aggregates (CLEA)
1.2.1 Rj逢挨pi"rjƒr"etquu-linking enzyme aggregates ( CLEA)
A鵜pj"pij c"rj逢挨pi"rjƒr"ENGC [43]
S違n ph育m c栄c"rj逢挨pi"rjƒr"ENGC"n "eƒe"gp¦{og"8逢嬰c g逸n k院t l衣i v噂i nhau b荏i nh英ng liên k院t chéo v噂i tác nhân g逸n nh鵜 ch泳e"fkcnfgj{fg."ucw"mjk"8«"8逢嬰c t壱p h嬰p l衣i g亥n nhau, và có th吋 tái s穎 d映pi" 8逢嬰c. Nhpi" p<o" ip" 8Ơ{." ee"
nghiên c泳w"8«"ejq"vj医y kh違 p<pi"z¿e"vƒe"t医t m衣nh c栄a các enzyme liên k院t chéo này.
Hình 1.2: Minh hがa các tiｘn trình xＶy ra trong cぐ8おnh enzyme bｊng m "thuｆt CLEA
L鵜ch s穎 phát tri吋n c栄c"m "vjw壱t c嘘8鵜nh CLEA [42]
Eƒe"rj逢挨pi"rjƒr"e嘘 8鵜nh enzyme có th吋 8逢嬰c chia thành ba lo衣i: liên k院t v噂i
ch医t mang, vi gói trong gel x»"e挨"jq員c h英w"e挨"x "liên k院t chéo gi英a các phân t穎 enzyme. Liên k院t v噂i ch医t mang ch逸c ch逸n s胤 làm gi違m ho衣t 8瓜ng xúc tác c栄a enzyme do m瓜v" n逢嬰ng l噂n enzyme n茨m phía trong khơng tham gia xúc tácvì b鵜 ch医t mang che khu医t không ti院r"z¿e"8逢嬰c v噂k"e挨"ej医t. D衣ng c嘘 8鵜nh này làm gi違o"p<pi"uw医t s違n ph育o."v<pi"vj運i gian và không gian x穎n#"e挨"ej医t v噂i enzyme vì kh違 p<pi"xúc tác c栄a enzyme th医r" j挨p0" Pi逢嬰c l衣i, c嘘 8鵜nh enzyme qua liên k院t chéo gi英a các phân t穎 enzyme b荏i tay g逸n nh鵜 ch泳c là m瓜t
rj逢挨pi"rjƒr"e嘘 8鵜nh không c亥n ch医t mang và k院t qu違 z¿e"vƒe"8違m b違o g亥n
pj逢"n "322'"gp¦{og"e嘘8鵜pj"8隠u ho衣v"8瓜ng.
M "thu壱t liên k院t chéo enzyme, thông qua ph違n 泳ng c栄a tay g逸n, ví d映 pj逢"
glutaraldehyde v噂i nhóm -NH2 trên b隠 m員t enzyme, 8«"8逢嬰c phát tri吋n cách
8Ô{"62"p<o0"Vw{"pjkp."ee"gpƯ{oe liờn k院t chéo l衣i cho th医y kh違p<pi"fw{"vt·"
8
ch医t keo c栄a enzyme c嘘8鵜nh này nên r医v"mj„"8吋 vjcq"vƒe0"Fq"8„."rj逢挨pi"rjƒr"
c嘘 8鵜nh enzyme liên k院t v噂i ch医t mang ph鰻 bi院p" j挨p" rj逢挨pi" rjƒr"liên k院t chéo0"Ucw"8„."eƒe"pj "mjqc"j丑e"8«"pijk‒p"e泳u s穎 d映pi"rj逢挨pi"rjƒr"ENGE"
(liên k院t chéo gi英a các tinh th吋 enzyme) nh逢 là m瓜t ch医t xúc tác công nghi羽p,
8逢嬰c phát tri吋p"x q"8亥u nh英pi"p<o"3;;2"x "ucw"8„"8逢嬰c th逢挨ng m衣i hóa b荏i Altus Biologics. Ph逢挨ng pháp này áp d映pi" 8嘘i v噂i ph鰻 enzyme r瓜ng và enzyme d衣ng CLEC th吋 hi羽n kh違p<pi"鰻p"8鵜nh t嘘t v噂i nhi羽v"8瓜, dung môi h英u c挨 và các quá trình phân gi違i enzyme h挨n là enzyme hịa tan ho員c enzyme b瓜t
8»pi"mj»"v逢挨pi"泳ng. Chính vì kh違p<pi"鰻p"8鵜nh ho衣v"8瓜ng t嘘t, kích th逢噂c h衣t d宇 ki吋m soát và d宇 tái s穎 d映ng, k院t h嬰p v噂i ho衣v"v pj"z¿e"vƒe"ecq"x "p<pi"uw医t s違n ph育m l噂n, làm cho enzyme d衣ng CLEC tr荏 vj pj"rj逢挨pi"vk羽n chuy吋n hóa sinh h丑e"n#"v逢荏ng cho công nghi羽p.
