3.4.1. địa ựiểm nghiên cứu:
- Phòng thắ nghiệm bộ môn Nội - Chẩn - Dược - độc chất, tầng 2 Ờ khoa Thú Y - trường đại học Nông nghiệp Hà Nội.
- Một số nông hộ thuộc khu vực huyện Tiên Du, thị xã Từ Sơn - tỉnh Bắc Ninh.
3.4.2. Thời gian nghiên cứu:
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 35
PHẦN 4
KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
Gần ựây các nghiên cứu về thảo dược trị ngoại ký sinh trùng thú y ựược thực hiện khá nhiều với mục ựắch: nghiên cứu tác dụng dược lý của dược liệu, tìm ra dạng bào chế, nồng ựộ thắch hợp ựể trị bệnh. Những thảo dược tự nhiên ựược nghiên cứu tập trung vào diệt ngoại ký sinh trùng thú y như:
- Thuốc lào, bách bộ, hạt na, rễ thuốc cá (Nguyễn Văn Tý, 2002). - Hạt củ ựậu, rễ thuốc cá, dầu sở (Bùi Ngân Tâm, 2003).
- Hạt củ ựậu (Nguyễn Mạnh Hiển, 2005).
Các nghiên cứu trên chủ yếu thực hiện trong phòng thắ nghiệm và tập trung vào việc xác ựịnh, kiểm tra ựộc tắnh của dược liệu xác ựịnh liều gây chết cho ựộng vật thắ nghiệm (LD50, LD100). Ngoài ra cũng có những thắ nghiệm ựiều trị nhưng chưa nhiều. Thuốc ựiều trị ựưa ra chủ yếu tập trung vào dạng dịch chiết, nước ngâm, thuốc bột. Các dạng thuốc này cũng ựã thể hiện ựược tác dụng hiệu quả diệt ngoại ký sinh trùng thú y. Tuy nhiên vẫn còn một số ựiểm khiến cho chế phẩm chưa có khả năng phát triển thành sản phẩm ựại trà như cách sử dụng, bảo quảnẦ
Có thể nói tất cả các nghiên cứu trên là cơ sở, nền móng cho việc tiếp tục phát triển những nghiên cứu sau ở mức ựộ sâu rộng hơn. Nghiên cứu trong ựề tài này của chúng tôi cũng với mong muốn góp phần tìm ựược dạng bào chế, nồng ựộ thắch hợp, hiệu quả nhất và an toàn cho vật nuôi trong quá trình ựiều trị.
Với thuận lợi là sự kế thừa các kết quả trong phòng thắ nghiệm cũng như kết quả ựiều trị của dạng dịch chiết, nước ngâm, dạng bột rễ thuốc cá, chúng tôi phát triển và tập trung vào việc bào chế dạng thuốc mỡ, thuốc bột từ thân, rễ thuốc cá khô. Sau ựó tiến hành thử ựộc tắnh và kiểm tra hiệu quả ựiều trị của dạng thuốc trong thực tế.
Toàn bộ nghiên cứu ựược tiến hành theo sơ ựồ bố trắ tại mục 3.3. Kết quả ựược trình bày trong các nội dung sau:
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 36
4.1. KẾT QUẢ BÀO CHẾ CÁC CHẾ PHẨM THUỐC
Chúng tôi tiến hành chế thử nghiệm các dạng thuốc mỡ, thuốc bột từ rễ và thân cây thuốc cá kết hợp ở 3 nồng ựộ khác nhau 10%, 20%, 30%.
Kế thừa kết quả nghiên cứu cũ, trước tiên chúng tôi chế thử nghiệm 3 loại thuốc mỡ có nồng ựộ 10%, 20%, 30%: cân cao dược liệu và vaselin cho vào cối inox ựánh tan, rồi cho tá dược vào hút nước.
