ủịa bàn huyện Việt Yờn tỉnh Bắc Giang.
+ Tỷ lệ mắc bệnh trờn cỏc lứa tuổi
+ Tỷ lệ mắc bệnh theo phương thức chăn nuụi + Tỷ lệ mắc bệnh theo mựa
3.3.2. Một số biểu hiện triệu chứng của lợn bệnh như: ho, hắt hơi, nước mũi, khú thở và õm phổi bệnh lý.
3.3.3. Cỏc chỉ tiờu lõm sàng:
+ Tần số hụ hấp (lần/phỳt) + Thõn nhiệt (0C)
3.3.4. Một số chỉ tiờu sinh lý mỏu:
- Cỏc chỉ tiờu về hệ hồng cầu:
+ Số lượng hồng cầu (triệu/mm3) + Hàm lượng Hemoglobin (g%) + Tỷ khối huyết cầu (%)
+ Nồng ủộ huyết sắc tố trung bỡnh của hồng cầu (g%) + Lượng huyết sắc tố trung bỡnh của hồng cầu (ηg) + Chỉ số màu của mỏu (j) + Thể tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm3) + Chỉ số trũn của hồng cầu (Is) + Bề dày của hồng cầu (àm) + Diện tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm2) + Sức khỏng của hồng cầu (%) + Tốc ủộ lắng mỏu (mm/phỳt) + Thời gian ủụng mỏu (phỳt) - Cỏc chỉ tiờu về hệ bạch cầu: + Số lượng bạch cầu (nghỡn/mm3) + Cụng thức bạch cầu (%) + Hướng nhõn và thế mỏu
3.3.5. Một số chỉ tiờu sinh húa mỏu:
- Protein tổng số. - Cỏc tiểu phần Protein
- Hoạt ủộ của cỏc men GOT (Glutamat Oxaloaxetat Transaminaza) và GPT (Glutamat Pyruvat Transaminaza)
- ðộ dự trữ kiềm trong mỏu (g%) - Hàm lượng ủường huyết (mg%)
3.3.6. Một số chỉ tiờu về khả năng sản xuất ở lợn:
- Trờn lợn thịt (ủỏnh giỏ khả năng sinh trưởng): + ðộ sinh trưởng tớch luỹ (kg)
+ ðộ sinh trưởng tuyệt ủối (kg/con/ngày) + ðộ sinh trưởng tương ủối (%)
+ Hệ số sinh trưởng (%) 3.3.7. Tổn thương bệnh lý ở phổi lợn bị mắc bệnh suyễn: - Tổn thương bệnh lý ủại thể - Tổn thương bệnh lý vi thể 3.4. PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU. 3.4.1. Xỏc ủịnh lợn bệnh: + Dựa vào triệu chứng lõm sàng và bệnh tớch
Trước tiờn chỳng tụi chẩn ủoỏn dựa vào triệu chứng lõm sàng và bệnh tớch ủặc trưng.
Triệu chứng lõm sàng:
Chỳng tụi tiến hành quan sỏt bờn ngoài kết hợp với việc dựng nhiệt kế 420C ủể xỏc ủịnh thõn nhiệt của lợn. ðếm ủộng tỏc thở qua hừm bụng và quan sỏt thành bụng và thành ngực kết hợp với việc nghe vựng phổi ủể xỏc ủịnh tần số hụ hấp. Dựng ống nghe vựng tim, ủếm số lần tim ủập ủể xỏc ủịnh tần số tim ủập sau ủú ủối chứng với triệu chứng bệnh tớch của lợn bị bệnh Suyễn ủó ủược nghiờn cứu như:
- Sốt, kộm ăn, lụng xự, gầy yếu.
- Hắt hơi, ho khan, hay ho khi vận ủộng và ho vào lỳc trời lạnh, sỏng sớm.
- Thở khú, thở khũ khố, thở thể bụng. Bệnh tớch:
- Bệnh tớch tập trung ở bộ mỏy hụ hấp và hạch phổi: Viờm phổi thuỳ, từ thuỳ tim sang thuỳ ủỉnh, từ thuỳ ủỉnh sang thuỳ hoành, thường viờm ở phần rỡa thấp của phổi. Phổi xuất hiện những chấm ủỏ hoặc xỏm bằng hạt ủậu xanh, to dần rồi tập trung thành từng vựng rộng lớn.
màu mận chớn, mặt phổi bằng lỏng, bờn trong cú chứa chất keo nờn gọi là viờm phổi kớnh.