Pj逢pi" 8k隠u ki羽n c栄c" rj逢挨pi" rjƒr" ENGE" e亥n ph違i là enzyme tinh th吋, m瓜t ti院n trình r医t m医t th運k"ikcp"x "8”k"j臼i enzyme ph違k"e„"8瓜 tinh khi院t cao. Các nhà khoa h丑c ti院p t映c nghiên c泳u và th医y r茨ng, n院w"pj逢"d鰻 sung thêm mu嘘i, dung môi h英u c挨 ho員c polymer không ion vào d鵜ch enzyme hòa tan d磯p"8院n hi羽p"vj逢嬰ng t栄a v壱t lý, các phân t穎 enzyme t壱p h嬰p l衣i v噂i nhau b茨ng liên k院t khơng c瓜ng hóa tr鵜 mà không làm 違nh j逢荏pi"8院n c医u trúc b壱c 3 c栄a enzyme.
Ak隠w"p {"8逢嬰c lý gi違i r茨ng liên k院t chéo c栄a các ch医t k院t t栄a v壱t lý s胤 làm cho enzyme x pj"xk宇n khơng hịa tan trong khi v磯p"fw{"vt·"8逢嬰c siêu c医w"vt¿e"pj逢" dcp"8亥u, k吋 c違 ho衣v"8瓜ng xúc tác. Nghiên c泳w"p {"8«"v衣o ti隠p"8隠8吋 phát tri吋n m瓜v"rj逢挨pi"rjƒr"e嘘 8鵜nh enzyme m噂k."8„"n "ENGC0"Ej pj"x·"rj逢挨pi"rjƒr"
t栄a th逢運ng 8逢嬰c s穎 d映pi"8吋 làm s衣ch enzyme."p‒p"ENGC"8«"m院t h嬰r"8逢嬰c q trình làm s衣ch và quá trình c嘘8鵜nh vào m瓜v"d逢噂c duy nh医t.
Nghiên c泳u c嘘 8鵜nh penicillin G amidase (EC 3.5.1.11 ) b茨pi"m "vjw壱t CLEA
8逢嬰c ti院n hành, 8Ô{" n "m瓜t enzyme công nghi羽p quan tr丑pi" 8逢嬰c s穎 d映ng trong quá trình s違n xu医t penicillin bán t鰻ng h嬰p và kháng sinh cephalosporin. Các enzyme t詠 do b鵜 gi噂i h衣n trong kh違 p<pi"鰻p"8鵜nh ho衣t tính khi nhi羽v"8瓜 vjc{"8鰻i và kh違 p<pi"ej鵜w"8逢嬰c dung mơi h英w"e挨"vj医p, vì th院 enzyme nàylà m瓜t 泳ng c穎 viên lý t逢荏ng cho nghiên c泳u c嘘 8鵜nh b茨ng m "thu壱t CLEA.Th壱t v壱y, penicillin G midase d衣ng CLEA (t栄a v噂i ammonium sulfate ho員c t-
dwvcpqn+" 8逢嬰c ch泳ng minh là ch医t xúc tác hi羽u qu違 cho quá trình t鰻ng h嬰p
corkeknnkp0"Aƒpi"ej¿"#"n "p<pi"uw医t c栄a enzyme CLEA th壱m chí cịn cao h挨n so v噂i các enzyme t詠 do, và cao h挨p"8ƒpi"m吋 so v噂i c栄a CLEC. T逢挨ng t詠, các
9
enzyme CLEA penicillin G amidase e pi"fw{"vt·"jq衣t tính cao trong dung mơi h英u c挨 j挨p"n "gp¦{og"ENGE"v逢挨pi"泳ng.