Sau khi hoàn thành, ựánh giá bằng cảm quan nhận thấy: thuốc có thể chất rất mềm và mịn. Dược chất và tá dược có sự ựồng nhất. Thuốc không bị chảy ra ở nhiệt ựộ thường. Khi bôi thử bám thành lớp mỏng trên da và niêm mạc, không có hiện tượng kắch ứng hay dị ứng gì với da. Dạng thuốc này hoàn toàn ựáp ứng ựủ các yêu cầu (về cảm quan) ựối với dạng thuốc mỡ ựược trình bày trong cuốn ỘKỹ thuật bào chế và sinh dược học các dạng thuốc tậpỢ, tập 2 (đại học Dược Hà Nội, 2004).
đối với thuốc dạng bột, kỹ thuật bào chế ựơn giản hơn. Chúng tôi dùng máy nghiền rễ và thân thuốc cá ựã ựược chặt nhỏ ựến kắch thước tiêu chuẩn. Sau ựó tiến hành trộn bột trên với talc dược dụng theo tỉ lệ thắch hợp ựể ựược 3 dạng thuốc bột có nồng ựộ 10%, 20%, 30%. Thuốc bột bào chế có màu trắng xám, dược liệu phân tán ựều trong tá dược. Thuốc mịn, có mùi ựặc trưng, tơi xốp.
Các chế phẩm ựều ựược bảo quản trong lọ kắn, có dán giấy xung quanh, bảo quản ở nhiệt ựộ thường phòng thắ nghiệm. Các loại thuốc ựược chế theo công thức trình bày ở bảng 4.1: Các chế phẩm thuốc.
Với mỗi loại thuốc chúng tôi ựều chế ựịnh mức 100g trước. Do sử dụng nguồn dược liệu tươi, lại ựược thu hái ựúng thời ựiểm nên 1kg thân, rễ thuốc cá chúng tôi thu ựược 150g cao ựặc, do ựó 10g thân, rễ thuốc cá tương ựương với 1,5g cao ựặc. Như vậy, với phương pháp chúng tôi ựã bào chế, các công thức thuốc mỡ, thuốc bột cùng nồng ựộ tuy ựược chế từ các dạng dược liệu khác nhau (cao thuốc và bột thuốc) nhưng vẫn ựảm bảo hàm lượng hoạt chất như nhau.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 37
Bảng 4.1: CÁC CHẾ PHẨM THUỐC
Hàm lượng thuốc cá Dạng thuốc
Cao thuốc (g) Bột thuốc (g)
Talc dược dụng (g) Vaselin (g) 10% 1,5 20,5 78 20% 3,0 32 65 Thuốc mỡ 30% 4,5 50,5 45 10% 10 90 20% 20 80 Thuốc bột 30% 30 70
Hình 5: Chế phẩm thuốc mỡ sau bào chế Hình 6: Bột thân, rễ thuốc cá
Với 2 dạng chế phẩm; 3 nồng ựộ chúng tôi tiến hành thử ựộc tắnh với ve bò trong phòng thắ nghiệm và thử nghiệm ựiều trị ngoài thực tế với bò có ve ký sinh.
Kết quả cụ thể như sau:
4.2. KIỂM TRA đỘC TÍNH CỦA CÁC DẠNG THUỐC CHẾ TỪ THÂN, RỄ THUỐC CÁ KHÔ VỚI VE BÒ THÂN, RỄ THUỐC CÁ KHÔ VỚI VE BÒ
Với mỗi dạng thuốc bào chế ựược, chúng tôi sử dụng 3 lô thắ nghiệm (mỗi lô gồm 2 ựĩa lồng). Các lô thắ nghiệm ựược bố trắ bôi thuốc và dược chất khác nhau:
Lô thứ nhất (I): bôi thuốc ở ựáy và xung quanh ựĩa lồng.
Lô thứ hai (II) - ựối chứng dương: ựổ nước sắc thuốc cá 100% vào ựĩa lồng. Ngâm ngập ve ở nước sắc 30 giây ựể ướt hết mình ve. Sau ựó ựặt
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 38 nghiêng ựĩa lồng, ve tự bò lên phần khô của ựĩa. Sau 24h, còn ve sống lặp lại thao tác trên.
Lô thứ ba (III): ựể 1g thuốc hay 1 thìa cafe thuốc ở giữa ựĩa lồng.
