh, 2004, 69
trang.
5. Nguy宇p"A泳e"N逢嬰ng, cùng các c瓜ng tác viên. Cơng nghう enzyme. Nhà xu医t b違n
A衣i h丑c Qu嘘c gia Tp. H欝 Chí Minh, 2004, 533 trang.
6. N‒" X<p" Xk羽t M磯n, cùng các c瓜ng tác viên. Cơng nghう chｘ biｘn thばc phｂm.
Nhà xu医t b違p"A衣i h丑c Qu嘘c gia Tp. H欝 Chí Minh, 2011, 1019 trang.
7. Nguy宇p"X<p"Ók0"Thばc hành Hĩa sinh hがc. Nhà xu医t b違n Khoa h丑c và K悦
thu壱t, Hà N瓜i, 2001, 139 trang.
8. Tr亥n Thanh Nhãn, Tr亥n Nguy宇n Tú Oanh. Tぐk"⇔w"j„c"sw{"vtình xぬ lý máu cá
ba sa bｊng enzyme. Nghiên C泳u Y H丑c Tp. H欝 Chí Minh, T壱p 13, Ph映 b違ng
s嘘 2, 2009, 5 trang.
9. N逢w"Pi¤p"V¤o."Piw{宇n Th鵜 Qu nh Hoa. Nhのng VＸp"Aｚ E￢"DＶn Trong Dinh
F⇔だng Lâm Sàng. Nhà xu医t b違n Y H丑c,2010, 500 trang.
Tài li羽w"p逢噂c ngồi
10. A. AFR, "Immediate jejunal feeding after gastroenterostomy," Ann Surg, vol.
67, pp. 565–566, 1918.
11. Amiza, M. A. & Masitah, M. “Optimization of enzymatic hydrolysis of blood
78
12. Amiza, M.A, Kong, Y.L. and Faazaz, A.L. “Effects of degree of hydrolysis on
physicochemical properties of Cobia (Rachycentron canadum) frame hydrolysate,” International Food Research Journal, vol. 19, pp. 59 – 66, 2012
13. Amiza, M.A., Nurul Ashikin, S. and Faazaz , A. L. “Optimization of
enzymatic protein hydrolysis from silver catfish (Pangasius sp.) frame,”
International Food Research Journal, vol. 18, pp. 775-781, 2011
14. Analía Verĩnica Fernández Gimenez et al.,“In vivo and In vitro Protein Digestibility of Formulated Feeds for Artemesia longinaris (Crustacea,
Penaeidae),” Brazilian Archives Of Biology And Technology, vol. 52, no. 6,
pp. 1379 – 1386, Nov. 2009
15. Diniz AM, Martin AM. “Optimization of nitrogen recovery in the enzymatic
hydrolysis of dogfish (Squalus acanthias) protein: Composition of the hydrolysates.” Int J Food Sci Nutr, vol. 48, pp. 191 – 200, 1997
16. Eriksson L., Johansson E., Kettaneh-Wold N., Wikstrom C., Wold S. Design
of Experiments - Principles and applications, Umetrics, 2000, pp. 317 – 321
17. Gerhard Feiner. Meat products handbook: Practical science and technology.
Cambridge, Woodhead Publishing Limited and CRC Press, 2006, pp. 11
18. H. ali, M. M. Haque. “In vitro protein digestibility of different feed ingredients
in Thai koi (Anabas testudineus),” Bangladesh Agricultural University, vol. 7,
pp. 205 – 210, 2009
19. Harriman A. Morrais, Marialice P.C Silvestre, Viviane D.M. Silva, et al.,
“Correlation between the Degree of Hydrolysis and the Peptide Progile of Whey Protein Concentrate Hydrolysates: Effect of the Enzyme Type and the
Reaction Time,” American Journal of Food Technology, ISSN 1557 – 4571,
2013
20. Imelda Wing Yan Cheung. “Bitterness in Enzymatically Produced
Hydrolysates of Commercial Shrimp (Pandolopsis dispar) Processing Waste,”
79
21. Jia Jianping, Yangang Zhou, Jianzhang Lu, Aiying Chen, Yuezhong Li and
Gaoli Zheng. “Enzymatic hydrolysis of Alaska pollack (Theragra
chalcogramma) skin and antioxidant activity of the resulting hydrolysate,” Sci Food Agric, vol. 90, pp. 635–640, 2010
22. John B. Lloyd and Robert W. Mason. Subcellular biochemistry: Biology of
Lysosome. New York: Plenum Press, 1975, pp. 179 – 182
23. Laemmli U.K. “Cleavage of structural proteins during the assembly of the
head of bacteriophage T4,” Nature, vol. 227, no. 5259, pp. 680-685, 1970
24. Mahtab N. Sharifia et al., “Nutrition support in intensive care units in England: a snapshot of present practice,” British Journal of Nutrition, vol. 106, no. 08,
pp. 1240-1244, October 2011.