Inwvctcnfgj{fg"8逢嬰c s穎 d映ng là tay g逸p"vtqpi"rj逢挨pi"rjƒr"e嘘 8鵜nh enzyme b茨ng liên k院t chéo vì h嬰p ch医t này r飲 ti隠n và có s印n trong th逢挨ng m衣i v噂i s嘘
l逢嬰ng l噂n. Tuy nhiên, v噂i m瓜t s嘘 enzyme, ví d映 nitrilaug."8»k"mjk"pj壱p"8逢嬰c k院t qu違 là ho衣t tính r医t th医p ho員c khơng cịn ho衣v" 8瓜ng khi dùng glutaraldehyde làm tay g逸n. Các nhà khoa h丑c cho r茨pi"8k隠u này có th吋 là do ph違n 泳ng c栄a tay g逸n v噂i amino acid là r医t quan tr丑ng cho ho衣v" 8瓜ng c栄a enzyme. Chính vì m瓜t l#"fq"8員c bi羽t và có 違pj"j逢荏ng r医t nghiêm tr丑ng c栄a glutaraldehyde là có kh違 p<pi ph違n 泳ng r医t m衣nh và kích th逢噂c l衣i nh臼, glutaraldehyde có th吋 chen vào trong c医u trúc n瓜i t衣i c栄a enzyme làm 違nh
j逢荏ng t噂i trung tâm ho衣v"8瓜pi0"A吋 kh逸c ph映c v医p"8隠 này, polyaldehyde c欝ng k隠pj"8«"8逢嬰c s穎 d映pi"8吋 thay th院 glutaraldehyde, h嬰p ch医t này 8逢嬰c thu nh壱n t瑛 quá trình oxy hóa periodate dextran, ti院p theo cho tác d映ng v噂i natri borohydride 8吋 t衣o thành m嘘i liên k院t amin không th吋 8違o ng逢嬰c. Vi羽c thay th院 này giúp kh嘘i CLGC"8go"n衣i k院t qu違 ecq"j挨p"pjk隠u so v噂i khi th穎 nghi羽m tay g逸n glutaraldehyde. K院t qu違 vjw" 8逢嬰e" e pi" 医n t逢嬰ng khi 泳ng d映ng v噂i nitrilase khác. Liên k院t chéo v噂i glutaraldehyde t衣o thành kh嘘i CLEA hồn tồn khơng ho衣v"8瓜ng trong khi v噂i dextran polyaldehyde vj·"fw{"vt·"8逢嬰c ho衣t tính kho違ng 50-82'"*ej逢c"v嘘i 逢u).
1.2.2 Liên k院t gi英a glutaraldehyde v噂i enzyme
1.2.2.1. Gi噂i thi羽u v隠 glutaraldehyde [29, 30]
A員e"8k吋m
Ỵ Công th泳c phân t穎: C5H8O2.
Ỵ Kh嘘k"n逢嬰ng phân t穎: 100,12 g/mol.
Ỵ Thành ph亥n nguyên t嘘:C:59,98%; H: 8,05%; O: 31,97%.
