Hình 3. 3: Hình ảnh trứng sán lá nhỏ trong phân
Nhận xét: Quan sát hình dạng trứng sán lá nhỏ trong phân bằng vật kính 10 sau
đó chuyển sang vật kính 40 (khoảng cách giữa 2 vạch là 1 µm) cho thấy một số đặc điểm về hình thái học của trứng như sau:
+ Trứng có hình bầu dục, hơi nhỏ hơn ở một đầu, giống hình hạt vừng; + Vỏ trứng mỏng, bề mặt vỏ trứng nhìn không rõ thô ráp hay trơn nhẵn; +Đầu thóp nhỏ có nắp và có vai nhô cao rõ ràng bao quanh nắp;
+ Có một núm nhỏ (gai, knob) hình dấu phẩy ở đầu to hơn bên kia; + Trong trứng có hình ảnh phôi
Bảng 3. 38: Kích thước trung bình trứng sán lá nhỏ trong phân
Chỉ tiêu Trung bình SD
Chiều dài (µm) 28,6 2,7
Chiều rộng (µm) 16,3 2,3
Dài/rộng 1,76 0,8
Nhận xét: Kích thước trứng sán lá nhỏ thu được trong phân phù hợp với trứng sán C. sinensis và trứng sán lá ruột nhỏ.
Tuyến noãn hoàn Buồng trứng Giác miệng Giác bụng Tử cung Tinh hoàn A B Hình 3. 4: Hình ảnh sán trưởng thành
(Hình A sán tươi chưa nhuộm, Hình B sán nhuộm carmine)
• Kích thước cơ thể: 12-13 mm x 2,5-2,8 mm
• Thân màu nâu
• Cơ thể sán thuôn dẹt và mảnh dài, phần trước hẹp, sau tù.
• Giác miệng ở đầu thân, giác bụng nằm ở phần ba trước cơ thể. • Hầu được kế tiếp bằng thực quản.
• Hai nhánh ruột kéo dài về mút sau cơ thể.
• Hai tinh hoàn phân nhánh; một nằm ở phần trước một ở phần sau cơ thể. • Ống bài tiết thẳng
• Tuyến noãn hoàng nằm bên ngoài 2 nhánh ruột. • Buồng trứng nằm ngay phía trên tinh hoàn.
• Tử cung phát triển, gấp khúc nhiều lần, nằm ở khoảng giữa buồng trứng và giác bụng, chứa đầy trứng
Bảng 3. 39: Kích thước trung bình sán lá gan nhỏ trưởng thành trong phân (n = 36) Chỉ tiêu Trung bình SD Chiều dài (mm) 13,2 1,6 Chiều rộng (mm) 2,8 0,4 Giác miệng (µm) 186 23 Giác bụng (µm) 167 21
Nhận xét: Kích thước sán lá nhỏ thu được trong phân trung bình 2,8 x 13,2
mmlớn hơn 1cm phù hợp với sán lá gan nhỏC. Sinensis (SLRN kích thước
thường nhở hơn 1cm); giác miệng lớn hơn giác bụng.
Giác miệng
Giác bụng
Hình 3. 5: Hình ảnh giác miệng và giác bụng sán lá gan nhỏ trưởng thành
Tinh hoàn
Hình 3. 6: Hình ảnh tinh hoàn của sán trưởng thành
Nhận xét: Tinh hoàn chia nhánh nhỏ hình cành cây, là đặc điểm hình thái quan trọng của loài sán lá gan nhỏ C. sinensis.
Hình 3. 7: Tỷ lệ mẫu phân cho sản phẩm PCR (n=70) Nhận xét: (Có 78 mẫu phân nhưng chỉ có 70 mẫu đủ phân để tách DNA và chạy PCR). Tỷ lệ mẫu cho sản phẩm PCR là 42,85%.
Hình 3. 8: Hình ảnh điện di sản phẩm PCR trong mẫu phân
Band 1: 50 bp DNA marker), band 2: chứng âm, band 3-5: mẫu.
Nhận xét: Hình ảnh điện di cho sản phẩm có kích thước khoảng 400 bp.
Bảng 3. 40: Một số chuỗi gen ITS 2đã được đăng ký trên ngân hàng gen
Mã mẫu Loài Mã trên ngân hàng gen
59-NB Clonorchis sinensis MN128615 102-NB Clonorchis sinensis MN128616 119-NB Clonorchis sinensis MN128617 TX1-NB Clonorchis sinensis MN128618
Nhận xét: Kết quả cho thấy tất cả các mẫu sán cho kết quả tách chiết DNA ở người đều là sán lá gan nhỏ C. sinensis
Hình 3. 9: Cây phả hệ trứng sán lá nhỏ ở người dựa vào ITS2 Nhận xét: Cây phả hệ sán lá nhỏ được xây dựng dựa vào chuỗi ITS2 trong luận án và một số chuỗi từ GenBank (KJ137228, JQ048601, AY584735,
DQ513407, JX532156, AY245706, KP165440, EF6124489) tất cả các mẫu cho
Hình 3. 10: Hình ảnh chuỗi gen cox1 của mẫu 115 Nhận xét: Chuỗi gen cox1 của sán lá nhỏ có kích thước > 410 bp.
Hình 3. 11: Kết quả so sánh CoxI mẫu 115 với chuỗi EU652407 trên ngân hàng gen
Nhận xét: Chuỗi gen cox1 của mẫu 115 trùng hợp 411/413 = 99,52% với chuỗi EU652407, có nguồn gốc từ Việt Nam, chứng tỏ mẫu 115 là sán lá gan nhỏ
Bảng 3. 41: Mức độ tương đồng mẫu 115 với một số chuỗi gen
Số TT Tên chuỗi Nguồn Mức độ tương Tên loài đồng (%)
1 EU652407 Việt Nam 99,52 C. sinensis
2 MN116478 Nga 99,01 C. sinensis
3 MN116477 Nga 99,01 C. sinensis
4 MN116476 Nga 99,01 C. sinensis
5 MN116475 Nga 99,01 C. sinensis
6 KY564177 Korea 99,01 C. sinensis
7 KJ204622 Việt Nam 99,01 C. sinensis
8 KJ204600 Việt Nam 99,01 C. sinensis
9 KJ204582 Nga 99,01 C. sinensis
10 KJ204590 Nga 99,01 C. sinensis
Nhận xét: Chuỗi gen cox1 của mẫu 115 trùng hợp > 99,0% với một số chuỗi của sán lá gan nhỏC. sinensis.
Hình 3. 12: Cây phả hệ trứng sán lá nhỏ ở người dựa vào CoxI Nhận xét: Tất cả các mẫu trứng sán ở người trong NC này (3752788ST102, 3752789ST115, 3752790ST241) đều là sán lá gan nhỏC. sinensis.
3.2.2. Thành phần loài sán lá gan nhỏ, sán lá ruột nhỏ ở cáA B