Trên những tiêu bản thu ñược, chúng tôi ñã quan sát thấy một số các giai ñoạn phát triển khác nhau của buồng trứng cá song chuột. Trong buồng trứng ñiển hình, trứng ñược hình thành và tạo nên các phiến trứng. Thành phiến trứng là một vài lớp nang bào, các tế bào này có nguồn gốc xôma. Phần ñầu phiến là vùng mầm nằm ở phía trong; càng hướng ra ngoài, các noãn bào càng phát triển lớn lên. Các noãn bào thay ñổi về kích thước nhân, kích thước tế bào, tương quan giữa nhân và tế bào chất. Sự bắt màu của thuốc nhuộm cũng thay ñổi do thành phần các chất có trong tế bào chất thay ñổi. Sự phát triển của các noãn nguyên bào ñể trở thành noãn bào thành thục phải trải qua các giai ñoạn khác nhau. Các giai ñoạn phát triển noãn bào ở cá song chuột cũng có 5 giai ñoạn tương ñương với phát triển noãn bào cá song chấm nâu (E.coioides) và song ñỏ (E.akaara) do W.Y.Tseng và S.K.HO (1996) nghiên cứu.
Ngày nay ñã có nhiều công trình nghiên cứu sự thành thục của trứng cá ở mức ñộ mô học trên nhiều loài cá khác nhau. Các giai ñoạn xác ñịnh sự chín muồi sinh dục cũng ñược nhiều tác giả ñưa ra áp dụng cho các loài cá riêng biệt.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………39
Giai ñoạn I
Theo Sakun và Butskaia (1978) ñây là giai ñoạn ñặc trưng cho thời kỳ non của tuyến sinh dục cá. Ở giai ñoạn này, tế bào sinh dục là những noãn nguyên bào ñang phát triển, buồng trứng ở giai ñoạn này có hai giai ñoạn khác nhau ñó là vùng mầm và vùng các trứng thuộc giai ñoạn lớn ít ñang xảy ra sự biến ñổi về nhân.
Vùng mầm nằm ở phần ñầu của các phiến trứng, nhìn trên toàn bộ tiêu bản thì chúng phân bố ở vùng trung tâm của buồng trứng, nơi tiếp giáp giữa hai tuyến. ðặc trưng của vùng mầm là sự phân bào nguyên nhiễm ñể tăng lên về số lượng và bắt ñầu biến ñổi của nhân ñể hình thành các noãn bào 1. Noãn bào có ñường kính 25,78 - 26,23 µm, và kích thước nhân rất nhỏ. Hình dạng noãn bào giai ñoạn này thường có góc cạnh.
ðối với cá song chuột nuôi ở Cát Bà, thành thục lần ñầu ñã diễn ra từ năm 2008, sau khi cá ñạt tuổi 4+. Trên cơ sở các nghiên cứu năm 2008, chúng tôi ñã phần nào xác ñịnh mùa vụ sinh sản của cá song chuột và quá trình phát triển tuyến sinh dục của chúng. Do vậy, năm 2009, các nghiên cứu của chúng tôi bắt ñầu từ tháng 1. Kết quả cho thấy, tháng 1, buồng trứng của cá song chuột ñang ở giai ñoạn I (Hình 3.9).
Nhân các tế bào ở vùng này thường có hình tròn, to, bên trong có rất nhiều hạt nhiễm sắc chất bắt màu ñậm, có thể quan sát thấy các nhiễm sắc thể ñang dãn xoắn cực ñại. ðiều này chứng tỏ nhiễm sắc thể ñang ñược tổng hợp mạnh mẽ, tế bào ñang ở giai ñoạn tích luỹ chất hữu cơ. Khi các noãn nguyên bào ở vùng này phân chia ñến một giai ñoạn nhất ñịnh chúng sẽ chuyển sang giai ñoạn lớn ít và trở thành noãn bào 1.
Giai ñoạn II
Lát cắt buồng trứng tháng 2/2009, buồng trứng cá song chuột ñã phát triển hơn tháng 1. Noãn bào có hình hơi tròn hoặc góc cạnh, nhân có hình tròn ñường kính noãn bào từ 43,85 – 47,68 µm và kính thước nhân 17,43- 18,82 µm (Hình 3.10).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………40
Như vậy trứng ở vùng này cũng tăng lên về mặt kích thước. Tuy nhiên ñặc trưng chủ yếu của giai ñoạn này là sự biến ñổi của nhân ở tiền kỳ Meiose 1. Các noãn bào trong vùng này thường có nhân tròn, lớn, bắt màu nhạt và chiếm phần lớn thể tích tế bào. Quan sát kỹ hơn ta có thể thấy trong nhân có các nhiễm sắc thể dạng sợi, noãn bào có một số tiểu hạch nhỏ hoặc chỉ một tiểu hạch lớn bắt màu rất ñậm. Kích thước của tiểu hạch tăng lên cùng với kích thước của noãn bào, ñiều này chứng tỏ nhân của noãn bào ñang ở trong thời kỳ biến ñổi mạnh. Sự xuất hiện của các tiểu hạch chứng tỏ trong nhân ñang xảy ra quá trình nhân gien ribôxom tạo nên bộ máy tổng hợp protein. Khác với tế bào xôma, chúng không ñược sử dụng ngay mà ñược dự trữ trong tế bào chất cho sự phát triển phôi sau này. Do vậy mà tế bào chất của những trứng này bắt màu thuốc nhuộm Hematoxylin rất ñậm. Noãn bào thường hơi tròn hoặc có góc cạnh. Noãn bào ở giai ñoạn này tương ñương với giai ñoạn tiểu hạch ngoại vi theo nghiên cứu của W.Y.TSeng và S.K.HO trên cá song ñỏ (E.akaara).