Ỵ Danh pháp IUPAC: Pentane-1,5-dial.
Ỵ Tên khác: Pentanedial, glutardialdehyde, glutaric acid dialdehyde, glutaric aldehyde, glutaric dialdehyde, 1,5-pentanedial.
Tính ch医t
Tính ch医t v壱t lý
Ỵ Là ch医t l臼ng màu vàng.
Ỵ E„"ók"8員e"vt逢pi0 Ỵ Tan nhi隠w"vtqpi"p逢噂c.
10
Ỵ Ak吋m nóng ch違y: -14°C, 259K, 7°F
Ỵ Ak吋m sơi: 187°C, 460K, 369°F
Tính ch医t hóa h丑c
Tính ch医t hóa h丑c c栄a glutaraldehyde do nhóm ch泳c aldehyde quy院v" 8鵜nh. Tính ch医t c栄a nhóm aldehyde bao g欝m nh英ng ph違n 泳pi"8員e"vt逢pi"ucw< X Ph違n 泳ng c瓜ng v噂i hydro
Aldehyde tác d映ng v噂i hydro."f逢噂k"8k隠u ki羽n xúc tác và nhi羽v"8瓜 thích h嬰p t衣o thành alcol b壱c nh医t.
R-CHO+H2s"T-CH2OH
X Ph違n 泳ng v噂i các amin b壱c 1
Aldehyde tác d映ng v噂i amin b壱c 1 cho ra s違n ph育o"n "kokpg"x "p逢噂c. R-EJQ"-"TÓ-NH2$ R-CH=N-TÓ"-"J2O
X Ph違n 泳ng oxy hóa:
- Tác d映ng v噂i AgNO3/NH3 t衣o thành mu嘘i d衣ng Amoni (ph違n 泳ng tráng
i逢挨pi+0
R-CHO + 2[Ag(NH3)2]OH $ R-COONH4 + 2Ag +3NH3 + H2O - Tác d映ng v噂i O2 t衣q"vj pj"cekf"v逢挨pi"泳ng.
R-CHO + ½ O2$ R-COOH
- Tác d映ng v噂i Cu(OH)2/NaOH t衣o thành mu嘘i d衣ng Natri.
RCHO + 2Cu(OH)2 + NaOH $ RCOONa + Cu2O + 3H2O
- Tác d映ng v噂i KMnO4.
RCHO + KMnO4$ RCOOK + MnO2 + H2O
1.2.2.2. Liên k院t gi英a glutaraldehyde và enzyme
Glutaraldehyde là nh英ng phân t穎 khá nh臼, v噂i hai nhóm aldehyde và ba g嘘c methyl: HCO-(CH2)3-CHO. Kh違 p<pi"ejq"liên k院t chéo rõ ràng và nhi隠u h挨n so v噂i formaldehyde b荏i vì glutaraldehyde e„"8院n hai nhóm ỴCHO ho衣v"8瓜ng,
8瓜 linh ho衣t c栄a h嬰p ch医t này s胤 cao h挨n [32]. Trong n逢噂c, glutaraldehyde là nh英ng polymer r医t linh ho衣t [41]. Glutaraldehyde có nhóm ỴCHO t詠 do, g逸n ch員t v噂i m厩k"8挨n v鵜 trong phân t穎 polymer, các g嘘c ỴCHO s胤 liên k院t v噂i b医t kì phân t穎 protein nào mà chúng ti院p xúc, t衣o ra m瓜t kh違 p<pi"t医t l噂n cho s詠
11
Hình 1.3: CＸu tＴo phân tぬ cてa (poly)glutaraldehyde
(A) 3 dＴng cＸu tＴo cてa phân tぬ mono glutaraldehyde, (B) PhＶn とng polymer hóa glutaraldehyde
G嘘c amin c栄a các phân t穎 protein s胤 liên k院t v噂i g嘘c aldehyde trong phân t穎
glutaraldehyde và tách ra m瓜t phân t穎 n逢噂e0"A嘘i v噂i enzyme, ph亥n còn l衣i c栄a enzyme v磯n gi英8逢嬰c ho衣v"v pj."8欝ng th運k"gp¦{og"e”p"8逢嬰c c嘘8鵜nh trên phân t穎 glutaraldehyde. Nh逢 v壱y n院u có (n+1) phân t穎 enzyme tham gia ph違n 泳ng thì s胤 có (n+1) phân t穎 n逢噂c 8逢嬰c tách ra, và có (n+1) liên k院t chéo 8逢嬰c hình thành gi英a enzyme và glutaraldehyde.
