3. ðỐ IT ƯỢNG, VẬT LIỆU, NỘI DUNG
3.5.3. Phương pháp phân lập nấm Botrytis cinerea Pers
Phân ly nấm bệnh ñược tiến hành theo Nguyễn Văn Tuất (1997) [17]. Mẫu bệnh ñược chọn từ vết bệnh có triệu chứng ñiển hình, rửa sạch mẫu bệnh bằng nước sạch, khử trùng bề mặt mẫu bệnh bằng cồn ethannol 70 %. Cắt mô vết bệnh thành mô nhỏ tại ñiểm tiếp giáp giữa mô bệnh và mô khỏe 1-2 mm x 1-2 mm, nhúng mô bệnh và dung dịch NaClO 1 % trong 5 giây, rửa sạch bằng nước cất vô trùng, làm khô mẫu bệnh bằng giấy thấm vô trùng cấy mô bị
bệnh ñã khử trùng lên môi trường PGA, cấy truyền và phân ly theo phương pháp nuôi cấy ñơn bào tửñểñạt ñược nấm thuần, quá trình phân lý nấm ñược thực hiện trong ñiều kiện vô trùng.
3.5.4. Phương pháp giám ñịnh nấm gây bệnh
Các mẫu bệnh thu thập có triệu chứng ñiển hình còn tươi ñược ñể ẩm và quan sát dưới kính hiển vi. Nấm gây bệnh ñược phân lập, nuôi cấy, tạo nấm thuần, lây bệnh nhân tạo theo quy tắc Koch. Tiến hành giám ñịnh theo các tài liệu giám ñịnh của: Nguyễn Văn Tuất (1997) [17], Lester W. Burgess (2008) [53], Mirzeai. S, E. Mohammadi Goltapehp và M. Shams – akhsh (2007) [56], Groves J.W và Loveland C.A (1953) [41].
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...37
3.5.5. Nghiên cứu phạm vi ký chủ của nấm Botrytis cinerea
- Xác ñịnh phạm vi ký chủ của nấm Botrytis cinerea ñược tiến hành bằng phương pháp lây bệnh nhân tạo các cây ký chủ mẫn cảm với bệnh
- Lựa chọn cây (ký chủ) khỏe cùng giống với cây phân lập ñược nấm
B.cinerea
- Bộ phận ñem lây (lấy từ cây khỏe) ñược rửa sạch, khử trùng bề mặt bằng cồn 70 0 trong 30 giây sau ñó rửa sạch cồn bằng nước cất vô trùng và ñể
trên giấy hút ẩm cho ráo nước
- Sau khi các nguồn nấm ñã ñược phân lập thuần trên môi trường nhân tạo PGA, chúng tôi tiến hành tạo dung dịch bào tử bằng cách pha loãng bào tử
nấm với nước cất trong ống nghiệm. Pha chế nồng ñộ dung dịch bào tử 104 - 105 /ml (50 bào tử trên một quang trường kính hiển vi).
3.5.5.1. Các bước tiến hành lây bệnh
Phương pháp lây tiến hành theo Anderson (1994) [19], (Baker, 1946) [20], Lester W. Burgess (2008) [53]. Phương pháp lây bệnh trên lá, ñài hoa, cánh hoa, cuống hoa và quả bằng hai cách: lây bệnh nhân tạo có sát thương và lây bệnh nhân tạo không sát thương bộ phận lây
Phương pháp tiến hành:
Dùng bông thấm nước vô trùng nhúng vào dung dịch bào tử nấm
Botrytis cinerea ñã chuẩn bị sẵn.
1. ðặt miếng bông có dung dịch bào tử lên lá, ñài hoa, cuống hoa, cánh hoa và quả cây ñược lây bệnh và cốñịnh miếng bông lại.
