ruột nhỏ ở Việt Nam
Trong vài năm trở lại đây, các kỹ thuật PCR khác nhau đã được nghiên cứu phát triển để phát hiện nhiễm trứng sán lá nhỏ ở trong phân và ấu trùng trong cá, ốc. Việc phát hiện DNA của các loài ký sinh trùng này bằng kỹ thuật PCR và giải trình tự, realtime PCR có thể thay thế các kỹ thuật chẩn đoán truyền thống [101]. Các kỹ thuật sinh học phân tử có độ nhạy, độ đặc hiệu cao hơn kỹ thuật xét nghiệm soi tươi trực tiếp và kỹ thuật miễn dịch ngay cả khi cường độ nhiễm sán thấp [16],
[124]. Tuy nhiên, các kỹ thuật này khó áp dụng tại các cơ sở y tế do phải đầu tư hệ
thống phòng thí nghiệm hiện đại, đào tạo nhân lực và chi phí đắt. Vì vậy, hiện nay kỹ thuật sinh học phân tử vẫn chủ yếu được sử dụng trong các phòng thí
nghiệm [16], [124], [19].
1.2.2.1. Nghiên cứu xác định thành phần loài sán sán lá gan nhỏ, sán lá ruột nhỏ ở người
Đa số các điều tra ứng dụng xét nghiệm phân để xác định tình trạng nhiễm
ởngười. Chưa có nghiên cứu nào định danh trứng sán bằng sinh học phân tử. Có một số nghiên cứu định danh sán trưởng thành thu được ở người dựa vào các đặc điểm hình thái hoặc ứng dụng kỹ thuật sinh học phân tử.
Bằng chỉ thị gen ty thể, nghiên cứu của Ngô Thị Hương và CS (2006) tại
Bình Định và Phú Yên cho thấy, giữa các chủng sán lá nhỏ của Việt Nam và giữa các chủng của Việt Nam và Thái Lan có tỷ lệ sai khác < 1% [125].
Đỗ Trung Dũng (2007) chọn 33 người có cường độ nhiễm cao (EPG > 1.000) để tẩy sán và thu hồi sán trưởng thành, định danh bằng hình thái, phát hiện được có các SLGN C. sinensis (51,5%), SLRN H. pumilio (100%), H. taichui
(69,7%),H. yokogawai (3%), S. falcatus (6,1%) [109].
Nguyễn Văn Đề (2007) cũng sử dụng chỉ thị phân tử gen nhân ITS2, 18S và chỉ thị gen ty thể cox1, nad1 để xác định thành phần loài sán lá và SLRN ở Việt Nam [126].
Đặng Thị Cẩm Thạch (2008) định danh sán bằng giải trình tự gen cox1 thấy rằng tất cả sản trưởng thành thu thập được từ những người nhiễm tại Tân Thành và Yên Lộc, huyện Kim Sơn, tỉnh Ninh Bình làC. Sinensis [15].
Kim Văn Vạn (2009) đã sử dụng chỉ thị gen nhân ITS2 để xác định và phân biệt 2 loài sán lá ruột nhỏ H. taichui và H. pumilio. Tác giả này chỉ ra rằng, đoạn ITS2 của H. taichui và H. pumilio ở Việt Nam có tỷ lệ tương đồng cao (99-
100%) so với H. taichui và H. pumilio ở Thái Lan [97].
Nguyễn Văn Đề, Lê Thanh Hòa (2011) định danh bằng hình thái sán trưởng thành thu được ở người nhiễm, sau khi nhuộm carmine acetic thấy trong số 10 người tại Rạng Đông, Nghĩa Hưng, Nam Định nhiễm sán có 9 người nhiễm C. sinensis và 10 người bị nhiễm SLRN [127]. Định danh sán trưởng thành thu được
ở người, giải trình tự gen cox1 (bằng cách sử dụng cặp mồi JB3FR JB4.5R) và ITS2 (sử dụng các cặp mồi 3SF-BD2R), xác định được sán thu được trên người ở Nam Định là C. sinensis, H. pumilio và H. taichui [127].
Nguyễn Thu Hương (2013) sử dụng chỉ thị gen nhân ITS1 để giám định một trường hợp SLGN lạc chỗ hiếm gặp tại Hà Nội [128].
Nguyễn Văn Chương (2014) sử dụng chỉ thị gen ty thể để định loài SLGN ký sinh ở người tại Quảng Trị [129].
Đỗ Trung Dũng (2014) giải trình tự đoạn gen ty thể cox1 và gen nhân
28S ribosome định danh được các loài sán lá ruột nhỏ H. taichui, H. pumilio, S. falcatus, C. formosanus, E. japonicus tại một số tỉnh miền Bắc [130].