12
Kh違 p<pi"z違y ra c栄c"m "vjw壱t CLEA bao g欝m s詠 k院t t栄a và các b逢噂c liên k院t chéo trong su嘘t quá trình ph違n 泳ng, t衣o thành nh英ng h衣t l噂n d亥n.
Hình 1.5: Quá trình hình thành khぐi enzyme CLEA
1.2.3 Ph衣m vi 泳ng d映ng c栄c"m "vjw壱t c嘘8鵜nh CLEA
Các nhà khoa h丑e"8«"ej泳ng minh có nhi隠u nhân t嘘 違nh h逢荏pi"8院n b違n ch医t c栄a CLEA nh逢: nhi羽v"8瓜, pH, kh違 p<pi"m院t h嬰p c栄a các phân t穎 enzyme, t嘘c
8瓜 ph違n 泳ng, tác nhân gây k院t t栄a và s詠 hình thành liên k院t chéo. D磯p"8院n vi羽c là ph違i t嘘i 逢u hóa các nhân t嘘 違nh h逢荏ng trên. V噂i s詠 t嘘i 逢u hóa thích h嬰p, ph逢挨ng pháp CLEA áp d映ng 8逢嬰c cho h亥u h院t enzyme (hydrolase, oxidoreductases, lyase.È+0"R医t nhiw"gpƯ{og"8ô"8c áp d映pi"vj pj"e»pi"m "
thu壱t CLEA.
B違ng 1.3<"Eƒe"gp¦{og"8逢嬰c c嘘8鵜nh thành cơng b茨pi"m "vjw壱t CLEA.
Penicillin acylases Glucose oxidase R-Oxynitrilase
Aminoacylase Galactose oxidase Pyruvate decarboxylase Pig Liver Esterase Laccase
Lipases Catalase D-Deoxyribose aldolase
Nitrilases Alcohol dehydrogenase Galactosidase Formate dehydrogenase Protease (trypsin) Phytase
13
1.2.4 M瓜t s嘘 cơng trình nghiên c泳u v隠m "vjw壱t CLEA
Nghiên c泳u c栄a R.A. Sheldon và c瓜ng s詠<"ÐEtquu-linked enzyme
aggregates (CLEA): M瓜v" rj逢挨pi" rjƒr" e嘘 8鵜nh enzyme tân th運i và linh
ho衣vÑ."p<o"4227"]65̲0
C嘘 8鵜nh enzyme b茨pi" m " vjw壱t CLEA và các 泳ng d映ng c栄a enzyme d衣ng CLEA trong chuy吋n hóa sinh h丑c cơng nghi羽p r医v"8逢嬰c quan tâm. Ch院 ph育m CLEA ch鵜u 違pj"j逢荏ng c栄a quá trình t栄a enzyme t瑛 dung d鵜ej"8羽m cùng v噂i tác nhân cross-linking nh鵜 ch泳c, th逢運ng là m瓜t dialdehyde nh逢 glutaraldehyde hay dextran polyaldehyde.
