1.
1. Điện di:Điện di:
Sử dụng gel polyacrylamide 12%, dung dịch đệm là b-alanine 34mM, pH = 4,3 và Sử dụng gel polyacrylamide 12%, dung dịch đệm là b-alanine 34mM, pH = 4,3 và cường độ dịng điện khơng đổi là 4mA. Mẫu sẽ được chuẩn bị trong Tris-glycerol- b cường độ dịng điện khơng đổi là 4mA. Mẫu sẽ được chuẩn bị trong Tris-glycerol- b -mercaptoethanol cho vào nước sơi trong 40 giây. Gel sẽ được hiện màu bằng thuốc thử -mercaptoethanol cho vào nước sơi trong 40 giây. Gel sẽ được hiện màu bằng thuốc thử Coomassie-Blue R-250 và Brilliant Blue G-colloidal.
Coomassie-Blue R-250 và Brilliant Blue G-colloidal. Hình III.2: Phân t
Hình III.2: Phân tử lử lượượng cng củủa papain xác a papain xác
đị
định nh được khi lđược khi lọc qua cọc qua cột sephadex G-25:ột sephadex G-25:
1.
1. Cytochrome; 2. Lysozym; Cytochrome; 2. Lysozym;
3. Tripsinogen; 4. Carbonic anhydrase;
3. Tripsinogen; 4. Carbonic anhydrase;
5. Papain thu b
5. Papain thu bằng phằng phươương pháp cng pháp cổ ổđiđiển;ển;
6. Papain thu b
6. Papain thu bằng phằng phươương pháp nghiên ng pháp nghiên
c
cứu trên.ứu trên.
Hình III.1 : K
Hình III.1 : Kếết qut quảả ch chạy ạy điđiện di trên gel ện di trên gel
polyacrylamide 12% c
polyacrylamide 12% của các phân ủa các phân đođoạạn papain n papain
thu
thu được bđược bằng các phằng các phươương pháp cng pháp cổ ổđiđiển. Các cển. Các cột ột
1, 4, 6 t
1, 4, 6 tươương ng ứứng vng vớới phân i phân đođoạạn 2 (nhn 2 (nhựa thơ) ựa thơ)
tách ra
tách ra được 7 thàn phđược 7 thàn phầần protein, cn protein, cộột 2, 3 t 2, 3 ứng ứng
v
với phân ới phân đođoạn 4 (kạn 4 (kết tinh lết tinh lầần 1), cn 1), cột 5 ột 5 ứng vứng với ới
phân
2.
2. Lọc qua Sephadex G-75:Lọc qua Sephadex G-75:
Để xác định phân tử lượng của papain, ta dùng cột Sephadex G-75 cĩ kích thước cột là Để xác định phân tử lượng của papain, ta dùng cột Sephadex G-75 cĩ kích thước cột là 1,1x100 cm. cột được cân bằng trước bằng dung dịch đệm gồm sodium phosphate 0,1M và 1,1x100 cm. cột được cân bằng trước bằng dung dịch đệm gồm sodium phosphate 0,1M và dung dịch EDTA (ethylenediamine-tetraacetic acid) pH = 7.
dung dịch EDTA (ethylenediamine-tetraacetic acid) pH = 7.
IV.