- Khi bị viờm nặng phổi cứng, ủặc lại như bị gan hoỏ lỳc này khi cắt phổi chỉ cũn một ớt dịch trắng xỏm lẫn bọt. Phổi bị nhục hoỏ, ủục màu tro, chắc khi biểu hiện gan hoỏ, lỳc này cắt miếng phổi thả xuống nước thấy phổi chỡm.
- Khi ghộp với Streptcoccus thỡ phổi cú mủ.
+ Dựng kỹ thuật Elisa.
Sau khi cú những căn cứ về triệu chứng và bệnh tớch chỳng tụi tiến hành lấy mẫu mỏu rồi làm phản ứng Elisa, (phản ứng miễn dịch ủỏnh dấu enzim).
- Nguyờn lý của phản ứng: Dựng khỏng thể hoặc khỏng khỏng thể gắn enzim rồi cho kết hợp trực tiếp với khỏng nguyờn, sau ủú cho cơ chất vào, cơ chất sẽ kết hợp với enzim ủó gắn, tạo mầu.
Thực chất phản ứng này giống phản ứng miễn dịch huỳnh quang, chỉ khỏc là khụng dựng thuốc nhuộm ủể nhuộm khỏng thể hoặc khỏng khỏng thể mà dựng một số enzim cú hoạt tớnh cao và sau ủú cho cơ chất tương ứng với enzym vào, enzym phõn hủy cơ chất tạo nờn màu và cho soi màu trong quang phổ kế sẽủịnh lượng ủược mức ủộ phản ứng.
Cú hai loại phản ứng Elisa: Phản ứng trực tiếp và giỏn tiếp.
+ Phản ứng Elisa trực tiếp dựng ủể phỏt hiện khỏng nguyờn.
Bước 1. Cố ủịnh khỏng thể ủặc hiệu lờn phiến chất dẻo, rửa nước ủể loại bỏ khỏng thể khụng gắn.
Bước 2. Cho huyễn dịch bệnh phẩm ủó chiết xuất thành dung dịch hoà tan (khỏng nguyờn nghi). Nếu cú khỏng nguyờn tương ứng chỳng sẽ gắn với khỏng thểủặc hiệu, sự kết hợp sẽ sảy ra, rửa nước ủể loại bỏ phần thừa.
Bước 3. Cho khỏng thểủó gắn enzim vào. Nếu trong bước 2 ủó cú xảy ra kết hợp giữa khỏng nguyờn với khỏng thể ủỏnh dấu bằng enzym, bởi vỡ khỏng nguyờn này là loại phõn tử cú nhiều quyết ủịnh khỏng nguyờn (ớt nhất là hai quyết ủịnh khỏng nguyờn), một quyết ủịnh ủó ủược gắn với khỏng thể ủặc hiệu trong bước hai, quyết ủịnh cũn lại sẽ gắn với khỏng khỏng thể ủó ủược ủỏnh dấu enzym. Rửa nước ủể loại bỏ khỏng thểủỏnh dấu thừa. Sự kết hợp thỡ bước 3 này sẽ xảy ra sự kết hợp giữa khỏng nguyờn và khỏng thể dỏnh
dấu enzym.
Bước 4. Tiếp tục cho thờm vào ủú cơ chất tương ứng với enzym. ðỏnh giỏ kết quả phản ứng.
- Nếu cú màu tức là khỏng nguyờn tương ứng, phản ứng dương tớnh, so màu trong quang phổ kếủểủịnh lượng mức ủộ của phản ứng.
- Nếu khụng cú màu, tức khỏng nguyờn khụng tương ứng, cho nờn ngay từ bước 2 khỏng nguyờn bị trụi ủi khi rửa nước, do ủú mà khụng cú sự kết hợp khỏng thể – khỏng nguyờn – khỏng khỏng thể, phản ứng õm tớnh.
+ Phản ứng Elisa giỏn tiếp: dựng ủể phỏt hiện khỏng thể
- Bước 1: gắn khỏng nguyờn ủó biết lờn tiờu bản phiến chất dẻo, rửa nước ủể loại bỏ khỏng nguyờn thừa.
- Bước 2: cho huyết thanh cần chẩn ủoỏn lờn (cú thể cú hay khụng cú khỏng thể cần tỡm). Nếu cú khỏng thể tương ứng với khỏng nguyờn chuẩn thỡ sẽ cú kết hợp khỏng nguyờn – khỏng thể, rửa nước ủể loại bỏ cỏc chất thừa.