M "thu壱t này là khá 8挨n gi違n và 8逢嬰c áp d映ng r瓜ng rãi. CLEA 8go" n衣i r医t nhi隠u l嬰k" ej"mjk"8逢嬰c 泳ng d映ng trong công nghi羽p xúc tác sinh h丑c. Th運i gian s穎 d映ng c栄a enzyme c嘘 8鵜nh b茨pi"m "vjw壱v"ENGC"8逢嬰e"v<pi"n‒p"8ƒpi"m吋 và ho衣v"v pj"e pi"8逢嬰c 鰻p"8鵜nh, d宇 dàng ph映c h欝i và tái s穎 d映ng, hoàn tồn 鰻n
8鵜nh khi t育y r穎a trong mơi tr逢運ng n逢噂c. M "vjw壱t CLEA s穎 d映pi"8逢嬰c cho r医t nhi隠u lo衣i enzyme, ví d映 pj逢 các lo衣i enzyme hydrolase, oxidoreductase và lyase trong công nghi羽p xúc tác sinh h丑c0"A欝ng t壱p h嬰p và liên k院t chéo hai hay nhi隠u lo衣i enzyme cịn g丑i là combi-CLEA r医t có #"pij c"8嘘i v噂i vi羽c xúc tác trong cùng m瓜t n欝i ph違n 泳ng, ti院n trình ph違n 泳ng dây chuy隠n enzyme n嘘i ti院p, ví d映 pj逢 泳ng d映ng thành công ba t亥ng combi-CLEA bao g欝m hydroxynitrile lyase, nitrilase và amidase trong quá trình chuy吋p" 8鰻i benzaldehyde thành acid S-mandelic 8衣t 96% chuy吋p" 8鰻k" vtqpi" ;;'" 8欝ng
rjƠp"8i quang.
Hình 1.6: PhＶn とng chuyあp"8ごi benzaldehyde thành acid S-mandelic
C嘘 8鵜nh gp¦{og" vj逢挨pi" o衣i, Pectinex Ultra SP-L, b茨pi" m " vjw壱t
CLEA, nghiên c泳u c栄a Sohel Dalal và c瓜ng s詠."p<o"4229"]6:̲0
Trong nhpi" p<o" ip" 8Ô{." m " vjw壱t ENGC" 8ơ" ejq" vj{" 8Ơ{" n " o瓜v" rj逢挨pi"
14
8逢嬰c ti院n hành v噂k" gp¦{og" vj逢挨pi" o衣i, Pectinex Ultra SP-L, có ch泳a pectinase, xylanase và cellulase. CLEA có th吋 s穎 d映ng v噂i b医t kì enzyme ho衣t
8瓜pi"p q0"ENGC"8逢嬰c mơ t違 b茨ng m瓜t h羽 th嘘ng các tham s嘘 8瓜ng l詠c h丑c, nghiên c泳u v隠 kh違 p<pi"ej鵜u nhi羽t và m泳e"8瓜 liên k院t thành m衣pi"n逢噂i c栄a ba lo衣i enzyme trên. Th詠c hi羽n t栄a ba enzyme ho衣v" 8瓜ng v噂i n-propanol, th詠c hi羽n liên k院t chéo v噂k" inwvctcnfgj{fg" *7oO+" 8吋 ho衣v" j„c" eƒe" gp¦{og." 8欝ng th運i gi英 l衣i các enzyme sau khi th詠c hi羽n các liên k院t chéo. Giá tr鵜 Xocz1Mocz" v<pi" v瑛 11, 97" x " 38" 8院n 14, 80 và 19 cho enzyme pectinase, xylanase, và cellulase v逢挨pi" 泳ng. 雲 nhi羽v" 8瓜 kh違o sát là 50°C, 60°C, 70°C, th運i gian bán h栄y t瑛 17, 22 và 32 phút v<pi" n‒n 180, 82 và 91 phút cho pectinase, xylanase, và cellulase v逢挨pi"泳ng. C違 ba lo衣i enzyme trong CLEA
8隠u có th吋 tái s穎 d映pi"8院n l亥n th泳 ba mà khơng gi違m ho衣t tính. M厩k"8挨p"x鵜 có th吋 xúc tác nhi隠u bi院p"8鰻i sinh h丑c, cho c違 ba ph違n 泳pi"8瓜c l壱p và khác nhau: ph違n 泳ng th栄y phân pectin, ph違n 泳ng th栄y phân xylan, ph違n 泳ng th栄y phân cellulose. Các ph違n 泳pi"8逢嬰c th詠c hi羽n t衣i nhi羽v"8瓜 ecq"j挨p"uq"x噂i enzyme t詠
do.
