Bảng 2.1 Cỏc ủặc ủiểm quyết ủịnh tớnh sinh miễn dịch
2.11. Cỏc kỹ thuật chuẩn ủ oỏn
Chuẩn ủoỏn bệnh viờm gan do virut ở vịt con cú một số khú khăn vỡ bệnh xuất hiện ủột ngột và chấm dứt nhanh nờn bệnh thường bị giải thớch sai lầm là do thức ăn và do chuồng trại vệ sinh kộm. Trong bệnh Viờm gan vịt thường quan sỏt cú vi trựng gõy bờnh phú thương hàn và trực khuẩn E.coli và
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 41
người ta cho nú là nguyờn nhõn gõy chết. Khi chuẩn ủoỏn bệnh Viờm gan vịt do virut cần chỳ ý ủến những ủiểm sau:
+ Bệnh xuất hiện ủột ngột và diễn ra cấp tớnh.
+ Chỉ gõy tổn thương cho vịt con trước 2 thỏng tuổi, ủặc biệt ở vịt con 1-6 tuần tuổi.
+ Gan cú nhiều ủiểm xuất huyết, hoại tử màu vàng nhạt.
2.11.1. Chuẩn ủoỏn phõn biệt
để chuẩn ủoỏn phõn biệt với cỏc bệnh khỏc cần dựa vào cỏc ủặc ủiểm: dịch tễ, triệu chứng, bệnh tớch và kiểm tra virut.
- Chẩn ủoỏn phõn biệt với bệnh dịch tả vịt (Duck plague): Bệnh dịch tả
vịt xảy ra ở mọi lứa tuổi. Vịt cú triệu chứng sưng ủầu, ủau mắt, liệt cỏnh, liệt chõn, tiờu chảy phõn xanh, tốc ủộ vịt chết chậm hơn, vịt cú bệnh tớch viờm kết mạc mắt, xuất huyết dưới da, loột ủường tiờu húa như: Niờm mạc dạ dày, ruột. Virut dịch tả vịt rất mẫn cảm với chloroform và cú thể tỡm thấy tiểu thể bao hàm trong chẩn ủoỏn tổ chức học.
- Chẩn ủoỏn phõn biệt với bệnh Salmonellosis ở vịt: Bờnh xảy ra ở cả
vịt con, vịt giống. Vịt con ỉa chảy, phõn trắng, gan cú ủiểm hoại tử. Vịt giống bị viờm buồng trứng, trứng non teo, dị hỡnh, vịt giảm ủẻ, vỏ trứng mỏng, dễ
vỡ. Vịt con chưa tiờu hết lũng ủỏ, gan, lỏch, thận sưng, xung huyết bệnh cú thể chứa khỏi bằng khỏng sinh (Nguyễn Vĩnh Phước và cs, 1978) [10]. Trong phũng thớ nghiệm, vi khuẩn dễ dàng phõn lập ủược bằng một số mụi trường thụng thường: Mụi trường thạch mỏu, thạch thường.
- Chẩn ủoỏn phõn biệt với bệnh nhiễm ủộc Aflatoxin (Aflatoxicosis):
Bệnh cú triệu chứng gần giống bệnh Viờm gan vịt, biểu hiện bệnh tớch là gan sưng, cú màu nhợt nhạt; thận và lỏch xuất huyết, bao tim và xoang bụng tớch nước. Vịt chết nhanh ở mọi lứa tuổi, gan sưng, rắn, nhu mụ gan và thận bị phỏ hủy nghiờm trọng nhưng khụng cú tế bào viờm. Khụng cú sự lõy lan bệnh sang cỏc ủàn vịt khỏc khi khụng dựng cựng một loại thức ăn.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 42
2.11.2. Chuẩn ủoỏn virut học
đõy là phương phỏp hữu hiệu nhất, cho kết quả hữu hiệu và cú thể biết
ủược typ của virut gõy bệnh. Lấy bệnh phẩm là gan, lỏch, nóo nghiền với dung dịch PBS (Phosphate Buffer Saline) tỷ lệ 1/5 xử lý chloroform trong thời gian 10-15 phỳt ở nhiệt ủộ phũng ủể diệt tạp khuẩn.
