CHƯƠNG 4: CÁC PHƯƠNG PHÁP PHÁT HIỆN LEGIONELLA
4.2.2. Các phát hiện Legionella trong mẫu mơi trường và sinh học
Các xét nghiệm huyết thanh học đã được sử dụng để phát hiện Legionella trong nước, đờm, máu. Kohler (1986) báo cáo rằng các kháng nguyên cĩ thể được phát hiện trong nước tiểu của bệnh nhân bị viêm phổi chiếm 80% và đặc
trưng của các khảo nghiệm chiếm 99%. Hầu hết các xét nghiệm trên đường hơ hấp, cụ thể là mơ phế quản và khí quản, đờm.
Các xét nghiệm huyết thanh học được thực hiện trên vi khuẩn là trực tiếp và gián tiếp bằng phương pháp huỳnh quang được áp dụng đối với cả hai mơi trường. Huỳnh quang là những hợp chất hữu cơ thuộc các phân tử kháng thể được gắn vào một tế bào hoặc kháng nguyên trên bề mặt tế bào.
Khảo nghiệm immunofluorescence bao gồm khảo nghiệm trực tiếp (Dfa) và gián tiếp (IFA).Các xét nghiệm huyết thanh khác nhau chủ yếu ở độ nhạy, đặc tính của Legionella.
Khảo nghiệm trực tiếp immunofluorescence (Dfa)
Trực tiếp khảo nghiệm immunofluorescence(DFAs) cần 2-3 giờ để nhuộm khi sử dụng kháng thể kết hợp với một fluorochrome. DFAs của đờm cho kết quả dương tính sau 2-4 ngày sau khi bắt đầu điều trị bằng kháng sinh và thường cho khoảng thời gian trong trường hợp của bệnh viêm phổi. DFA đã được sử dụng thàng cơng với đờm và dịch màng phổi. Dịch chất lỏng được kiểm tra trong bệnh nhân viêm phổi bằng Dfa hiếm khi mang lại kết quả tích cực. Giữa bệnh nhân legionellosis đã được chứng minh với Dfa cho
L.pneumophila tới 25%-70% và đặc trưng của thử nghiệm là cao hơn 99,9%.
Phải cẩn trọng để ngăn ngừa kết quả dương tính giả của Dfa. Khảo nghiệm gián tiếp immunofluorescence (IFA)
Vi khuẩn Legionella và kháng thể trong huyết thanh bệnh nhân bị viêm phổi được phát hiện qua IFA. Nhiệt cố định kháng nguyên thường được sử dụng tại Hoa Kỳ nhưng kháng nguyên formolized được sử dụng chủ yếu ở Châu Aâu. Bởi vì chuyển đổi huyết thanh chỉ xảy ra sau một thời gian dài ở người, các thử nghiệm IFA thường được sử dụng cùng với các xét nghiệm khác và một loạt các xét nghiệm huyết thanh học được tiến hành để kiểm tra kháng thể và thường kết hợp với IFA. Hiện nay trường hợp về legionellosis
được xác định thơng qua phát hiện kháng nguyên tiết niệu. Như một hệ quả của sự chuyển đổi thì phát hiện L.pneumophila serogroup 1 gây legionellosis đang gia tăng và tất cả các serogroup khác cĩ lẽ underdiagnosed. Theo báo cáo của các nước châu Aâu vào năm 1999 thì bệnh legionellosis xảy ra rất cao. Phát hiện kháng nguyên tiết niệu là phương pháp phổ biến nhất trong điều trị bệnh legionellosis. Các xét nghiệm phát hiện kháng nguyên tiết niệu là nhạy cảm đáng kể hơn cho communityacquired và chăm sĩc sức khỏe nhiễm trùng mua lại.
Kháng nguyên tiết niệu
Enzyme immunoassays.
Việc sử dụng Enzyme immunoassays (EIAs) để phát hiện kháng nguyên
L.pneumophila trong nước tiểu cho phép chẩn đốn bệnh legionellosis sớm
trong quá trình lây nhiễm. Sử dụng EIAs giúp thử nghiệm nhanh chĩng các đặc trưng và sự nhạy cảm đối với L.pneumophila 1. Các kháng nguyên được phát hiện trong hầu hết các bệnh nhân từ một đến ba ngày sau khi bắt đầu xuất hiện các triệu chứng và cĩ thể kéo dài vài tuần hay vài tháng ngay khi các xét nghiệm khác khơng phát hiện kháng nguyên.