Nghiên c泳u c嘘 8鵜nh enzyme glucoamylase b茨ng m "thu壱t CLEA c栄a
Zhang Qian x "e瓜pi"u詠"p<o"422: [52].
A吋 kh逸c ph映c nh英pi"pj逢嬰e"8k吋m c栄a glucoamylase t詠 fq."rj逢挨pi"rjƒr"i逸n k院t các phân t穎 glucoamylase l衣i v噂i nhau thông qua liên k院t chéo (CLEA), m瓜t m "thu壱t c嘘 8鵜nh m噂k."8«"8逢嬰c nghiên c泳w"8吋 áp d映ng vào trong s違n xu医t,
rj逢挨pi"rjƒr"p {"8逢嬰c th詠c hi羽n b茨ng cách s穎 d映pi"inwvctcnfgj{fg"pj逢"n "e亥u n嘘i liên k院t sau khi glucoamylase t詠 fq" 8逢嬰c k院t t栄a b荏i tác nhân t栄a thích h嬰r0" Eƒe" 8k隠u ki羽n t嘘k" 逢w" 8吋 c嘘 8鵜nh glucoamylase theo m "thu壱t CLEA thu
8逢嬰e"pj逢"ucw<"eƒe"mj嘘i glucoamylase sau khi c嘘 8鵜nh có th吋 8逢嬰c t衣o thành
mjk"8逢嬰c b鰻 sung tert-butyl alcohol vào dung d鵜ch enzyme glucoamylase (5g/l
và pH 5,6) 荏 20oE0"Eƒe"8k隠u ki羽n c嘘8鵜nh t嘘k"逢w"8逢嬰e"vt·pj"d {"pj逢"ucw<"p欝ng
8瓜 glutaraldehyde s穎 d映ng là 10%, c嘘 8鵜nh trong th運i gian là 120 phút, các
kh嘘k"ENGC"vjw"8逢嬰c sau thao tác ly tâm và r穎a. Ho衣t tính c栄a enzyme c嘘8鵜nh
là 40,4% ho衣t tính c栄a glucoamylase t詠fq"dcp"8亥u.
Nghiên c泳u c嘘 8鵜nh subtilisin b茨pi"m "vjw壱t CLEA c栄a K. Sangeetha
x "e瓜pi"u詠"p<o"422: [36].
Subtilisin là m瓜t endopeptidase, xúc tác th栄y phân liên k院t peptide qua hình thành m瓜t ch医t trung gian acyl-enzyme, enzyme này ho衣v"8瓜ng t衣k"o»k"vt逢運ng trung tính, pH ki隠m nh姻0"Uwdvknkukp"8逢嬰c 泳ng d映ng trong cơng nghi羽p ch医t t育y
15
r穎a hay t鰻ng h嬰p hóa h丑c. A吋 phù h嬰p s穎 d映ng trong ch医t t育y r穎a enzyme ph違i
鰻p"8鵜nh v噂i pH ki隠m, 鰻p"8鵜nh v噂i nhi羽v"8瓜ecq"v逢挨pi"8嘘i.
