3. Đối tợng nghiên cứu
2.2.2. Nghiờn cứu tỏch hợp chất từ quả cõy giỏcđế miờn
tamirensis Pierre) - Họ Na
Mẫu lỏ và quả cõy giỏc đế miờn thu hỏi vào thỏng 6/2009 ở Quỳ Chõu - Nghệ An được định danh bởi TS. Nguyễn Quốc Bỡnh – Viện Sinh thỏi và Tài nguyờn sinh học Việt Nam.
Quả cõy được rửa sạch, phơi khụ nhẹ trong búng rõm, xay nhỏ, ngõm với metanol khoảng 30 ngày. Cất thu hồi dung mụi được cao metanol.
Chiết lần lượt cao metanol với dung mụi cú độ phõn cực tăng dần: n- Hexan, clorofom, etylaxetat, metanol thu hồi cỏc cao tương ứng.
Cao etylaxetat được phõn tớch bằng sắc ký cột:
+) Hệ dung mụi rửa giải: clorofom: metanol = 100%: 0% đến 0%: 100% thu được 24 phõn đoạn.
- Phõn đoạn 6 được phõn tớch bằng sắc ký cột với hệ dung mụi rửa giải clorofom: metanol là 100%: 0% đến 0%: 70 %, thu được 9 phõn đoạn.
Phõn đoạn F 7.5 dựng bản mỏng điều chế, thu được 2 chất rắn màu trắng. Tinh chế và kết tinh lại nhiều lần bằng cỏc dung mụi khỏc nhau thu được chất A và B.
Quả ( 2kg khô )
Cao metanol (305g)
Cao n - hexan
(50g) Cao etylaxetat (105g) Dịch nước
- ngâm trong metanol - Chưng cất loại metanol
Chiết lần lượt với các dung môi sau: - n- hexan - clorofom - etylaxetat SKC Cao clorofom (87g) A B
Sơ đồ 1: Quỏ trỡnh ngõm, chiết, tỏch hợp chất từ quả cõy giỏc đế miờn
CHƯƠNG 3
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1. Xỏc định cấu trỳc hợp chất A
Chất A là một chất rắn màu trắng,độ quay cực α =25D. Nhiệt độ núng chảy 201 – 2030C.
3.1.1. Phổ EI – MS của hợp chất A
Phổ khối lượng phun mự electron (ESI - MS) negtive [M+H]+ cho pic 335, positive [M-H]- cho pic 333. Vậy hợp chất A cú khối lượng phõn tử 334, ứng với cụng thức C13H14 O4.
Hỡnh 1 : phổ khối lượng của hợp chất A positive [M-H]-
Hỡnh 2 : phổ khối lượng của hợp chất A negtive [M+H]+
3.1.2. Phổ 1 H-NMR của hợp chất A
Hỡnh 3 : phổ 1H - NMR của hợp chất A (0 - 12 ppm)
Hỡnh 4 : Phổ 1H - NMR của hợp chất A (1.6 – 3.0 ppm)
3.1.3. Phổ 13C-NMR của hợp chất A
Hỡnh 5 : Phổ 13C- NMR của hợp chất A (0- 200 ppm)
Hỡnh 6: Phổ gión 13C- NMR của hợp chất A (25 - 75 ppm
3.1.4. Phổ DEPT của hợp chất A
Hỡnh 7: Phổ DEPT của hợp chất A (0 -170 ppm)
Hỡnh 8: Phổ gión DEPT của hợp chất B (20 -170 ppm)
3.1.5. Phổ COSYGP của hợp chất A
Hỡnh 9 : Phổ COSYGP của hợp chất A
Hỡnh10: Phổ gión COSYGP của hợp chất A
3.1.6.Phổ HMBC Của hợp chất A
Hỡnh 11 : Phổ HMBC hợp chất A
Hỡnh 12 : Phổ gión HMBC hợp chất
Hỡnh 13 : Phổ gión HMBC hợp chất A
Hỡnh 14 : Phổ gión HMBC hợp chất A
Hỡnh 15 : Phổ gión HMBC hợp chất A
3.1.7. Phổ HSQC của hợp chất A
Hỡnh 16: Phổ HSQC của hợp chất A
Hỡnh 17 : Phổ gión HSQC của hợp chất A
Trờn 1H-NMR (500 MHz, CDCl3): Cú cỏc tớn hiệu với δ (ppm) như sau: 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5); 4,95 (1H, s, H-7); 4,86 (1H, quin, J=2,0 Hz, H-1); 4,52 (1H, s, H-5); 3,95 (1H, s, H-8); 2,96 (1H, d, J = 19,5 Hz, H-4b); 2,86 (1H, dd, J=19,5; 5,9Hz, H-4a); 2,60 (1H, dquin, J=14,0; 2,5 Hz, H-9b); 1,84 (1H, dd, J = 14,0; 3,5 Hz, H-9a); 1,66 (1H, d, J = 3,0Hz, OH). Trờn phổ 1H- NMR xuất hiện tớn hiệu của 5 proton vũng thơm ở δH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5). Cỏc tớn hiệu singlet của 3 nhúm CH ở δH = 4,95 (1H, s, H-7); 4,52 (1H, s, H-5); 3,95 (1H, s, H-8) và tớn hiệu của 1 proton ở δH = 4,86 (1H, quin, J=2,0 Hz, H-1) là 4 nhúm