25. Matthias Besler, Alessandro Fiocchi, Patrizia Restani. “Allergen Data
Collection: Pork (Sus scrofa),” Internet Symposium on Food Allergens, vol. 3,
no. 4, pp. 188 – 189, 2001
26. M. Bassompierre et al., “Invitro protein digestion,” Ribarstvo, vol. 55, no. 4,
pp. 137 – 145, 1997
27. Mokhalalati JK, Druyan ME, Shott SB, Comer GM, “Microbial, nutritional and physical quality of commercial and hospital prepared tube feedings in
Saudi Arabia.,” Saudi Med J, vol. 25, p. 331–341, 2004.
28. Murna Muzaifa, Novi Safriani, Fahrizal Zakaria. “Production of protein hydrolysates from fsh by-product prepared by enzymatic hydrolysis,”
International Journal of the Biofux Society, vol. 5, issue 1, pp. 36 – 39, 2012
29. Nilsang S, Lertsiri S, Suphantharika M, Assavanig A. “Optimization of
enzymatic hydrolysis of fish soluble concentrate by commercial proteases,” J
Food Eng, vol. 70, pp. 571 – 578, 2005
30. Paul Fulbrook et al, “A European survey of enteral nutrition practices and procedures in adult intensive care units,” Journal of Clinical Nursing, vol. 16,
80
31. P.M. Nielsen, D. Petersen, and C. Dambmann. “Improved Method for
Determining Food Protein Degree of Hydrolysis,” Journal Of Food Science,
vol. 66, no. 5, pp. 642 – 646, 2001
32. S. Campbell, “An Anthology of Advances in Enteral Tube Feeding
Formulations,” Nutr Clin Pract, vol. 21, pp. 411-415, 2006.
33. S. Calsamiglia và M D. Stern.“A three-step in vitro procedure for estimating
intestinal digestion of protein in ruminants,” Journal of animal science, vol.
73, pp. 1459 – 1465, 1995
34. See, S. F., Hoo, L. L. and Babji, A. S. “Optimization of enzymatic hydrolysis
of Salmon (Salmo salar) skin by Alcalase,” International Food Research
Journal, vol. 18, no. 4, pp. 1359 – 1365, 2011.
35. Souissi N., Ali Bougatef A., Yousra T.E., Nasri M.“Biochemical and
Functional Properties of Sardinella (Sardinella aurita) By-Product
Hydrolysates,” Food Technol Biotechnol, vol.45, no. 2, pp. 187-194, 2007
36. Sullivan MM, Sorreda-Esguerra P, Platon MB, et al, “Nutritional analysis of
blenderized enteral diets in the Philippines,” Asia Pac J Clin Nutr, vol. 13, p.
385–391, 2004.
37. William W. Christie. “In Advances in Lipid Methodology – Two: Preparation
of lipid extracts from tissues,” The Scottish Crop Research Institute, pp. 195-
213, 1993
38. http://www.gso.gov.vn
81
PH影 L影C
PH影 L影E"K<"EèE"RJ姶愛PI"RJèR"RJåP"VëEJ 303"Zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng protein t鰻ng
Nguyên tｈc
Mjk"8嘘t nĩng ph育m v壱v"8go"rj¤p"v ej"x噂i H2SO4 8壱o"8員c, các h嬰p ch医t d宇 b鵜
oxy hĩa. Carbon và hydro t衣o thành CO2 và H2O. Cịn nit挨"ucw"mjk"8逢嬰c gi違i phĩng
tc"f逢噂i d衣ng NH3 s胤 k院t h嬰p v噂i H2SO4 t衣o thành (NH4)2SO4 tan trong dung d鵜ch.