Giai ñoạn III
Giai ñoạn này ñược tìm thấy ở những cá có ñộ tuổi sau 4 +. Càng về phía ngoài của buồng trứng, kích thước noãn bào càng lớn dần Noãn bào có ñường kính 57- 71,07 µm, ñường kính nhân 24-62,8µm.
Trong noãn bào xuất hiện các khoang nhỏ trông giống như không bào nên có thể coi chúng là không bào (Hình 3.11).
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………41
Hình 3. 10. Lát cắt ngang buồng trứng cá song chuột giai ñoạn I
(tháng 1/2009)
Hình 3. 11. Lát cắt ngang buồng trứng cá song chuột giai ñoạn II
(tháng 2/2009)
Hình 3. 12. Lát cắt ngang buồng trứng cá song chuột ở
giai ñoạn III (tháng 3/2009)
Hình 3. 13. Lát cắt ngang buồng trứng cá song chuột ở giai ñoạn IV
(tháng 4/2009)
Giai ñoạn này thường kéo dài do noãn bào có nhiều biến ñổi phức tạp, từ sự xuất hiện của các không bào cho ñến sự hình thành các hạt noãn hoàng rồi thành khối noãn hoàng. Các không bào ban ñầu xuất hiện ở vùng tế bào chất ngoại vi, sát với màng tế bào. Các noãn bào có kích thước càng lớn thì kích thước không bào cũng lớn, số lượng các không bào này nhiều lên thành nhiều lớp ñi sâu vào tế bào chất. Chưa có nghiên cứu nào về các chất dự trữ có trong không bào nhưng có lẽ sự xuất hiện của các không bào
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………42
trong noãn bào có thể ñược coi là sự tích luỹ của các chất dự trữ trong trứng hay còn gọi là noãn hoàng ñể chuẩn bị cho giai ñoạn phát triển phôi sau này. Noãn bào giai ñoạn này có sự xuất hiện của hai yếu tố là hình thành rõ các nang bào bao quanh noãn và các không bào có trong tế bào chất có lẽ là ñể chuẩn bị cho giai ñoạn tiếp theo là giai ñoạn ñầy noãn hoàng. Khi các noãn bào này ñạt ñến một kích thước nhất ñịnh chúng sẽ ñược lấp ñầy bởi noãn hoàng.
Giai ñoạn IV
Noãn bào ở giai ñoạn IV cũng ñược tìm thấy ở những con cá 4+. Trứng cá ở giai ñoạn này ñã dần chuyển sang giai ñoạn thành thục và tích luỹ ñược rất nhiều noãn hoàng (Hình 3.13).
Noãn bào ñã tích luỹ ñầy ñủ noãn hoàng và ñạt tới kích thước lớn nhất. ðường kính noãn bào từ 648 – 1127 µm. Noãn hoàng có màu hồng sáng ở dạng hạt hình cầu và cùng với không bào chiếm hầu hết tế bào chất. Nhân co lại, màng nhân tiêu biến, hầu hết hạch nhân chuyển về trung tâm của nhân.
Giai ñoạn V (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Sang tháng 5, cá ñã chuẩn bị sinh sản. Giai ñoạn này nhân của noãn bào ñã di chuyển ñến gần lỗ noãn. Giai ñoạn này diễn ra rất ngắn. Trứng ñược giải phóng khỏi nang và vỏ mô liên kết. Những noãn bào ñã chín trong buồng trứng của cá luôn nằm ở vùng ngoài của các phiến trứng.
Kết quả nghiên cứu cấu trúc mô học buồng trứng cá song chuột có thể thấy:
- Các quá trình phát triển buồng trứng cá song tuân thủ theo những quy luật chung giống như ở cá song ñỏ E.akaara. Buồng trứng cũng phải trải qua tuần tự các giai ñoạn phát triển từ thấp ñến cao và biểu hiện ở các giai ñoạn phát triển của noãn bào.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………43
Hình 3. 14. Lát cắt ngang buồng trứng cá song chuột ở giai ñoạn V
Hình 3. 15. Sự phát triển noãn bào trong buồng trứng cá song chuột.
- Các noãn bào bắt ñầu tăng trưởng và phát triển vào ñầu tháng 3. Quá trình tạo noãn xảy ra trong 3 tháng (từ tháng 4 – tháng 6). Trong thời gian này kích thước noãn bào tăng từ 289 µm – 1127 µm, ñạt ñược kích thước cần thiết ñể sản xuất hoocmon sinh sản. Trong buồng trứng luôn tồn tại các noãn bào ở các giai ñoạn khác nhau. Trong 3 tháng này, buồng trứng liên tiếp có sự tạo mới. Các noãn bào ñược phát triển từ noãn nguyên bào. Sự phát triển của các noãn bào giai ñoạn 4 có sự thay ñổi hình thái mà nổi bật nhất là sự vỡ ra của các hạch nhân và chúng di cư vào ngoại biên tế bào. - Các giai ñoạn IV và V của buồng trứng ñược tìm thấy ở những
0 1 2 3 4 5 6 T1 T2 T3 T4 T5 T6 Noãn bào gñ I Noãn bào gñ II Noãn bào gñ III Noãn bào gñ IV Noãn bào gñ V
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp………44
tháng 4, 5, 6/2009 ñiều này cho thấy mùa sinh sản của cá song chuột vào tháng 4 cho ñến tháng 6.