III. Phương phỏp nghiờn cứ u
1.Phương phỏp xỏc ủị nh một số chỉ tiờu sinh lý
- Xỏc ủịnh ngưỡng nhiệt ủộ theo phương phỏp của Paladino, 1980; Bolin, 1981 trớch bởi Wedemeyer et al, 1990 [34]. CTN (Critical thermal maximum or minimum) tăng hay giảm từ từ nhiệt ủộ cho ủến khi cỏ mất thăng bằng và chết.
Bố trớ thớ nghiệm
Bắt ngẫu nhiờn 30 con cỏ khoẻ thả trong ba bỡnh chứa nước sạch (bỡnh cú thể tớch 40 lớt, cỏc yếu tố mụi trường nước ụxy, pH …thuận lợi cho sống bỡnh thường), bố trớ ba lần lặp ủể xỏc ủịnh cỏc ngưỡng nhiệt ủộ trờn và ngưỡng nhiệt
ủộ dưới. ðo cỏc chỉ tiờu ụxy và nhiệt ủộ cần nghiờn cứu.
- Cỏc bước tiến hành:
+ Xỏc ủịnh ngưỡng nhiệt ủộ cao:
Phương phỏp: Nõng nhiệt ủộ trực tiếp trờn bếp hoặc sử dụng mỏy nõng nhiệt ủể tăng nhiệt từ từ ủến khi cỏ bắt ủầu yếu và chết. Ghi nhận thời gian, nhiệt ủộ lỳc cỏ chết 50%.
Tiến hành thớ nghiệm: Cho vào ba bể thớ nghiệm, mỗi bể 30 con cỏ cũn sống và bơi khỏe, cú kớch cỡ từ 40 - 60mm. Duy trỡ nồng ủộ cao ụxy trong bể thớ nghiệm bằng mỏy sục khớ. Dựng que nõng nhiệt ủộ trong bể thớ nghiệm lờn từ từ
(trung bỡnh cứ 5 phỳt tăng lờn 10C). Dựng mỏy ủo nhiệt ủộ và ủồng hồ theo dừi hoạt ủộng của cỏ, ủến lỳc 50% cỏ trong bể thớ nghiệm chết, ghi nhận thời gian và nhiệt ủộ tại thời ủiểm ủú. Tiếp tục nõng nhiệt ủộ và theo dừi cho ủến khi cỏ chết 100%.
+ Ngưỡng nhiệt ủộ thấp:
Dựng nước ủỏ lạnh hạ nhiệt ủộ từ từ. Ghi nhận thời gian, nhiệt ủộ lỳc cỏ chết 50%.
Tiến hành thớ nghiệm: Cho vào ba bể thớ nghiệm, mỗi bể 30 con cỏ cũn sống và bơi khỏe, cú kớch cỡ từ 40 - 60mm. Dựng nước ủỏ lạnh hạ thấp nhiệt ủộ
trong bể thớ nghiệm xuống từ từ (trung bỡnh cứ 5 phỳt hạ xuống 10C). Duy trỡ nồng ủộ cao ụxy bằng mỏy sục khớ. Dựng mỏy ủo nhiệt ủộ và ủồng hồ theo dừi hoạt ủộng của cỏ ủến lỳc 50% cỏ trong bể thớ nghiệm chết, ghi nhận thời gian và nhiệt ủộ tại thời ủiểm ủú. Tiếp tục hạ nhiệt ủộ và theo dừi cho ủến khi cỏ chết 100%.
1.2. Xỏc ủịnh ngưỡng ụxy
Dựng bỡnh kớn theo dừi và ghi chộp khi cỏ chết 50% ủo ụxy bằng mỏy Oxymeter.
Tiến hành thớ nghiệm: Cho vào ba bể kớn, mỗi bể 30 con cỏ cũn sống và bơi khỏe, cú kớch cỡ từ 40 - 60mm. Dựng mỏy Oxymeter và ủồng hồ theo dừi hoạt ủộng của cỏ ủến lỳc cỏ trong bể chết 50%, ghi lại thời gian và nồng ủộ ụxy tại thời ủiểm ủú. Tiếp tục theo dừi cho ủến khi cỏ chết 100%.
Thớ nghiệm ủược lặp lại 3 lần.