- Bước 3: cho khỏng khỏng thể tương ứng ủó gắn enzym vào. Nếu ủó cú kết hợp khỏng nguyờn khỏng thể rồi, thỡ tiếp tục sẽ cú kết hợp khỏng nguyờn – khỏng thể – khỏng khỏng thể (cú gắn enzym) và khi rửa nước sẽ khụng bị trụi ủi.
- Bước 4: cho cơ chất tương ứng với enzym vào, enzym sẽ phõn hủy cơ chất thành sản phẩm cú màu, phản ứng dương tớnh, dựng quang phổ kế ủể ủịnh lượng phản ứng.
Trong trường hợp huyết thanh khụng cú khỏng thể tương ứng với khỏng nguyờn, sẽ khụng xảy ra kết hợp khỏng nguyờn – khỏng thểở bước 2, do ủú mà khi cho khỏng thể vào, cũng khụng cú kết hợp nờn rửa nước bị trụi ủi, và khi cho cơ chất vào thỡ khụng cú enzym ủể phõn hủy nờn khụng cú màu sắc, phản ứng õm tớnh.
* Theo dừi tỷ lệ mắc bệnh viờm phổi ở lợn tại cỏc cở sở chăn nuụi lợn trờn ủịa bàn huyện Việt yờn, tỉnh Bắc Giang:
3.4.2. Những biến ủổi về một số chỉ tiờu sinh lý, sinh húa của mỏu lợn khỏe và lợn bị bệnh suyễn:
* Một số chỉ tiờu lõm sàng:
+ T n s hụ h p (l n/phỳt): m t n s hụ h p b ng cỏch quan sỏt nh p
Số con mắc bệnh
Tỷ lệ mắc bệnh = x 100
thở ở thành ngực, ủếm 3 lần sau ủú lấy trung bỡnh.
+ Thõn nhiệt (0C): Dựng nhiệt kế 420C lấy thõn nhiệt ở trực tràng, ủo 3 lần sau ủú tớnh trung bỡnh.
+ Tần số tim (lần/phỳt): dựng ống nghe ủếm số lần tim ủập/phỳt, ủếm 3 lần sau ủú tớnh trung bỡnh.
* Một số chỉ tiờu sinh lý mỏu:
- Tốc ủộ lắng mỏu (mm/phỳt)
Dựng phương phỏp của Panchenkop và Warmen (1926).
- Nguyờn tắc: dựng mỏu cú pha chất chống ủụng vào ống Panchenkop. Sau một thời gian mỏu ủược chia làm 2 phần. Hồng cầu cú tỷ trọng lớn nờn lắng xuống dưới, phần trờn là huyết tương.
- Dụng cụ, nguyờn liệu: ống và giỏ Panchenkop, dung dịch Citrat natri 5%, mỏu lợn, ủồng hồ.
- Tiến hành: Dựng ống hỳt dung dịch citrat natri 5% ủến vạch P, thổi vào ống nghiệm sạch, dựng ống hỳt mỏu ủến vạch K, lại thổi vào ống nghiệm cú Citrat natri 5% trộn ủều làm 2 lần. Mỏu trong dung dịch lỳc này cú tỷ lệ 1 phần dung dịch Citrat natri 5% và 4 phần mỏu. Lấy ống nghiệm Panchenkop hỳt mỏu ở ống nghiệm ủến vạch K rồi cắm vào gốc Panchenkop, sau 15, 30, 45, 60 phỳt ủọc kết quả. Tốc ủộ lắng của hồng cầu là tỷ số giữa chiều cao của cột mỏu ủọc ủược/thời gian tại ủiểm ủọc.
- Thời gian ủụng mỏu (phỳt)
Theo Panchenkop (1949), dựng 1 phiến kớnh khụ, sạch, khụng mỡ rồi nhỏ lờn 1 giọt mỏu tươi, ghi thời gian. Sau ủú cứ 30 giõy vạch lờn giọt mỏu ủú 1 lần, nếu xuất hiện sợi tơ nhỏ là thời ủiểm dừng.