Các xét nghiệm nước tiểu sử dụng EIAs thì cĩ mặt kháng ngun tới 80 -85%. Do đĩ sử dụng EIA để phát hiện L.pneumophila 1 kháng nguyên trong nước tiểu. Ngồi ra sử dụng Enzyme immunoassays để phát hiện kháng nguyên tiết niệu là phương pháp được lựa chọn cho L.pneumophila 1.
So với các phương pháp chẩn đốn khác thì lợi thế của kháng ngun tiết niệu đạt hiệu quả cao hơn. Vì mẫu vật thu được dễ dàng, kháng nguyên được phát hiện từ rất sớm trong q trình nhiễm, thử nghiệm nhanh chĩng...Các kháng nguyên cũng được phát hiện trong bệnh viêm phổi mà khơng cĩ kháng sinh điều trị .
Khảo nghiệm Immunochromatographic giúp phát hiện nhanh chĩng
L.pneumophila 1 kháng nguyên trong nước tiểu. Khảo nghiệm này giúp phát
hiện kháng nguyên trong nước tiểu trong thời gian rất ngắn và khơng yêu cầu trang thiết bị phịng thí nghiệm .
Mơ kháng nguyên
Sử dụng kính hiển vi immunofluorescence để phát hiện Legionella trong các mẫu thuộc đường hơ hấp như phổi và dịch màng phổi. Sử dụng các kỹ thuật gián tiếp immunofluorescence (IEAT) được sử dụng hầu hết trong các phịng thí nghiệm để phát hiện các kháng thể huyết thanh. Đã chứng minh được L.pneumophila 1 gây bệnh legionellosis xuất hiện các triệu chứng trong vịng 1-9 tuần sau. Trung bình bệnh nhân phát triển các kháng thể (seroconvert) trong vịng 2 tuần. Tuy nhiên, cĩ khi lên đến 25% của seroconversions là khơng bị phát hiện bởi vì huyết thanh thu được hơn 8 tuần sau khi bệnh khởi phát. Mặc dù phát hiện chẩn đốn bằng kháng thể từ mơ vẫn cịn hữu ích cho các nghiên cứu dịch tễ học tại ổ dịch, thường bị thay thế bằng các xét nghiệm kháng nguyên tiết niệu.
Sử dụng gián tiếp IFAT để chẩn đốn bệnh legionellosis . Độ nhạy và đặc tính của IFAT chỉ được đánh giá bằng cách sử dụng kháng nguyên cho
L.pneumophila 1, độ nhạy và đặc tính cho các nhĩm và lồi khác thì khơng
được biết đến.
Khảo nghiệm Enzyme Linked Immunoabsorbent (ELISA)
Khảo nghiệm Enzyme Linked Immunoabsorbent (ELISA) cùng với radioimmunoassay (RIA) dùng để phát hiện kháng thể Legionella. Những phương pháp này sử dụng các enzyme và đồng vị phĩng xạ để phát hiện các phân tử kháng thể. Các phương pháp ELISA được sử dụng để phát hiện kháng thể Legionella trong huyết thanh bệnh nhân, nhưng nĩ cũng được dùng để phát
hiện kháng nguyên trong nước tiểu. Với phương pháp ELISA thì phải sấy sơ bộ mẫu là cần thiết để tránh dương tính giả.
Phương pháp RIA cũng được sử dụng để phát hiện các Legionella kháng ngun trong nước tiểu nhưng khơng cịn thương mại và phổ biến.
Kháng thể đơn dịng
Kháng thể đơn dịng được kiểm tra, thử nghiệm với các kháng thể hình thành từ bản sao duy nhất của các tế bào, được tìm thấy chính xác hơn xét nghiệm polyclonal do sự đàn áp của nền huỳnh quang. Ngồi ra, kết quả sai từ các phản ứng chéo với các sinh vật khơng cĩ Legionella được loại bỏ.
Kháng thể đơn dịng cĩ thể được sản xuất để phản ứng với một lồi cụ thể. Theo Kohler (1986) ở phịng thí nghiệm khẳng định rằng cĩ nhiều kháng thể cho L.pneumophila đã được phát triển ở các lồi cụ thể và thậm chí là cụ thể ở các nhĩm.