Lắp hệ thống đun hoàn lưu. Cân 1.218g B2O3 cho vào bình cầu ba cổ, một cổ gắn nhiệt kế để quan sát nhiệt độ phản ứng, cổ còn lại để đưa các chất vào. Cân 1,74g 2,4-pentandione nhỏ chậm vào bình cầu cho đến hết, sau đó khuấy ở 30oC trong thời gian 15 phút. Ta tiếp
27
tục cân 4g tributylborate đã tổng hợp ở trên vào bình cầu và khuấy thêm 5 phút ở 30oC. Tiếp đến, ta hút dung môi cho một ít vào bình cầu tiếp tục khuấy 5 phút nhiệt độ giữ nguyên. Cho tiếp tục 5.2g vanillin vào bình cầu, dùng một ít dung môi để vanillin dính trên bình cầu xuống trong hỗn hợp phản ứng, khuấy đến khi vani tan hết. Cuối cùng ta cho 0.3g n-butylamine vào bình cầu, dùng phần dung môi còn lại để đảm bảo chất xúc tác vào hết hỗn hợp phản ứng và tăng nhiệt độ lên đến nhiệt độ mong muốn.
Sau những khoảng thời gian 15 phút, 30 phút, 45 phút, 60 phút, 90 phút, 2 giờ, 3 giờ, 4 giờ kể từ khi phản ứng đạt nhiệt độ yêu cầu, ta rút ra một ít mẫu để kiểm tra. Kiểm tra bằng cách pha loãng trong ethyl acetate, sau đó đo UV-VIS bước sóng từ 250 nm đến 600 nm để theo dõi tiến trình phản ứng.
Rút hỗn hợp phản ứng trong bình cầu 20 microlit tại các thời điểm đem đi pha loãng. Quy trình pha loãng như sau: dùng micropipette hút 20 µL hỗn hợp phản ứng vào bình định mức (1) 50 mL pha loãng bằng dung môi ethyl acetate, sau đó hút 4 mL ở bình định mức số (1) tiếp tục pha loãng bằng ethyl acetate trong bình định mức 50 mL.
Hệ số pha loãng của hỗn hợp phản ứng được tính công thức như sau:
Sau 4 giờ phản ứng, ta có biểu đồ biết được tại bước sóng hấp thu của rosocyanine λ = 550 nm có độ hấp thu quang là bao nhiêu, từ đó có thể tính được lượng rosocyanine tạo thành và hiệu suất là bao nhiêu.