- Cỏc chỉ tiờu về hệ hồng cầu:
+ Số lượng hồng cầu (triệu/mm3 mỏu) + Hàm lượng Hemoglobin (g%) + Tỷ khối huyết cầu (%)
Cỏc chỉ tiờu này ủược xỏc ủịnh bằng mỏy Screen 18
+ Nồng ủộ huyết sắc tố trung bỡnh của hồng cầu (g%): Là lượng huyết s c t cú trong 100mm3 h ng c u ó nộn ch t, c xỏc nh b ng ph ng
phỏp Wintrobe (1929; 1932) và Bạch Quốc Tuyờn (1978).
+ Lượng huyết sắc tố trung bỡnh của hồng cầu (ηg): Là lượng huyết sắc tố bỡnh quõn trong mỗi một hồng cầu. Theo phương phỏp Wintrobe (1929) và Bạch Quốc Tuyờn (1978).
+ Chỉ số màu của mỏu (j):
Theo Hayem (1905), Kudrasep (1969).
+ Thể tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm3)
+ Chỉ số trũn của hồng cầu (Is): Là tỷ lệ giữa ủường kớnh trung bỡnh và bề dày của hồng cầu:
+ Bề dày của hồng cầu (àm)
+ Diện tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm2) Theo Ponder (1927) và Wintrobe (1932)
(g%) Hb x 100
NðHSTTB h/c =
Tỷ khối huyết cầu
(g%) Hb x 10
LHSTTB h/c =
Số hồng cầu (triệu/mm3mỏu)
Lượng huyết sắc tố của lợn khỏm Lượng Hb tiờu chuẩn j = :
Số hồng cầu của lợn khỏm Số lượng hồng cầu tiờu chuẩn
Tỷ khối huyết cầu (Hematocrit) x 10 VTB h/c =
Số hồng cầu (triệu/mm3mỏu)
ðường kớnh hồng cầu (àm) Is = Bề dày hồng cầu(àm) VTB h/c d = π x (ðường kớnh bỡnh quõn hồng cầu)2
D V D c STBh 4 2 / 2 + = π Ghi chỳ: - STB h/c: Diện tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm2) - D:ðường kớnh bỡnh quõn của hồng cầu (àm) - V: Thể tớch trung bỡnh của hồng cầu (àm3), - π =3,14 + Sức bền của hồng cầu (SKHC)
Theo phương phỏp Hambuger và Part (1947).
SKHC là sức khỏng của màng hồng cầu ở nồng ủộ muối NaCl (< 0,9%), khi hồng cầu bắt ủầu vỡ ủược gọi là sức khỏng tối thiểu của hồng cầu (Minimal resistance) và ở nồng ủộ muối làm cho toàn bộ hệ hồng cầu vỡ gọi là sức khỏng tối ủa của hồng cầu (Maximal resistance).
- Dụng cụ, nguyờn liệu: 10 ống nghiệm khụ sạch + giỏ ủựng ống nghiệm, dung dịch muối NaCl 1%, nước cất, pipet hoặc Seringe hỳt, mỏu lợn ủược chớch ở tĩnh mạch tai cú chất chống ủụng, mỏy li tõm.
- Phương phỏp ủo:
Dựng nước muối NaCl 1% và pha loóng với cỏc nồng ủộ khỏc nhau theo bảng sau: Cỏc ống 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Lượng NaCl 1% (ml) 1,8 2,1 2,4 2,7 3,0 3,3 3,6 3,9 4,2 4,5 Lượng nước cất (ml) 3,2 2,9 2,6 2,3 2,0 1,7 1,4 1,1 0,8 0,5 Nồng ủộ NaCl (%) 0,36 0,42 0,48 0,54 0,60 0,66 0,72 0,78 0,84 0,90 Dựng ống hỳt cho vào mỗi ống trờn 1 giọt mỏu ủó cú chất chống ủụng. Trộn ủều, ủể 1,5 – 2 phỳt rồi ly tõm.
Kết quả: ở ống bắt ủầu vỡ, dung dịch cú màu vàng, ớt hồng cầu lắng ở ủỏy. Ống mỏu vỡ hoàn toàn ủầu tiờn, dung dịch trong suốt màu ủỏ, khụng cú hồng cầu lắng ởủỏy.
+ Số lượng bạch cầu (nghỡn/mm3)
Số lượng bạch cầu ủược xỏc ủịnh bằng mỏy Screen 18 + Cụng thức bạch cầu (%)
Theo Magregor (1940) và Nicolaiep (1956) trờn tiờu bản mỏu nhuộm HE (Hematein Eosin) là tỷ lệ phần trăm giữa cỏc loại bạch cầu.
