1 VT Kho DTNN Vĩnh Tiên Ờ Hải Phòng 0/20 2 VT2 Kho DTNN Vĩnh Tiên Ờ Hải Phòng 0/
3.5.3.Phương pháp ựiều chế môi trường nhân tạo và phương pháp phân lập nấm hại hạt thóc
lập nấm hại hạt thóc
* Phương pháp ựiều chế môi trường nhân tạo
Các loại môi trường phân ly nuôi cấy nấm bao gồm: PGA, PCA, WA, Czapek Ờ Dox.
- Môi trường PGA: + Khoai tây : 200 gram + Glucose : 20 gram
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 17
+ Agar : 20 gram + Nước cất : 1000 ml Cách nấu:
Khoai tây rửa sạch, thái nhỏ cho vào cốc ựong ựun sôi với 1000 ml nước cất trong 30 phút, sau ựó lọc bằng vải mỏng qua phễu lấy nước trong sau ựó thêm Glucose, Agar và nước cất cho ựủ 1000ml. Tiếp tục ựun và khuấy ựều không ựể Agar vón cục, khi sủi lăn tăn ựem dung dịch ựổ vào bình tam giác, hộp petri (bình tam giác, hộp petri ựã ựược rử sạch và sấy khô ở 1800C trong 2 giờ), tiến hành hấp khử trùng ở nhiệt ựộ 120ỨC, 1,5 atm trong vòng 20 phút.
- Môi trường PCA: + Khoai tây : 100 gram + Cà rốt : 100 gram + Agar : 20 gram + Nước cất : 1000 ml Cách nấu:
Gọt vỏ và cắt khoai tây, cả rốt thành những mẫu nhỏ. Bỏ vào trong một cốc ựong có khoảng 200ml nước cất ựun sôi nhỏ lửa trong 30 phút. Lọc và cho thêm agar và nước cất cho ựủ 1lắt. Lắc ựều rồi ựem hấp vô trùng trong 20 phút ở nhiệt ựộ 121ỨC, 1.5atm.
- Môi trường WA: + Agar : 20 gram + Nước cất : 1000 ml Cách nấu:
đun nước cất nước cất rồi tiến hành cho Agar, dùng ựũa thủy tinh khuấy nhẹ cho tan hết. Sau ựó ựem hấp vô trùng và các thao tác tiếp theo như ựiều chế môi trường PGẠ
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦ. 18
+ Czapek Ờ Dox: 35 gram + Nước cất: 1000ml
đun sôi nước cất rồi tiến hành cho Czapek Ờ Dox, dùng ựũa thủy tinh khuấy nhẹ cho tan hết. Sau ựó tiến hành hấp vô trùng và các thao tác tiếp theo như ựiều chế môi trường PGẠ
* Phương pháp kiểm tra, xác ựịnh sự nhiễm nấm bệnh trên các mẫu hạt thóc bảo quản
Sau 7 ngày ựặt ẩm hạt, tiến hành theo dõi sự phát triển của nấm trên bề mặt hạt. Dựa vào ựặc ựiểm phát triển của tản nấm, màu sắc tản nấm ựể xác ựịnh mức ựộ nhiễm nấm trên các mẫu hạt. đồng thời kiểm tra, nghiên cứu giám ựịnh các loài nấm hại hạt thóc trên kắnh hiển vi soi nổi và kắnh hiển vi quang học. Dựa vào tài liệu phân loại nấm của Nguyễn Văn Tuất (1997) và tài liệu giám ựịnh nấm bệnh hạt giống của Viện nghiên cứu bệnh hạt giống đan Mạch (DGISP, 1998).
* Phương pháp phân lập nấm
Sau 7 ngày ựặt ẩm, tiến hành phân ly nuôi cấy các loài nấm ựã xác ựịnh trên môi trường nhân tạọ Sau khi nấm mọc, tiến hành cắt ựầu sợi nấm truyền sang các hộp Petri khác cho ựến khi thu ựược nguồn nấm thuần khiết. Quan sát ựặc ựiểm hình thái, màu sắc sợi nấm, tản nấm, cành bào tử, bào tử phân sinh,v.v.
Tiến hành nghiên cứu, giám ựịnh các loài nấm hại hạt thóc dựa theo tài liệu của Nguyễn Văn Tuất (1997) và tài liệu giám ựịnh nấm bệnh hạt giống của Viện nghiên cứu bệnh hạt giống đan Mạch (DGISP, 1998).