Tiến hành phõn lập:
- Nuụi cấy virut Viờm gan vịt typ I:
+ Dựng vịt 1-7 ngày tuổi, tiờm hỗn dịch bệnh phẩm vào dưới da hoặc tiờm bắp. Sau khi tiờm 18-48 giờ, thường dưới 24 giờ vịt chết, cú biểu hiện triệu chứng, bệnh tớch ủặc trưng của virut typ I.
+ Dựng phụi vịt 10-14 ngày tuổi hoặc phụi gà 8-10 ngày tuổi, tiờm hỗn dịch bệnh phẩm vào xoang niệu mụ. Sau khi tiờm, virut giết chết phụi vịt trong khoảng 24-72 giờ, phụi gà từ 5-8 ngày.
Phụi cú bệnh tớch: Cũi cọc, xuất huyờt dưới da, phự phụi, gan sưng, ủỏ
hoặc hơi vàng.
+ Dựng mụi trường tế bào gan phụi vịt: Sau khi cấy hỗn dịch bệnh phẩm, virut gõy hủy hoại tế bào: Tế bào co trũn, hoại tử, tạo plaques ủường kớnh gần bằng 1 mm.
- Nuụi cấy virut Viờm gan vịt typ II
+ Dựng vịt 1-7 ngày tuổi, tiờm hỗn dịch bệnh phẩm vào dưới da hoặc tiờm bắp. Sau khi tiờm 2-4 ngày vịt mới chết. Tỷ lệ chết chỉ ủạt 20%. điều này khỏc hẳn so với typ I.
+ Dựng phụi vịt 10-14 ngày tuổi, gõy nhiễm virut qua xoang niệu mụ. Trờn mụi trường này, virut nhõn lờn hạn chế, sau 6-10 ngày mới phỏt hiện
ủược sự nhiễm virut của phụi: phụi cũi cọc, hoại tử, gan cú màu xanh.
+ Virut Viờm gan vịt typ II khụng nhõn lờn ủược trờn mụi trường tế bào của vịt, gà.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 43
+ Dựng vịt 1-7 ngày tuổi, tiờm hỗn dịch bệnh phẩm vào bắp thịt, 24giờ
sau khi tiờm vịt khụng chết, sau 2-4 ngày vịt chết, tỷ lệ chết thấp chỉủạt 20%. + Dựng phụi vịt 10 ngày tuổi, tiờm hỗn dịch bệnh phẩm vào màng nhung niệu, virut nhõn lờn yếu. Sau khi tiờm 7-10 ngày phụi mới chết, bệnh tớch phụi: phụi cũi cọc, phự phụi, xuất huyết dưới da, màng nhung niệu khụ và dày; gan, lỏch, thận sưng to.
Virut Viờm gan vịt typ III khụng nhõn lờn trờn phụi gà. Nuụi cấy virut trờn mụi trường tế bào khụng thành cụng nhưng cú thể phỏt hiện virut trong tế
bào gan phụi vịt, thận phụi vịt bị nhiễm virut bằng phản ứng miễn dịch huỳnh quang trực tiếp.
2.11.3. Chuẩn ủoỏn huyết thanh học
Trong chuẩn ủoỏn huyết thanh học cú nhiều phương phỏp: phương phỏp làm phản ứng trung hoà, phản ứng kết hợp bổ thể, phản ứng kết tủa khuyếch tỏn trong thạch. Nhưng trong chuẩn ủoỏn bệnh Viờm gan vịt người ta thường sử dụng phản ứng trung hoà. Nguyờn tắc của phản ứng trung hoà dựa trờn nguyờn tắc chung của sự kết hợp ủặc hiệu giữa khỏng nguyờn - khỏng thể, phản ứng trung hoà cú thể thực hiện trờn phụi gà hoặc phụi vịt hay trờn vịt con.
Lấy huyết thanh nghi bệnh từ mỏu của vịt con ủó bị bệnh ủiển hỡnh hoặc ở những vịt con sống sút sau khi ủàn vịt khỏi bệnh 2 tuần. Phản ứng thực hiện trờn phụi vịt hoặc phụi gà với chủng virut ủó ủược làm thớch nghi trong phũng thớ nghiệm tuy nhiờn nếu phản ứng làm trờn phụi vịt, theo tài liệu thỡ xỏc ủịnh liều ELD50 thường dễ dàng hơn, nhưng phụi gà cú ưu ủiểm là ủảm bảo chắc chắn khụng cú mặt của virut cũng như khỏng thể của bệnh tự nhiờn.
Trường đại học Nụng nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ nụng nghiệp ... 44