metin gắn với oxi. Ở δH = 2,96 (1H, d, J=19,5 Hz) và 2,86 (1H, dd, J=5,0; 19,5 Hz) là thuộc nhúm metylen CH2-4; proton ở ở δH = 2,60 (1H, dquin, J=14,0; 2,5 Hz) và 1,84 (1H, dd, J=14,0; 3,5 Hz) là thuộc nhúm metylen CH2-9. Cũn cú 1 proton của nhúm OH với δH = 1,66 (1H, d, J = 3,0Hz, OH). Bảng số liệu 1H - NMR của hợp chất A T T Nhúm δH (ppm) δH (ppm) tài liệu 1 CH 4,86 (1H, quin, J=2,0 Hz, H-1) 4,86 (1H, quin, 2.0) 2 O 3 C 4 CH2 2,86 (1H, dd, J=19,5; 5,9Hz, H-4a); 2,96 (1H, d, J = 19,5 Hz, H-4b) 2,86 (1H, dd, 5.5, 19,0) 2,96 (1H, d, 19,0) 5 CH 4,52 (1H, s, H-5) 4,52 (1H, br s) 6 O 7 CH 4,95 (1H, s, H-7) 4,94 (1H, s) 8 CH 3,95 (1H, s, H-8) 3,94 (1H, br s) 9 CH2 1,84 (1H, dd, J = 14,0; 3,5 Hz, H-9a); 1,84 (1H, dquin, 2,0, 14.0)
2,60 (1H, dquin, J=14,0; 2,5 Hz, H-9b) 2,59 (1H, dd, 3.5, 14,0) OH 1,66 (1H, d, J = 3,0Hz, OH) 1,67 (1H, s) 1' C 2' CH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5) 7,31 – 7,48 (5H, m) 3' CH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5) 4' CH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5) 5' CH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5) 6' CH 7,31 – 7,42 (5H, m, C6H5) Trờn phổ 13C-NMR (CDCl3, 125 MHz) δ (ppm): cú cỏc tớn hiệu với δ (ppm) như sau: 169,2 (C=O); 136,7 (C-1’); 128,9 (C-3’ + C-5’); 128,3 (C-4’); 126,1 (C-2’ + C-6’); 74,7 (C-1); 70,5 (C-7); 68,2 (C-8); 66,1 (C-5); 36,3 (C- 4); 24,0 (C-9).
Phổ 13C-NMR và DEPT của A cho thấy phõn tử cú 13 nguyờn tử cacbon trong đú cú 7 cacbon sp2 và 6 cacbon sp3.
Từ DEPT 90 cú 9 pic cho ta biết hợp chất A trong đú cú 9 nhúm (CH) trong đú cú 4 nhúm metin sp3 ở δC 66,1; 68,2; 70,5; và 74,7; 5 nhúm metin sp2
ở δC 126,1 (C-2’+C-6’), 128,3 (C-4’), 128,9 (C-3’ +C-5’).
Từ DEPT 135 ( phần trờn ) cú 9 pic gồm cỏc nhúm (CH) và (-CH3 ) kết hợp với DEPT 90 ở trờn ta thấy khụng cú nhúm (-CH3 )
Từ DEPT 135 ( phần dưới ) cú 2 pic tương ứng 2 nhúm metylen ở δC = 24,0 (C-9) và 36,3 (C-4).
Số nguyờn tử C bậc 4 khụng liờn kết với nguyờn tử H là 2 nguyờn tử C tương ứng với 1 nhúm cacbonyl ở δC =169,2; và 1 cacbon bậc 4 ở δC =136,7.
Bảng số liệu 13C -NMR của hợp chất A TT Nhúm δC (ppm) δC (ppm) tài liệu 1 CH 74,7 74,8 2 O 3 C 169,2 169,3 4 CH2 36,3 36,3 5 CH 66,1 66,1
6 O 7 CH 70,5 70,5 8 CH 68,2 68,2 9 CH2 24,0 24,0 OH 1' C 136,7 136,8 2' CH 126,1 126,2 3' CH 128,9 128,8 4' CH 128,3 128,3 5' CH 128,9 128,8 6' CH 126,1 126,2
Trờn phổ COSYGP của hợp chất A cho biết tương tỏc giữa H-H: Cú cỏc tương tỏc đối xứng nhau: thấy tương tỏc giữa H-5 với H-4 và H-9; H-8 với H-7 và H-1; H-1 với H-8 và H-9; proton của OH (C-8) tương tỏc với H-8.
Trờn phổ HMBC cho thấy tương tỏc xa (2J, 3J) giữa H-7 với C-1’, C-2’, C-6’, C-8 chứng tỏ vũng thơm gắn với vũng piran ở vị trớ C-7
Từ cỏc dữ kiện phổ 1H-NMR, 13C-NMR, COSY, HSQC, HMBC và so
sỏnh với tài liệu tham khảo [6] cho phộp xỏc định cấu trỳc của chất A là 9- deoxygoniopypyrone, cú cụng thức cấu tạo :
2 3 4 5 9 1 8 6 7 1' 2' 3' 4' 5' 6' O O O OH 3.2. Xác định cấu trúc hợp chất B
Chất B là chất rắn màu trắng, nhiệt độ núng chảy 130 – 1310C.
3.2.1. Phổ EI – MS của hợp chất B
Trờn phổ EI –MS của hợp chất B ta thấy: Phổ khối lượng phun mự electron (ESI - MS) negtive [M+H]+ cho pic 235, positive [M-H]- cho pic 233. Vậy hợp chất B cú khối lượng phõn tử 234, ứng với cụng thứcC13H14 O4.