- Raillietina cesticillus: ñầ u sán thường to, chắc khoẻ, và bám sâu vào lớp màng nhầy của tá tràng hoặc không tràng, hồi tràng của gia cầm.
3. ðỊA ðIỂM, ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.5.1 Phương pháp nghiên cứu
Thực hiện nghiên cứu ựề tài, chúng tôi sử dụng phương pháp nghiên cứu thực nghiệm và quan sát thực ựịa, sử dụng phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên ựơn giản và phương pháp lấy mẫu chùm [20].
điều tra tỷ lệ nhiễm giun, sán ựường tiêu hoá gà theo phương pháp nghiên cứu cắt ngang [20].
Số lượng mẫu nghiên cứu ựược lấy theo công thức lấy mẫu ựiều tra dịch tễ học P(1-P) n = (1,96)2 d2 Trong ựó: n là số mẫu cần nghiên cứu
P: tỷ lệ nhiễm ước ựoán
1,96 là giá trị của hệ số giới hạn tin cậy tương ứng với ựộ
tin cậy là 95%
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ39
Với ước ựoán tỷ lệ nhiễm giun, sán ựường tiêu hoá của gà ở Văn Lâm là 40%, với ựộ chắnh xác mong muốn trong các phương pháp mổ khám và xét nghiệm phân là 95%. Như vậy số lượng mẫu cần kiểm tra cho mỗi phương pháp tắnh theo công thức trên là 369 mẫu.
Sử dụng các phương pháp xét nghiệm ựang ựược áp dụng tại các phòng thắ nghiệm ký sinh trùng trường đại học Nông nghiệp, các viện nghiên cứu về
ký sinh trùng trong nước.
- Thu thập giun trưởng thành qua phương pháp mổ khám toàn diện
ựường tiêu hoá gà của Skjabin, K.I. [11]
- định loại giun, sán ựường tiêu hoá của gà theo khoá ựịnh loại của Phan Thế Việt, Nguyễn Thị Kỳ, Nguyễn Thị Lê, (1977) [28].
- Lấy mẫu phân theo phương pháp lấy mẫu ngẫu nhiên, ựơn giản
+ Phân gà ựược lấy vào buổi sáng, lấy khoảng 3 - 5g phân cho vào túi nilon ựã chuẩn bị sẵn, ghi ựầy ựủ các thông tin cần thiết.
Mẫu phân thu thập xong phải ựược kiểm tra ngay, nếu ựể lâu thì phải bảo quản bằng cách cho một vài giọt Formalin 1%, ựểở nhiệt ựộ 4 - 60C.
- Xét nghiệm trứng giun, sán bằng phương pháp fủllerborn [11].
- đo, vẽ ựịnh loại trứng giun, sán ựường tiêu hoá của gà dựa vào các nguồn tài liệu của Trịnh Văn Thịnh, (1963) [24], Nguyễn Thị Lê và cộng sự, 1996, [15].
- điều tra tỷ lệ và cường ựộ nhiễm giun, sán ựường tiêu hoá của gà qua mổ khám và xét nghiệm phân gà bằng phương pháp nghiên cứu cắt ngang [20].
đánh giá cường ựộ nhiễm trứng giun, sán trong 1g phân gà bằng phương pháp ựịnh lượng Mc. Master [11].
+ Tiến hành phương pháp: Cho 58ml dung dịch nước muối NaCl bão hoà 60 vạch. Dùng panh lấy phân của gà thả từ từ vào bình tới khi dung dịch dâng tới vạch 60 thì dừng lại. đưa vào bình 10 - 20 viên bi thuỷ tinh, lắc
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ40
mạnh, dừng ựột ngột, dùng pipet hút và bơm vào hai ô của buồng ựếm. đếm trứng ở hai buồng ựếm dưới kắnh hiển vi quang học.
Số trứng trong 1g phân ựược tắnh theo công thức:
a A=
2
x 200
Trong ựó: A là số trứng trong 1 g phân
a là tổng số trứng ựếm ựược trong hai buồng ựếm.