đồng thời bố trắ thêm một ựĩa lồng trống, không có gì ở trong (ựối chứng âm). Mỗi ựĩa lồng thả 10 ve.
Kết quả cụ thể như sau:
4.2.1. Kiểm tra ựộc tắnh của các dạng thuốc 10% chế từ thân, rễ thuốc cá khô
Sau một thời gian thắ nghiệm, với 2 dạng thuốc này, chúng tôi ựã thu ựược kết quả rất khả quan. Kết quả cụ thể ựược thể hiện qua bảng 4.2: Kết quả kiểm tra ựộc tắnh của các dạng thuốc 10% chế từ thân, rễ thuốc cá khô.
Qua bảng 4.2, chúng tôi thấy lô thắ nghiệm ựầu tiên có số lượng ve chết cao nhất, lô thứ hai có ve chết nhưng thấp hơn và lô thứ ba gần như không có ve chết. Còn lô ựối chứng với một ựĩa lồng (số 1) không có ve nào chết. Cụ thể như sau:
- Với lô thắ nghiệm thứ nhất:
Xét thuốc mỡ 10%:
+ Bôi thuốc lần thứ nhất:
Sau 6h ựầu ựã có trung bình 1,5 ve chết (trong tổng số 10 ve thắ nghiệm) chiếm 15%, trong ựó ựĩa lồng thứ nhất có tới 2 ve chết.
Tại thời ựiểm 12h sau bôi thuốc lần 1: số ve thắ nghiệm bị chết tăng cao, ựĩa lồng thứ 1 có tới 3 ve chết. Số ve chết trung bình là 2,5 ve chiếm 25% số ựộng vật thắ nghiệm. đây cũng là thời ựiểm có số ve chết cao nhất trong thời gian thắ nghiệm. điều ựó chứng tỏ ở thời ựiểm này, lượng hoạt chất trong thuốc mỡ ựược giải phóng ra nhiều nhất.
Tại thời ựiểm 24h: số ựộng vật thắ nghiệm bị chết tuy ựã giảm so với thời ựiểm 12h song vẫn ựạt tỉ lệ phần trăm so với tổng số khá cao (20%).
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 39
Bảng 4.2: KẾT QUẢ KIỂM TRA đỘC TÍNH CỦA CÁC DẠNG THUỐC 10% CHẾ TỪ THÂN, RỄ THUỐC CÁ KHÔ
Số lượng ve chết cộng dồn sau các lần bôi thuốc (con)
Lần 1 Lần 2 Lần 3 Lô thắ nghiệm đĩa lồng Số lượng ve 6h 12h 24h Cộng dồn 30h 36h 48h Cộng dồn 60h Cộng dồn 1 10 2 3 1 6 2 1 1 10 2 10 1 2 3 6 1 2 1 10 Thuốc mỡ TB 10 1,5 2,5 2,0 6,0 1,5 1,5 1,0 10,0 1 10 1 2 2 5 2 1 1 9 1 10 2 10 1 1 2 4 2 1 1 8 2 10 I Thuốc bột TB 10 1,0 1,5 2,0 4,5 2,0 1,0 1,0 8,5 1,5 10,0 1 10 3 1 4 3 7 1 8 2 10 2 1 3 2 5 3 8 II TB 10 2,5 1,0 3,5 2,5 6,0 2,0 8,0 1 10 0 0 0 0 0 1 0 1 0 1 2 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Thuốc mỡ TB 10 0 0 0 0 0 0,5 0 0,5 0 0,5 1 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 III Thuốc bột TB 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 đC 1 10 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 40
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 41 Như vậy, sau lần bôi thuốc thứ nhất, tổng số ve thắ nghiệm trung bình bị chết là 6,0 ve tương ựương với 60% số ve thắ nghiệm. Có nghĩa là thuốc mỡ 10% có ựộc tắnh khá mạnh với ve, ựến thời ựiểm này trung bình chỉ còn lại 4 ve thắ nghiệm.
+ Tiếp tục bôi thuốc lần hai:
Tại thời ựiểm 30h: trung bình có 1,5 ve chết chiếm 15% số ựộng vật thắ nghiệm ban ựầu và ựạt tỉ lệ 1,5/4 so với tổng số ve còn lại.