Aw鰻i NH3 kh臼i dung d鵜ch b茨ng PcQJ"8欝ng th運k"ej逢pi"e医t và thu h欝i NH3 b茨ng m瓜v"n逢嬰pi"f逢"J2SO4 2.3P="8鵜pj"n逢嬰ng H2SO4 0,1N cịn l衣i b茨ng dung d鵜ch NaOH 0,1N chu育p."swc"8„"v pj"8逢嬰e"n逢嬰pi"pkv挨"e„"vtqpi"o磯u nguyên li羽u thí nghi羽m.[7]
Tính tốn kｘt quＶ
-"J o"n逢嬰ng ph亥p"vt<o"pkv挨"v鰻ng cĩ trong m磯w"8逢嬰c tính theo cơng th泳c:
軽 = (欠 伐 決× 計) × 0,0014 × V × 100
懸× 兼
Vtqpi"8„<
‚ P<"n "j o"n逢嬰pi"pkv挨"v pj"d茨ng ph亥p"vt<o"mj嘘k"n逢嬰ng.
‚ a: s嘘 ml dung d鵜ch chu育n H2SO42.3P"8go"j医p th映 NH3.
‚ b: s嘘 ml NaOH 0,1N tiêu t嘘n cho chu育p"8瓜.
‚ m: kh嘘k"n逢嬰ng m磯w"8go"x»"e挨"jĩa.
‚ V: t鰻ng th吋v ej"8鵜nh m泳c dung d鵜ej"x»"e挨"j„c"*322ml).
‚ v: th吋 tích dung d鵜ej"x»"e挨"j„c"e亥n phân tích.
‚ 2.2236<"n逢嬰pi"ico"pkv挨"泳ng v噂i 1ml H2SO4 0,1N.
‚ K: h羽 s嘘8k隠u ch雨nh n欝pi"8瓜 NaOH 0,1N.
-"J o"n逢嬰ng protein thơ
Rtqvgkp"*'+"?"Pkv挨"*'+"z"8.47
304"Zƒe"8鵜nh hàm 育m c栄a th鵜t.
Nguyên tｈc
Dùng nhi羽v" 8瓜 8吋 vƒej" p逢噂c ra kh臼i m磯u nguyên li羽u. L詠a ch丑n ch院 8瓜 nhi羽t thích h嬰p, khơng làm bi院p"8鰻i thành ph亥n hĩa h丑c c栄a nguyên li羽u.[7]
82 Tính tốn kｘt quＶ 1 2 1 0 ( ) 100 (%) M M W M M / · ? / ‚ Mo(g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c. ‚ M1 (g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c và m磯w"vt逢噂c s医y. ‚ M2 (g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c và m磯u sau s医y.
305"Zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng lipid t鰻ng.
Nguyên tｈc
Dùng dung mơi k液 p逢噂c trích ly hồn tồn lipid t瑛 nguyên li羽w"8ã 8逢嬰c nghi隠n nh臼. M瓜t s嘘 thành ph亥n hịa tan trong ch医t béo c pi"8逢嬰c trích ly theo bao g欝m s逸c t嘘, các vitamin tan trong ch医t béo, các ch医v"ók."000"vw{"pjk‒p"j o"n逢嬰ng c栄a chúng th医p. Do cĩ l磯n t衣p ch医t, ph亥p"vt ej"n{"8逢嬰c g丑i là lipid t鰻ng hay d亥u thơ.[7]
J o" n逢嬰ng lipid t鰻ng cĩ th吋 tính b茨ng cách cân tr詠c ti院r" n逢嬰ng d亥u sau khi
ej逢pi"e医t lo衣i s衣ch dung mơi ho員c tính gián ti院p qua kh嘘k"n逢嬰ng bã cịn l衣i.
Tính tốn kｘt quＶ
J o"n逢嬰ng ph亥p"vt<o"ej医t béo tính theo cơng th泳c: 100 1 2/ · ? m M M X Vtqpi"8„< ‚ M1(g): kh嘘k"n逢嬰ng c嘘e"dcp"8亥u
‚ M2(g): kh嘘k"n逢嬰ng c嘘c sau khi thu h欝i dung mơi trích lipid và s医y khơ.
‚ m(g): kh嘘k"n逢嬰ng m磯w"dcp"8亥u.
1.4 Zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng tro
Nguyên tｈc
Khi x穎 lý nhi羽t m磯u lên 600oC các thành ph亥n h英w"e挨"x "p逢噂c s胤 8逢嬰e"j„c"j挨k"
và m磯u cịn l衣i nh英ng thành ph亥n tro khơng b鵜 phân h栄y b荏i nhi羽v"8瓜8„0[7]
Tính tốn kｘt quＶ 1 2 1 0 ( ) 100 (%) M M W M M / · ? /
83
‚ Mo(g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c.
‚ M1 (g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c và m磯w"vt逢噂c nung.
‚ M2 (g) : Tr丑pi"n逢嬰ng c嘘c và m磯u sau nung.