2. ðồng thời ñặt miếng bông chỉ thấm nước vô trùng lên lá, ñài hoa, cuống hoa, cánh hoa và quả cây dùng làm ñối chứng
3. ðặt khay chứa bộ phận thí nghiệm trong ñiều kiện môi trường ẩm và tránh ánh sáng trực tiếp
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...38 4. Kiểm tra và so sánh bộ phận ñược lây bệnh với bộ phận ñược ñối chứng. Quan sát và ghi nhận các triệu chứng và so sánh triệu chứng này với triệu chứng quan sát ngoài ñồng ruộng
- Thí nghiệm lây bệnh nhân tạo trên mỗi bộ phận ký chủ khỏe mạnh
ñược lây tương ñương với một công thức thí nghiệm, 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 20 bộ phận ñược lây.
- Thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB). Chỉ tiêu theo dõi TKTD (ngày), TLB (%).
3.5.5.2. Lây bệnh bệnh thối xám trên các cây ký chủ
Thí nghiệm ñược tiến hành áp dụng lây bệnh bằng hai cách: sát thương và không sát thương bộ phận lây
* Sát thương bộ phận lây
Isolates nấm Botrytis cinerea phân lập trên cây (ký chủ) bị bệnh thối xám thu thập ngoài ñồng ruộng lây bệnh trên bộ phận của cây khỏe thông qua vết tự tạo thương trên bộ phận của cây ñó
* Không sát thương bộ phận lây
Isolates nấm Botrytis cinerea phân lập trên cây (ký chủ) bị bệnh ñược
lây bệnh lên bộ phận bị mẫn cảm nhất của cây khỏe và không gây vết thương
khi ñem lây
3.5.6. Khảo sát hiệu lực của một số thuốc trừ bệnh thối xám hại một số cây trồng vụ xuân hè năm 2010 tại Mộc Châu – Sơn La trồng vụ xuân hè năm 2010 tại Mộc Châu – Sơn La
3.5.6.1. Khảo sát hiệu lực của một số loại thuốc trừ bệnh thối xám hại giống
cà chua T56 vụ xuân hè 2010
Thí nghiệm bố trí theo kiểu khỗi ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB), mỗi công thức 3 lần nhắc lại, mỗi lần nhắc lại 25 m2, với 5 công thức
CT1: Som 5DD (0,2 %) CT2: TP - Zep 18EC (0,2 %) CT3: Topsin M 50WP (0,2 %) CT4: Rovrl 50WP (0,2 %)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...39 CT5: ðối chứng (không phun)
Ngày trồng 01/02/2010, ngày xử lý thuốc 28/03/2010.
Thí nghiệm ñược tiến hành trên giống cà chua lai T56, tại Công ty Hoa nhiệt ñới Mộc Châu, Sơn La. Lượng nước thuốc phun là 600 lít/ha, xử lý thuốc vào giai ñoạn cà chua ra hoa và quả non.
Chỉ tiêu theo dõi TLB(%), CSB(%) trước phun 1 ngày, sau phun 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày. Tính hiệu lực của thuốc sau phun 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày theo Henderson - Tilton.
3.5.6.2. Khảo sát hiệu lực của một số loại thuốc trừ bệnh thối xám hại giống
dâu tây Taiwan vụ xuân hè 2010
Thí nghiệm bố trí theo kiểu khối ngẫu nhiên hoàn chỉnh (RCB) với 4 công thức và 3 lần nhắc lại, mỗi ô thí nghiệm 25 m2
Thí nghiệm bố trí gồm 4 công thức:
CT1: Kasuran 47WP (0,2 %) CT2: Rovral 50WP (0,2 %) CT3: Som 5DD (0,2 %) CT4: ðối chứng (không phun)
Thí nghiệm ñược nghiên cứu trên giống dâu tây Taiwan trồng tại Hợp tác xã nông nghiệp 19-5, Mộc Châu, Sơn La. Ngày trồng 05/7/2009. Ngày xử
lý thuốc 02/03/2010 (giai ñoạn cây có hoa và quả xanh).
Chỉ tiêu theo dõi TLB(%), CSB(%) trước phun 1 ngày, sau phun 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày. Tính hiệu lực của thuốc sau phun 7 ngày, 14 ngày, 21 ngày theo Henderson -Tilton.