Tại thời ựiểm 36h: trung bình cũng có 1,5 ve chết. Số ve còn lại chết hết vào thời ựiểm 48h.
Xét thắ nghiệm với thuốc bột 10%: với cách theo dõi tương tự như với thuốc mỡ, chúng tôi cũng nhận thấy, trung bình sau 1 lần bôi thuốc có 4,5 ve bị chết chiếm 45% số ve thắ nghiệm.
Theo dõi kết quả sau lần bôi thuốc thứ 2, số ve thắ nghiệm bị chết cũng ựạt tỉ lệ cao, trung bình có thêm 4,0 ve chết, chiếm tỉ lệ 4,0/5,5 số ve còn lại. Kết quả này có ựược theo chúng tôi nghĩ là do tác dụng cộng gộp của lần bôi thuốc thứ nhất và thứ hai. Tuy nhiên sau 48h, với lô thắ nghiệm thuốc bột 10% vẫn còn ve sống (ựĩa lồng 1 còn 1 ve sống, ựĩa lồng 2 còn 2 ve sống). Số ve này bị chết hết tại thời ựiểm 60h sau lần bôi thuốc thứ 3.
Như vậy với thuốc bột 10% phải cần 3 lần bôi thuốc mới tiêu diệt hết 100% số ve thắ nghiệm.
- Với lô thắ nghiệm thứ hai:
+ Trong 24h ựầu sau khi tiếp xúc với nước sắc:
Tại thời ựiểm 6h: có trung bình 2,5 ve thắ nghiệm bị chết trong ựó ựĩa lồng số 1 có 3 ve chết, ựĩa lồng số 2 có 2 ve chết.
Tại thời ựiểm 12h: số ve chết giảm xuống: ựĩa lồng 1 và 2 ựều có 1 ve chết. Thời ựiểm 24h: không thấy có ve chết.
Như vậy là sau 24h theo dõi thấy có trung bình 3,5 ve thắ nghiệm bị chết.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 42 + Sau khi ựược tiếp xúc với nước sắc lần 2 (ngâm lại những ve còn sống 30 giây trong nước sắc):
Theo dõi chỉ thấy có ve chết trong 6h ựầu (nghĩa là trong khoảng thời gian từ 24h ựến 30h lấy mốc là khi bắt ựầu tiến hành thắ nghiệm). Cụ thể tại thời ựiểm 30h có trung bình 2,5 ve chết trong ựó ựĩa lồng số 1 có số ve chết cao hơn là 3 ve, ựĩa số 2 có 2 ve chết.
Nhận thấy, ve thắ nghiệm chỉ bị chết trong khoảng thời gian ựầu sau khi cho ve tiếp xúc với nước sắc thuốc cá: 0 Ờ 12h. Sáu giờ ựầu sau khi ựược nhúng vào nước sắc, lượng ve chết khá cao (2 Ờ 3 ve). Có thể do thuốc sử dụng ở ựây là nước sắc thuốc cá 100% có hàm lượng hoạt chất cao, ựộc tắnh mạnh. Song thời gian sau (6 Ờ 12h), lượng ve chết lại giảm xuống ựặc biệt sau 12h tiếp xúc không thấy có ve chết nữa. Nguyên nhân là bởi nước sắc thuốc cá chỉ ựược giữ lại một ắt trên mình ve. Lượng thuốc này phát huy tác dụng gây chết một số ve nhưng thời gian sau, nó khô dần ựi, bị phân huỷ ở ngoại cảnh, dẫn tới ve không bị ảnh hưởng của thuốc và không chết. Nếu như với lượng thuốc trên, ta hoà tan nó vào trong tá dược, nó sẽ ắt chịu ảnh hưởng của ngoại cảnh hơn và nhờ tá dược mà ựược giữ lại trên mình ve, từ ựó dần dần thấm qua lớp kitin tác ựộng ựến hô hấp của ve.