1.5 Zƒe"8鵜pj"j o"n逢嬰ng dung mơi t欝p"f逢"d茨ng k悦 thu壱t GC – MS
Rj逢挨pi"rjƒr"8逢嬰c xây d詠ng theo chuyên lu壱n 10.14 c栄c"F逢嬰e"Ak吋n Vi羽t Nam IV
BＶng: Akｚu kiうp"zƒe"8おnh dung mơi n – hexan trong mｄu
A亥w"fị FDI, 230oC T嘘e"8瓜"fịng khí hydro 40 ml/ phút T嘘e"8瓜"fịng khí th鰻k 400 ml/phút A亥w"j„c"j挨k"o磯w Nhi羽v"8瓜<"422o C Áp su医v<"9.81 bar Th吋"v ej"vkêm: 200 ml/ phút K悦"thu壱v<"khơng chia dịng
C瓜v
Lo衣k" e瓜v<"Zebron ZB 624 - 6% cyanopropyphenyls - 94% dimethyl
M ej"vj逢噂e<"52.2"o"z"542"wo"z"3.:"m Ch院"8瓜"ej衣{
A鰯pi"fịng
Nâng nhi羽v":oE1rj¿v"8院p"392oE."ucw"8„"p¤pi"57oE1rj¿v"8院p"
240oC
- Cách pha dung d鵜ej"ejw育p<"j¿v"::µl n - hexan vào bình 8鵜pj"o泳e"322"ml 8k隠p" 8亥{"d茨pi FOUQ0"Ucw"8„"j¿v"rjc"nqãng 5,0ml vào bình 8鵜pj"o泳e"322"ml và ti院r"v映e"8k隠p"8亥{"d茨pi"FOUQ0"U穎"f映pi"fwpi"f鵜ej"8ã pha lỗng 8吋"vkêm m磯w
- Cách pha dung d鵜ej"vj穎<"e¤p"2.4;i"o磯w"jịa trong 5,0 ml DMSO và 8go"vk‒o"
vào h羽"vj嘘pi"u逸e"m#
1.6 Zƒe" 8おnh phân tぬ n⇔ぢng bｊpi" rj⇔￢pi" rjƒr" 8kうp" fk" *rj⇔￢pi" rjƒr" UFU"– PAGE)
Ak羽p"fk"zƒe"8鵜nh tr丑pi"n逢嬰ng phân t穎 8逢嬰c th詠c hi羽p"vjgq"rj逢挨pi"rjƒr"e栄a Laemmli
84
Nguyên tｈc
SDS-PAGE là m瓜t k悦 thu壱v"8k羽n di trên gel polyacrymide v噂i SDS là tác nhân làm bi院n tính và v ej"8k羽n âm các phân t穎."rj逢挨pi"rjƒr"p {"zƒe"8鵜nh tr丑pi"n逢嬰ng phân t穎 protein, thành ph亥p" x " 8瓜 s衣ch ch院 ph育m protein trong quá trình tinh ch院.Trong k悦 thu壱v"p {"rtqvgkp"8逢嬰c x穎 lý v噂i ch医t t育y SDS và tác nhân kh穎 c亥u n嘘i disulfit là mercaptoethanol ho員c DDT làm c医u trúc b壱c 2,3,4 c栄a protein b鵜 bi院p"8鰻i thành b壱e"3"x "v ej"8k羽p"¤o0"Fq"8„"mjk"8k羽n di, các phân t穎 protein ch雨 ph映 thu瓜c
x q" m ej" vj逢噂c khi di chuy吋n trong gel: nh英ng phân t穎 e„" m ej" vj逢噂c l噂n s胤 di chuy吋n ch壱o"j挨p"pj英ng phân t穎e„"m ej"vj逢噂c nh臼.
Tiｘn hành
‚ Chu育n b鵜 gel phân tách (Resloving gel) (15%)
Pha h厩n h嬰p theo b違ng sau:
Hĩa ch医t Th吋 tích ( n+ A羽m Tris-HCl pH 8,8 745 P逢噂c c医t 2 l亥n 1375 Dung d鵜ch acrylamide 30% 2145 Dung d鵜ch SDS 10% 28,5 APS 25% 50 - Kh穎 khí trong 10 phút. - Ejq"8 n"VGOGF"xào.
- L逸c nh姻 thành dung d鵜ej"8欝ng nh医t.
- F́pi"oketqrkrrgvvg"d挨o"fwpi"f鵜ch vào khuơn sao cho khơng t衣o b丑v"mj "8院n khi cao kho違ng 5-:eo"n "8逢嬰c.