3.5.7. Chỉ tiêu theo dõi
* Tính tỉ lệ bệnh (%) TLB(%) = B A x100 Trong ñó:
A: Số lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bị bệnh B: Tổng số lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) ñiều tra
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...40 * Chỉ số bệnh (%) CSB (%) = NxT axb
∑
( ) x 100 Trong ñó: a: % diện tích số lá (số quả, số cây) bị bệnh ở mỗi cấp. b: Cấp bệnh tương ứng.T: Cấp bệnh cao nhất trong bảng phân cấp (cấp 5) N:Tổng số lá (số quả, số cây) ñiều tra.
Phân cấp bệnh theo thang 5 cấp:
Cấp 0: Lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) không bị bệnh
Cấp 1: Diện tích lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bệnh <5%
Cấp 2: Diện tích lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bệnh từ≥ 5 – 15 %,
Cấp 3: Diện tích lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bệnh từ≥ 15 – 30 %,
Cấp 4: Diện tích lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bệnh ≥ 30 – 50 %,
Cấp 5: Diện tích lá (cuống hoa, cánh hoa, ñài hoa, quả, cây) bệnh ≥ 50 %
* Tính ñộ hữu hiệu của thuốc ngoài ñồng ruộng ñược tính theo công
thức của Henderson – Tilton H(%)= [1- ( Ca Ta x Tb Cb )] x 100
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...41 Trong ñó :
H(%): Hiệu quả của thuốc tính bằng (%)
Ta: Chỉ số bệnh của công thức thí nghiệm sau xử lý Tb: Chỉ số bệnh của công thức thí nghiệm trước xử lý Ca: Chỉ số bệnh của công thức ñối chứng sau xử lý Cb: Chỉ số bệnh của công thức ñối chứng trước xử lý
* Các số liệu thu ñược xử lý theo phương pháp thống kê sinh học: của
Phạm Chí Thành (1998) [15], chương trình tính sai số thí nghiệm IRRISTAT 5,0 của Viện nghiên cứu lúa Quốc Tế và chương trình ứng dụng Excell trong xử lý số liệu.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...42
4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1. Tình hình bệnh thối xám (Botrytis cinerea ) trên dâu tây và ảnh
hưởng của biện pháp kỹ thuật tác ñộng ñến bệnh thối xám gây hại trên
dâu tây vụ thu ñông và xuân hè 2009-2010 tại huyện Mộc Châu – Sơn La
Bệnh hại trên tất cả các bộ phận của dâu tây. Chúng gây hại chủ yếu trên quả, hại cả thời kỳ quả xanh, quả chín, ngoài ra chúng còn gây hại trên cuống quả, ñài hoa và trên lá tuy nhiên mức ñộ nhẹ hơn.
Vết bệnh ban ñầu là vết thâm nâu về sau chuyển sang thâm ñen giống như vết bầm dập gặp ñiều kiện thuận lợi vết bệnh lan rộng ra có triệu chứng dẫn nước (hay còn gọi là ủng nước) ở phần gianh giới giữa mô bệnh và mô khỏe, triệu chứng này càng thấy rõ khi trong ñiều kiện thời tiết ẩm, mưa phùn kéo dài hay trong ñiều kiện sương vào sáng sớm. Giữa vết bệnh hình thành lớp bào tử phân sinh màu mốc tro, nấm này lan rộng và hủy hoại bộ phận mà nấm B.cinerea gây hại. Nấm gây bệnh trên quả và gây thối quả, trên ñài hoa làm cho hoa bị khô héo và hỏng hoa, trên cuống quả và cuống lá làm cho cuống bị khô tóp và khi gặp ñiều kiện thời tiết ẩm phần cuống gẫy gục và ñổ
rạp. Bệnh gây hại trên lá tạo thành những chấm tròn, ôvan, vết loang màu ñen xám làm lá giảm khả năng quang hợp, vết bệnh lan dần xuống cuống lá và làm khô tóp cuống lá. Trên ñồng ruộng thấy bệnh xuất hiện ở cả 2 vụ thu
ñông và xuân hè và gây hại mạnh từ tháng 10 năm trước ñến cuối tháng 3 ñầu tháng 4 năm sau.