- đánh giá cường ựộ nhiễm giun, sán trên một gà thông qua số
lượng giun, sán ắt nhất (min) và số lượng giun, sán nhiều nhất (max) trên một cá thể gà [11].
- Phân chia tuổi gà dựa theo tuổi trưởng thành của gà.
- Thu thập trứng Ascaridia galli thông qua mổ tử cung giun trưởng thành. + Phương pháp mổ tử cung giun trưởng thành
Chọn những con giun cái trưởng thành, xác ựịnh vị trắ lỗ sinh dục cái của giun, dùng kéo tiểu phẫu cắt ngang thân giun, giữ lại nửa sau thân giun.
đưa nửa sau giun vào ựĩa petri chứa 5ml nước cất. Cắt nửa sau giun thành những ựoạn nhỏ. Dùng ựũa thuỷ tinh ấn nhẹ nhàng trên các ựoạn thân giun ựã cắt, khi ựó trứng trong tử cung giun sẽ thoát ra khỏi tử cung. Lọc qua lưới lọc dầy, nước lọc ựược mang ly tâm ở tốc ựộ 2000 vòng trong 2 phút. đưa cặn ly tâm ra ựĩa petri có chứa sẵn nước cất, ựếm số lượng trứng.
đếm trứng bằng phương pháp tự tạo + Thiết kế buồng ựếm
Dùng phiến kắnh mỏng, sạch, dùng thước và dao petri kẻ 3 hàng ngang và 3 hàng dọc tạo thành buồng ựếm có 9 ô, soi dưới kắnh hiển vi kiểm tra ựộ
rõ nét của các ô. Dùng ống hút, hút trứng bơm lên buồng ựếm một số giọt nhất ựịnh, dùng lamem ựậy lên buồng ựếm. đếm trứng trong các ô theo nguyên tắc ựếm từ phải sang trái, từ trên xuống dưới.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ41
- đo kắch thước trứng và ấu trùng giun ựũa gà bằng phương pháp trắc vi thị kắnh [21].
- Theo dõi sự phát triển của trứng giun trong các môi trường nuôi thông qua quan sát sự phát triển của tế bào phôi trứng dưới kắnh hiển vi quang học.
- đo pH của nước và dung dịch bằng máy Inolap.
Theo dõi nhiệt ựộ phòng thắ nghiệm bằng nhiệt kế bách phân.
- định loại ấu trùng Ascaridia galli dựa theo nguồn tài liệu của Trịnh Văn Thịnh, 1963 [24].
- Gây nhiễm ấu trùng Ascaridia galli cho gà bằng phương pháp thực nghiệm trong phòng thắ nghiệm [20].
- Xác ựịnh thời gian hoàn thành vòng ựời của Ascaridia galli ở gà dựa vào lần thải trứng ựầu tiên qua phân gà kể từ ngày gây nhiễm [11].
- Xác ựịnh triệu chứng lâm sàng gà nhiễm Ascaridia galli thông qua quan sát những biến ựổi về thể trạng, vận ựộng, ăn, uống, khả năng sinh trưởng, trạng thái thần kinh, trạng thái phân [18].
- Xác ựịnh trọng lượng gà bằng phương pháp cân trọng lượng thông thường.
- Xác ựịnh bệnh tắch của gà do Ascaridia galli gây ra thông qua mổ
khám gà gây nhiễm, quan sát những biến ựổi bệnh lý ựại thể tại các cơ quan mà ấu trùng di hành qua và giun trưởng thành ký sinh.
- Xác ựịnh bệnh tắch vi thể nơi giun ký sinh bằng phương pháp làm tiêu bản vi thể.
- Xác ựịnh hiệu lực của thuốc tẩy trừ Ascaridia galli dựa vào số lượng giun bịựào thải và số lượng giun còn lại trong gà.
đề xuất các biện pháp phòng bệnh giun, sán ựường tiêu hoá của gà dựa trên kết quả nghiên cứu của ựề tài, ựồng thời có kế thừa kết quả nghiên cứu của các tác giảựi trước.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ42