2. Phương pháp nghiên cứu
2.5. Phản ứng ngưng kết hồng cầu (phản ứng HA)
Đây là phương pháp gián tiếp dùng để xác định hiệu giá virut. Virut có khả năng liên kết với hồng cầu để gây ngưng kết. Đó là do sự kết hợp giữa kháng nguyên HA trên bề mặt của virut cúm với thụ thể trên bề mặt hồng cầu. Muốn phản ứng xảy ra cần phải có nồng độ virut thích hợp để tạo nên
liên kết chéo giữa các hồng cầu. Chúng tôi đã tiến hành thu hộn dịch virut. Sau khi thu dịch niệu từ trứng , chúng tôi tiến hành kiểm tra hiệu giá virut bằng phản ứng ngưng kết hồng cầu.
* Chuẩn bị hồng cầu gà:
- Lấy 2 ml máu gà trống tơ khỏe mạnh vào trong bơm tiêm đã chứa sẵn 2ml dung dịch chống đông alserver.
- Chuyển sang ống li tâm đã chứa sẵn 4ml dung dịch alserver. Li tâm 1500 v/p trong 15 phút.
-Rửa hồng cầu bằng PBS 1X (rửa 2, 3 lần). - Li tâm 1500 v/p trong 15 phút.
- Thu tế bào hồng cầu và pha thành dung dịch hồng cầu 0,5 % trong PBS 1X.
* Làm phản ứng trên phiến nhựa vi lượng 96 giếng :
Các giếng được đánh số thứ tự các hàng và cột như sau:
- Dùng pipet 8 kênh, cho 90 (l dung dịch PBS 1X vào hàng đầu tiên <A> của phiến nhựa (12 giếng hàng trên cùng).
- Bổ sung tiếp 10 (l dịch niệu chứa virut vào 12 giếng hàng trên cùng theo các vị trí tương ứng lần lượt (từ 1 đến 12).
- Bổ sung 50 (l dung dịch PBS 1X vào các giếng từ hàng thứ 2 đến hết (từ hàng B đến hàng F).
- Pha loãng dịch virut theo bậc hai từ hàng A đến hàng H: + Vặn pipet 8 kênh ở thể tích 50 (l.
+ Dùng pipet hút lên hút xuống 3 lần bắt đầu ở hàng A. + Hút lên 50 (l hỗn dịch từ hàng A chuyển xuống hàng B.
+ Làm tương tự từ hàng B đến hàng H. Tại hàng cuối cùng hút 50(l hỗn dịch bỏ đi.
- Bổ sung 50 (l hồng cầu gà 0,5% theo thứ tự các cột từ 1 đến 12 của phiến nhựa.
- Lắc nhẹ, để tĩnh ở nhiệt độ phòng trong khoảng 30 phút và đọc kết quả.