- Dụng cụ, húa chất: phiến kớnh, Lamelle, kớnh hiển vi cú vật kớnh dầu, mỏu lợn, cồn cốủịnh, thuốc nhuộm HE.
- Quan sỏt: Sau khi ủó nhuộm xong tiờu bản ủể phiến kớnh khụ, ủem quan sỏt dưới kớnh hiển vi với vật kớnh dầu. ðếm từng loại bạch cầu, ghi lại, dịch chuyển theo hỡnh ‘‘chữ chi’’. ðếm ủủ 200 cỏi rồi tớnh tỷ lệ % từng loại.
+ Thế của mỏu:
Theo Schilling (1949)
+ Hướng nhõn:
Theo Schilling (1949)
* Một số chỉ tiờu sinh húa mỏu:
- Protein tổng số. - Cỏc tiểu phần Protein
- Hoạt ủộ của cỏc men GOT (Glutamate Oxaloaxetate Transaminase) và GPT (Glutamate Pyruvate Transaminase)
- ðộ dự trữ kiềm trong mỏu (mg%) - Hàm lượng ủường huyết: (mg%)
Cỏc chỉ tiờu này chỳng tụi dựng mỏy Screen 18 ủể phõn tớch.
3.4.3. Một số chỉ tiờu về khả năng sản xuất ở lợn
- ðỏnh giỏ khả năng sinh trưởng của lợn thịt sau khi bị bệnh khỏi so với lợn khoẻ mạnh. Chỳng tụi tiến hành bố trớ thớ nghiệm ủược thể hiện qua bảng dưới ủõy: Lõm ba cầu Thế mỏu = Bạch cầu trung tớnh Bạch cầu trung tớnh nhõn ấu + Bạch cầu trung tớnh nhõn gậy Hướng nhõn = Bạch cầu trung tớnh nhõn ủốt
Lợn khoẻ Lợn mắc bệnh suyễn ðợt thớ nghiệm Số lượng (con) Tð1 Tð2 Tð3 Tð4 Tð5 Tð1 Tð2 Tð3 Tð4 Tð5 ðợt I 15 ðợt II 15 ðợt III 15 ðợt IV 15 Tð: Cỏc thời ủiểm cõn tương ứng: + Tð1: Trước khi ủiều trị lợn bệnh + Tð2: Sau khi ủiều trị lợn bệnh + Tð3: Sau 1 thỏng (tớnh từ lỳc ủiều trị lợn bệnh) + Tð4: Sau 2 thỏng (tớnh từ lỳc ủiều trị lợn bệnh) + Tð5: Xuất chuồng ðểủỏnh giỏ, so sỏnh thỡ cõn ủồng thời lợn mắc bệnh và lợn khoẻ tại cỏc thời ủiểm tương ứng.
Chỳng tụi tiến hành theo dừi, cõn từng con rồi lấy giỏ trị trung bỡnh sau ủú ủỏnh giỏ cỏc chỉ tiờu sinh trưởng qua cỏc số liệu ủược nghi chộp cẩn thận và ủược tớnh toỏn bằng cỏc cụng thức sau:
+ ðộ sinh trưởng tớch lũy là khối lượng (kg) cỏc lần cõn. + ðộ sinh trưởng tuyệt ủối
V2 – V1 A =
T2 – T1
Trong ủú: A: là sinh trưởng tuyệt ủối (kg/con/ngày) V1: là khối lượng tớch luỹứng với thời ủiểm T1 V2: là khối lượng tớch luỹứng với thời ủiểm T2
+ ðộ sinh trưởng tương ủối (%) V2 – V1
R = .100 V
Hoặc
V2 – V1
R = .100 0,5(V1+V2)
Trong ủú: R: là tỷ lệ phần trăm sinh trưởng tương ủối V1: là khối lượng tớch luỹứng với thời ủiểm T1 V2: là khối lượng tớch luỹứng với thời ủiểm T2 + Hệ số sinh trưởng (%) V2 C (%) = .100 V1
3.4.4. Nghiờn cứu tổn thương bệnh lý ở phổi của lợn bị bệnh viờm phổi so với lợn khỏe mạnh với lợn khỏe mạnh
- Tổn thương vi thể: chỳng tụi tiến hành lấy tổ chức phổi làm tiờu bản theo dừi biến ủổi vi thể của phổi.
- Tổn thương ủại thể: chỳng tụi tiến hành mổ khỏm, quan sỏt quỏ trỡnh