Ngọ Văn Thanh (2016) định danh sán bằng giải trình tự đoạn gen cox1, xác
định được loài sán tại điểm nghiên cứu là: C. sinensis, H. taichui, H. pumilio [28].
1.2.2.2. Nghiên cứu xác định thành phần loài sán lá gan nhỏ, sán lá ruột nhỏ trên cá
Phần lớn các nghiên cứu thành phần loài sán ở cá dựa vào đặc điểm hình thái nang ấu trùng. Bùi Ngọc Thanh nghiên cứu định danh nang ấu trùng sán trên cá dựa vào đặc điểm hình thái, sau đó gây nhiễm trên mèo và xác định được nang ấu trùng của C. sinensis trên cá mương, cá thiểu ở Ninh Bình [110]. Nghiên cứu
Heterophyidae [71].Nghiên cứu ở Nghệ An phát hiện các loài sán làH. pumilio,
H. taichui, H. yokogawai, C. formosanus, S. falcatus và E. Japonicus [71].
Phan Thị Vân (2010) tại tỉnh Nam Định trên 1543 con cá chỉ có một con
cá nhiễm C. sinensis; 50% cá nhiễm H. pumilio; bốn loài FZT ruột khác được tìm thấy ở tỷ lệ thấp [73]. Nghiên cứu trên các trại cá giống tại Bắc Ninh, Nam Định, Ninh Bình thấy tỷ lệ nhiễm Clonorchis ở cá ương là 1,5%; tỷ lệ nhiễm
SLRN cao (H. pumilio 55,6% và C. formosanus 41,0%, H. taichui là 0,3%; không tìm thấy S. falcatus, C. sinensis chỉ phát hiện được ở trắm cỏ (1.9%);
Rohu (0.5%) và cá mè (2.4%) [74]. Nghiên cứu tại Nam Định trên 3820 cá thấy nang ấu trùngC. sinensis chỉ xuất hiện ở cá mè,H. taichui xuất hiện ở cá rô cá mè,cá trắm cỏ...; H. pumilio xuất hiện ở mọi loài cá nghiên cứu [32]
Năm 2012 điều tra cá nước ngọt thu thập từ các chợ Hà Nội, Nam Định phát hiện nang ấu trùng H. pumilio, H. taichui, C. formosanus, và P. varium, S. falcatus
và Heterophyopsis continua; tỷ lệ nhiễm H. pumilio 80,0% [58]. Nghiên cứu tại Nghĩa Hưng, Nam Định (2015), thu thập trên 200.000 metacercariae nhưng không phát hiện được nang ấu trùng củaC. sinensis, loài H. pumiliochiếm tỷ lệ cao nhất (77,3%), còn lại làH. taichui, H. yokogawi, C. formosanus, Procerovum
sp [131].
Dự án FIBOZOPA (2004-2012) cho rằng nang ấu trùng của SLN phổ biến hơn so vớiC. sinensis, tìm thấy nang ấu trùng của nhiều loài SLRN (H. pumilio, H. taichui, H. yokogawai, C. formosanus, S. falcatus, P. varium và E. japonicus), trong khi metacercariae C. sinensiskhông được tìm thấy ở Nghệ An, hoặc hiếm thấy ở Nam Định (chỉ có một trong 1185 cá mè (H. Molitrix)), và Ninh Bình (chỉ có một trong tám cá cá mương (H. Leucisculus)) cũng như tỷ lệ lây nhiễm rất thấp
ởcác tỉnh phía Bắc (0,1-0,4% của 1500 cá của năm loài), những con số này cho thấy sự phổ biến của metacercariae C. sinensis trong cá ở miền bắc Việt Nam rất thấp so với báo cáo trước đó [62].
Nghiên cứu trên 9.266 cá con tại Ninh Bình trong năm 2009 và 5.911 trong năm 2010 từ vườn ươm tại Nam Định, Thái Bình, Ninh Bình, Thanh Hóa phát
hiện được nang ấu trùng SLN, tỷ lệ C. sinensis rất thấp (0,05%), chủ yếu Heterophyidae (94%) gồm C. formosanus, H. pumilio và H. yokogawi [75].
Đa số các nghiên cứu trên cá ở miền Bắc Việt Nam cho thấy tỷ lệ nhiễm SLRN rất cao, ngược lại tỷ lệ nhiễm ấu trùng SLGN C. sinensis rất thấp. Ấu trùng
các loài SLRN thường gặp nhất là H. pumilio, H. taichui, C. formosanus; ngoài ra còn gặp H. yokogawi, S. falcatus, P. varium và E. japonicus, Heterophysopsis continua, Diplostomum spp.