- Với lô thắ nghiệm thứ ba:
Sau 60h theo dõi, chỉ thấy 1 ve ở ựĩa lồng số 1 (lô thuốc mỡ) chết tại thời ựiểm 36h. Như vậy ở thời ựiểm này cũng có trung bình 0,5 ve chết ựạt 5% số ựộng vật thắ nghiệm.
Lô thuốc bột không thấy ve nào chết. - Với lô ựối chứng: không có ve nào chết.
Nhận xét:
Qua phân tắch bảng, ta thấy, lượng ve bị chết trong suốt thời gian thắ nghiệm giảm dần từ lô 1 ựến lô 2, sau ựó ựến lô 3 và ựối chứng. Như vậy là thuốc mỡ, thuốc bột 10% có ựộc tắnh khá cao với ve bò. Với thuốc mỡ, sau
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 43 48h thắ nghiệm, toàn bố số ve trong các ựĩa lồng ở lô I ựã chết hoàn toàn (trong ựó sau một lần bôi thuốc ựã giết chết 60% số ựộng vật thắ nghiệm). Thuốc bột thì cần 60h mới tiêu diệt hết ve thắ nghiệm. Tuy nhiên, ựộc tắnh của thuốc chỉ ựược phát huy khi ve tiếp xúc với thuốc. điều này giải thắch tại sao ở lô thắ nghiệm thứ ba số ve thắ nghiệm lại chết ắt như vậy: với lô thuốc bột, không có ve nào chết, với lô thuốc mỡ: sau 60h bôi thuốc chỉ có 5,0% ve chết. đó là do ve bò ở xung quanh thuốc, không hề ựược tiếp xúc với thuốc (ve chết có thể do những nguyên nhân khác). Còn ở lô thắ nghiệm thứ hai, ve ựược tiếp xúc với thuốc (nước sắc 100%) nhưng chỉ trong một thời gian ngắn. Do thuốc ở dạng dung dịch lại không ựược phối hợp với chất mang, dược chất ựã không ựược giữ lại lâu và thấm sâu vào trong cơ thể ve như ựối với dạng thuốc mỡ hay thuốc bột. Chắnh vì vậy, lượng ve chết trong cùng khoảng thời gian thắ nghiệm (60h) có thấp hơn so với lô ựầu tiên (chết 80% số ve trong khi lô 1 có tới 100% ve thắ nghiệm bị giết tại cùng thời ựiểm với thuốc bột và 100% số ựộng vật bị giết hoàn toàn trước ựó 12h với thuốc mỡ). Kết luận lại chúng tôi rút ra rằng ve bị chết là do tiếp xúc với thuốc chứ hoàn toàn không phải do dược liệu khuyếch tán làm ức chế hô hấp nên ve bị chết.
Với cách bố trắ thắ nghiệm như trên, chúng tôi không chỉ hiểu ựược cách thức tác dụng của từng dạng thuốc mà còn so sánh ựược ựộc tắnh của chúng với nhau. So với thuốc bột và nước sắc thuốc cá, thuốc mỡ có ựộc tắnh mạnh hơn hẳn. Có thể là do cách bào chế và sử dụng tá dược khác nhau ở 2 dạng thuốc: thuốc bột và thuốc mỡ. Hiện tượng này chúng tôi sẽ tiếp tục theo dõi trong những thắ nghiệm tiếp theo.
Cùng với việc kiểm tra số lượng ve chết tại các thời ựiểm, chúng tôi còn quan sát trạng thái của ve khi tiếp xúc với thuốc: nhận thấy các biểu hiện về hoạt ựộng của chúng giảm dần sau ựó yếu rồi chết chứ không có biểu hiện bị kắch thắch, giãy dụa như sử dụng các dạng thuốc khác (dịch chiết củ ựậu, thuốc lào,Ầ).
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ 44
4.2.2. Kiểm tra ựộc tắnh của các dạng thuốc 20% chế từ thân, rễ thuốc cá khô
để xem thuốc mỡ, thuốc bột 20% có ựộc tắnh với ve bò hay không, chúng tôi tiến hành thắ nghiệm thứ 2 với cách bố trắ tương tự thắ nghiệm ở