Vì v壱y 鰻p"8鵜nh enzyme là m瓜t trong nh英ng thách th泳c l噂n trong quá trình t嘘i
逢w" j„c" z¿e" vƒe" ukpj" j丑e0" Uwdvknkukp" 8逢嬰c k院t t栄a b茨ng cách s穎 d映ng amoni sulfat và polyethylene glycol v噂i các ch医t b隠 m員t pj逢"Vtkvqp"Z-100 và Tween 20. Enzyme CLEA, k院t qu違 c栄a quá trình liên k院t chéo gi英a glutaraldehyde và enzyme, là nh英ng kh嘘i enzyme khơng tan và có kh違 p<pi"z¿e"vƒe0"Enzyme c嘘 8鵜nh CLEA cho th医y kh違 p<pi"jq衣v"8瓜ng r瓜ng lên t噂i pH 9 và nhi羽v"8瓜 70°C. Tái s穎 d映ng và hình thái h丑c b隠 m員t c栄a các kh嘘k"ENGC"e pi"8逢嬰c nghiên c泳u. CLEA c栄a subtilisin có s詠 鰻p"8鵜nh t嘘t trong các dung môi h英w"e挨"mj»pi"
phân c詠c, ch鰯ng h衣p"pj逢"jgzcpg."và cyclohexane và có kh違 p<pi"ej鵜u nhi羽t
ecq"n‒p"8院p"82̇E"x "fq"8„"e„"vj吋8逢嬰c s穎 d映pi"pj逢"o瓜t ch医v"z¿e"vƒe"8吋 bi院n
8鰻i sinh h丑c c栄a các h嬰p ch医t không tan trong o»k"vt逢運pi"p逢噂c.
Vtqpi"8隠 tài c栄c"ej¿pi"v»k."8嘘k"v逢嬰pi"gp¦{og"8逢嬰c ch丑p"8吋 áp d映pi"m "vjw壱t CLEA là glucoamylase và pectinase, hai lo衣i enzyme có vai trị quan tr丑ng trong công ngh羽 th詠c ph育m.
1.3 Eƒe"8嘘k"v逢嬰ng liên quan trong nghiên c泳u
1.3.1 T鰻ng quan v隠 n医m m嘘c Aspergillus niger
1.3.1.1 Gi噂i thi羽u chung v隠 n医m m嘘c Aspergillus niger [26, 40]
Aspergillus niger là loài ph鰻 bi院n nh医t trong chi Aspergillus, phân b嘘 r瓜ng rãi
vt‒p"eƒe"e挨"ej医t t詠 nhiên, trong các s違n ph育m nông công nghi羽p và 荏 nhi隠u
x́pi"8鵜a lý khác nhau trên th院 gi噂i. Hi羽n nay, A. niger 8逢嬰c s穎 d映ng ch栄 y院u
trong công nghi羽p ch院 bi院n th詠c ph育m, công nghi羽p s違n xu医t m瓜t s嘘 acid h英u
e挨"pj逢"cekf citric hay acid gluconic, công nghi羽p s違n xu医t enzyme (bao g欝m
16 Hình 1.7: NＸm mぐc Aspergillus niger A. niger thu瓜c: Ngành: Amastigomycota Ngành ph映: Ascomycotina L噂p: Ascomycetes L噂p ph映: Plectomycetidae B瓜: Eurotiales H丑: Eurotiaceae Gi嘘ng: Aspergillus Loài: Aspergillus niger
1.3.1.2 A員e"8k吋m sinh lý
Aspergillus niger phân b嘘 nhi隠u trong t詠 pjk‒p."vtqpi"8医t, 荏 xác bã th詠c v壱t, hoa qu違x "8員c bi羽t là có nhi隠u 荏 vùng khí h壱u 医m áp.
Loài sinh v壱t này s嘘ng hi院u khí, s嘘ng ho衣i sinh ho員c ký sinh, khơng có kh違 p<pi"swcpi"j嬰p t衣o ch医t h英w"e挨"o "u嘘ng nh運 kh違 p<pi"j医p th映 các lo衣i ch医t h英w"e挨"e„"u印n qua b隠 m員t khu育n ty.
1.3.1.3 A員e"8k吋m sinh hóa
Có kh違 p<pi"8欝ng hóa các lo衣k"8逢運ng khác nhau: A. niger 8欝ng hóa t嘘t các