Triệu chứng bệnh thối xám do nấm Botrytis cinerea gây hại dâu tây trên ñồng ruộng ñược thể hiện qua hình 4.1, 4.1, 4.3.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...43
Hình 4.1. Triệu chứng bệnh thối xám hại trên cây dâu tây
Hình 4.2. Triệu chứng bệnh thối xám hại trên
quả dâu tây
Hình 4.3. Triệu chứng khô quả dâu tây do
nấm B.cinerea
ðể tìm hiểu sự gây hại của bệnh chúng tôi tiến hành ñiều tra diễn biến sự phát sinh phát triển của bệnh thối xám trên ñồng ruộng.
4.1.1. Diễn biến bệnh thối xám Botrytis cinerea trên giống dâu tây Taiwan vụ thu ñông 2009 tại huyện Mộc Châu – Sơn La
Mộc Châu với tính chất khí hậu nhiệt ñới gió mùa núi cao và mang tính chất ôn ñới và ắ nhiệt ñới nhờ vậy ñã tạo ñiều kiện thuận lợi cho sự phát triển của bệnh nói chúng và bệnh thối xám nói riêng. ðể có kết luận cụ thể về mức
ñộ gây hại của bệnh ở các vùng trồng dâu tây thuộc huyện Mộc Châu, Sơn La chúng tôi tiến hành ñiều tra ở hai khu vực trồng dâu tây thuộc hợp tác xã Nông nghiệp 19-5 và Công ty hoa nhiệt ñới. Kết quả ñược trình bày ở bảng 4.1 và hình 4.4.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...44
Bảng 4.1. Diễn biến bệnh thối xám (Botrytis cinerea ) trên dâu tây Taiwan vụ thu ñông năm 2009 tại Công ty Hoa nhiệt ñới và Hợp tác xã 19-5
CT Hoa nhiệt ñới Hợp tác xã nông nghiệp 19-5 ðịa ñiểm Ngày ñiều tra TLB (%) CSB (%) TLB (%) CSB (%) 05/09/2009 0 0 2,81 0,80 15/09/2009 0,80 0,32 3,63 1,52 25/09/2009 1,20 0,48 6,03 2,00 05/10/2009 3,01 1,04 6,44 2,64 15/10/2009 4,82 1,76 7,64 3,20 25/10/2009 6,02 2,96 10,45 4,24 05/11/2009 9,24 5,12 11,71 6,00 15/11/2009 13,69 7,29 15,71 7,44 25/11/2009 16,91 8,88 20,54 9,84 05/12/2009 20,11 9,52 24,56 12,72 15/12/2009 20,12 9,76 26,56 14,96 25/12/2009 20,54 10,12 28,94 15,04 04/01/2010 22,24 11,20 30,14 15,64
Kết quả cho thấy bệnh thối xám gây hại trên tất cả các ñịa ñiểm trồng
dâu tây. Mức ñộ gây hại của bệnh ñều tăng qua các ngày ñiều tra và tại ñịa
ñiểm trồng dâu tây thuộc Hợp tác xã nông nghiệp 19-5 có mức ñộ gây hại cao hơn so với ñịa ñiểm trồng ở Công ty Hoa nhiệt ñới, ở ngày ñiều tra 4/01/2010 Hợp tác xã nông nghiệp 19-5 (TLB là 30,14 %, CSB là 15,64 %), ở Công ty Hoa nhiệt ñới (TLB là 22,24% và CSB là 11,20 %)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...45 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 5/9/ 2010 25/0 9/20 09 15/1 0/20 09 5/11 /200 9 25/1 1/20 09 15/1 2/20 09 4/1/ 2010 Ngày ñiều tra C S B ( % ) CT Hoa Nhiệt ðới Hợp tác xã 19-5
Hình 4.4. Diễn biến bệnh thối xám (Botrytis cinerea ) trên dâu tây Taiwan vụ thu ñông năm 2009 tại Công ty hoa nhiệt ñới và Hợp tác xã 19-5
