12 R=H (dãy IIIa-l), CH3 (dãy IVa-l)
3.3.2.3.Ảnh hưởng của các gốc cacboxylat
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hiệu ứng điện tử của các nhóm thế X trong các este IIIa-h, IVa-h và hiệu ứng
không gian của các gốc hiđrocacbon trong các este Va-h đã tìm được AS-OL α-propionat (IVi) có độ nhạy cao nhất đối với phản ứng nhuộm esteraza bạch cầu người. Để kết quả có độ tin cậy cần thiết, đã nghiên cứu ảnh hưởng của gốc cacboxylat với mạch hiđrocacbon kích thước khác nhau lên độ nhạy và độ đặc hiệu của cơ chất. Các gốc cacboxylat được lựa chọn, ngoài cloaxetat và α-clopropionat ở trên, còn có butyrat, α-clobutyrat và α-clophenylaxetat. Để so sánh đối chứng, đã đồng thời khảo sát thêm các cơ chất naphtol AS-D cũng chứa các gốc cacboxylat kể trên. Trong phần này cũng đã xem xét đánh giá vai trò của nguyên tử clo đối với hoạt tính của cơ chất.
Các cơ chất khảo sát có cấu trúc như sau: O O N H O R X
Kết quả nhuộm cho thấy:
Độ đặc hiệu:
Tất cả 10 cơ chất trên đều có tính đặc hiệu với esteraza đặc hiệu bạch cầu người.
Độ nhạy:
- Đối với cơ chất là các este điều chế từ naphtol AS-D và naphtol AS-OL thì gốc cacboxylat với mạch hiđrocacbon 3 nguyên tử cacbon có độ nhạy cao nhất.
- Đối với các cơ chất với gốc cacboxylat giống nhau, chứa từ 2-4 nguyên tử C thì este của naphtol AS-OL có độ nhạy cao hơn của naphtol AS-D. Độ nhạy cao nhất thuộc về naphtol AS-OL -clo-propionat (tức là gốc cacboxylat chứa ba nguyên tử cacbon).
- Các cơ chất mà gốc cacboxylat có chứa nguyên tử clo ở vị trí alpha có độ nhạy đối với esteraza đặc hiệu cao hơn khi không chứa clo.
- Gốc -clophenylaxetat (CHClC6H5) có độ nhạy thấp nhất đối với phản ứng nhuộm esteraza đặc hiệu bạch cầu. Có lẽ do nhóm CHClC6H5 thể tích lớn, không thuận lợi cho sự tiếp cận của esteraza đến nguyên tử cacbon cacbonyl của nó. Điều này hoàn toàn phù hợp bởi phản ứng thuỷ phân este của naphtol AS-D (OL) xúc tác bằng esteraza
X = o-CH3: R = CH2Cl (IIIa), CH3CHCl (IVa), CH3(CH2)2 (VIa), CH3CH2CHCl (VIb), C6H5CHCl (VIc)
X = o-OCH3: R = CH2Cl (IVa), CH3CHCl (IVi), CH3(CH2)2 (VId), CH3CH2CHCl (VIe), C6H5CHCl (VIf)
40
đặc hiệu có sự chọn lọc cao về cấu hình không gian tại tâm hoạt động.
Kết quả thu được một lần nữa khẳng định rằng, cơ chất có độ nhạy cao nhất đối với phản ứng nhuộm esteraza đặc hiệu tế bào bạch cầu người chứa nhóm metoxi ở vị trí octo-
và có kích thước gốc cacboxylat trung bình, khoảng 3-4 nguyên tử cacbon. Căn cứ điểm nhuộm trên các bảng 3.21, 3.22 và 3.25 (xem luận án), naphtol AS-OL -clopropionat có cấu trúc đáp ứng tốt nhất về mặt cấu hình, để esteraza đặc hiệu bạch cầu phát huy tính chọn lọc đối với phản ứng nhuộm tế bào [55, 89].
Hình 3.13. Kết quả nhuộm esteraza bạch cầu người
bằng các cơ chất naphtol AS-D và naphtol AS-OL cloaxetat và -clopropionat