- Nh姻 nhàng cho m瓜t l噂r"p逢噂c c医t lên gel ch運 cho gel c泳ng (5-10phút).
‚ Chu育n b鵜 gel gom (Stacking gel) (5%)
Pha h厩n h嬰p theo b違ng sau:
Hĩa ch医t Th吋 tích ( n+
A羽m Tris-HCl pH 6,8 250
85
Dung d鵜ch acrylamide 30% 330
Dung d鵜ch SDS 10% 20
APS 25% 20
- Kh穎 khí trong 10 phút. - Ejq"8 n"VGOGF"xào.
- L逸c nh姻 cho tan h院t thành dung d鵜ej"8欝ng nh医t
- Ucw"mjk"ign"rj¤p"vƒej"8ã 8»pi"e泳ng hồn tồn, hút l噂r"p逢噂c bên trên ra.
- F́pi"oketqrkrgvvg"d挨o"fwpi"f鵜ch lên trên l噂p gel phân tách sao cho khơng t衣o b丑t khí.
- A逢c"n逢嬰e"x q"ign"8吋 t衣o gi院ng
- Mjk"ign"8»pi"e泳ng hồn tồn l医{"n逢嬰c ra.
‚ Ch衣{"8k羽n di
- Nh姻 nhàng l逸p khuơn gel vào b瓜8k羽n di - Ejq"8羽o"8k羽n di vào bu欝pi"8k羽n di
- Hút 40 n"xà 10 n"fwpi"f鵜ch n衣p m磯u. X穎n#"8wp"u»k0"
- N衣r"2.27" n"fwpi"f鵜ch m磯u vào các gi院ng - A壱y h瓜r"8k羽p"fk"x "8„pi"o衣ch 荏8k羽n th院 100V
- Ch衣y kho違ng 2 gi運荏 nhi羽v"8瓜 phịng v噂i dịng 8k羽p"mj»pi"8鰻i 30mA.
‚ Nhu瓜o"o w"ucw"8k羽n di SDS-PAGE
- Sau khi ch衣{"8k羽n di xong, l医y gel ra kh臼i t医m
- Ngâm trong dung d鵜ch nhu瓜o"o w"rtqvgkp."nc{"8瓜ng nh姻 trong th運i gian 1-4 gi運.
- Chuy吋n gel sang ngâm trong dung d鵜ch r穎a m磯u, thay dung d鵜ch vài l亥n cho
8院n khi gel cĩ màu trong su嘘t, lúc này s胤 xu医t hi羽n nh英pi"d<pi"e„"o w"zcpj" n挨"n "pj英pi"d<pi"rtqvgkp0
Protein chu育p"8逢嬰e"8k羽p"fk"8吋 so sánh cĩ tr丑pi"n逢嬰ng phân t穎 t瑛 3,5 – 38 kDa.
Ak羽p"fk"8逢嬰c th詠c hi羽p"vt‒p"oƒ{"8k羽n di Biorad Laboratoy, Model 041 BR71844
86
‚ Chu育n b鵜 dung d鵜ch t衣o d磯n ch医t:
- Dung d鵜ch 1: Methanol-Triethylamin-P逢噂c (2-1-2)
- Dung d鵜ch 2: Methanol-Triethylamin-P逢噂c-Phenylisothiocyanat (7-1-1- 1)
- Dung d鵜ch 3: A羽m pH 7,2
‚ Chu育n b鵜 dung d鵜ch ph違n 泳ng:
Dung d鵜ch nơi chu育n: Cân chính xác kho違ng 30mg acid c-amino butyric vào bình8鵜nh m泳c 50ml, thêm vào kho違ng 52on"p逢噂c, l逸c hịa vcp."ucw"8ĩ thêo"p逢噂c v瑛c8栄8院n v衣ch.
Dung d鵜ch th穎:
M磯u th鵜v"v逢噂c th栄y phân: cân chính xác 0,5g m磯u vào bình 8鵜nh m泳c 50ml, thêm vào kho違ng 52on"p逢噂c, l逸c hịa vcp."ucw"8ĩ thêo"p逢噂c v瑛a 8栄 8院n v衣ch. L逸c
8隠u0"Ucw"8„"n丑c qua gi医y l丑c l医y ph亥n d鵜ch trong.
S違n ph育m s医y phun: cân chính xác 0,5g m磯u vào bình 8鵜nh m泳c 50ml, thêm vào kho違ng 52on"p逢噂c, l逸c hịa vcp."ucw"8ĩ thêo"p逢噂c v瑛a 8栄 8院n v衣ch. L逸c 8隠u.