Mức ñộ bệnh thối xám ở Công ty hoa nhiệt ñới nhẹ hơn ở Hợp tác xã nông nghiệp 19 - 5. Do một số nguyên nhân ñiều kiện ñịa hình ở công ty hoa nhiệt ñới khu trồng dâu tây ñược ngăn cách hướng mù với dãy núi bao quanh. Tình hình bệnh cả hai khu vực có xu hướng tăng từ ngày ñiều tra 25/9 trở ñi nguyên nhân là trong tháng 9 và 10, ñộ ẩm không khí ñạt 86 – 90 %, nhiệt ñộ
trung bình tháng là 20 – 22 0C rất thuận lợi cho nấm Botrytis cinerea phát triển. Ngoài ra Công ty Hoa nhiệt ñới ñã áp dụng trình ñộ khoa học kỹ thuật vào trong thâm canh tốt hơn như kỹ thuật trồng, chăm sóc, bón phân, nguồn nước tưới sạch,..do vậy mức ñộ gây hại thấp hơn. Vì vậy trong sản xuất mặc dù với ñiều kiện khí hậu phù hợp trồng cây dâu tây, tuy nhiên cần phải tuyên truyền cho người dân phải áp dụng các biện pháp kỹ thuật và chăm sóc ñúng kỹ thuật ñể hạn chế bệnh thối xám trên ñồng ruộng.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...46
4.1.2. Ảnh hưởng của các biện pháp kỹ thuật ñến sự phát triển của bệnh
thối xám (Botrytis cinerea) trên dâu tây
Dâu tây chứa một lượng vitamin C phong phú. ðây là một loại cây ñặc sản có giá trị dinh dưỡng rất cao, có thể dùng ñể ăn tươi hay chế biến công nghiệp như rượu, mứt… Dâu tây thích hợp ở khí hậu ôn ñới và á nhiệt ñới. Nếu thâm canh ñúng hướng sẽ cho năng suất cao và có hiệu quả kinh tế. Trong những năm gần ñây ñã có nhiều giống nhập nội và giống ñược chọn tạo trong nước ñược ñưa vào trồng. Nhằm xác ñịnh mức ñộ gây hại của bệnh thối xám trên dâu tây tại vùng Mộc Châu, Sơn La chúng tôi tiến hành tìm hiểu một số yếu tốảnh hưởng ñến sự phát triển của bệnh thối xám
4.1.2.1. Ảnh hưởng của giống ñến sự phát triển của nấm thối xám (Botrytis
cinerea) hại cây dâu tây
Giống là một trong những yếu tố quan trọng nhất bên cạnh các yếu tố
khác như nước, phân, chếñộ chăm sóc. Yếu tố giống liên quan ñến khả năng thích ứng, các ñặc tính về hình thái, sinh lý, sinh hóa và ñặc tính sinh vật học của cây khả năng chống chịu bệnh trên ñồng ruộng. ðể tìm hiểu vấn ñề này chúng tôi tiến hành ñiều tra diễn biến bệnh thối xám trên 4 giống dâu tây tại Hợp tác xã nông nghiệp 19-5. Kết quả ñược trình bày trên bảng 4.2 và hình 4.5.
Trên cả 4 giống dâu tây trồng ñều bị nhiễm bệnh thối xám. Mức ñộ
nhiễm bệnh thối xám giữa các giống có sự khác nhau. Qua ngày ñiều tra 4/01/2010 cho thấy giống nhiễm bệnh nặng nhất là hai giống Mỹ hương (TLB 31,11 % và CSB 33,06 %), giống Newzealand (TLB 33,39 % và CSB 26,40 %). Giống Taiwan mức nhiễm trung bình (TLB là 30,14 % , TLB là 15,64 %). Giống có mức ñộ nhiễm bệnh thối xám thấp nhất là giống Mỹ ñá (TLB là 20,10 % và CSB là 15,60 %)
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp ...47
