- đề tài ựược thực hiện tại phòng Kiểm nghiệm vacxin siêu trùng Xắ nghiệp thuốc thú y Trung ương.
3.5.2. Phương pháp xác ựịnh hiệu giá virus (liều gây nhiễm 50% phôi: EID50) của lô vacxin
của lô vacxin
- Chuẩn bị trứng: trứng vịt có phôi 12 ngày tuổi, soi trứng , chọn những phôi khoẻ mạnh, ựánh dấu buồng hơi, ựánh dấu vị trắ ựầu phôi, sát trùng bằng cồn 70o xung quanh vỏ trứng, sát trùng vị trắ buồng hơi, vị vắ tiêm ở ựầu phôi bằng cồn iod 5%.
- Lấy mẫu theo 10 TCN 160 - 92 Vacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệm (như phần 3.5.1).
*Tiến hành: thắ nghiệm ựược kiểm tra trên 3 lô vacxin, mỗi lô vacxin lấy 3 mẫu ựể kiểm tra, pha giống virus (1 liều vacxin) từ nồng ựộ 10-1 ựến 10-7. Mỗi nồng ựộ pha loãng tiêm cho 5 phôi, mỗi phôi tiêm 0,1ml.
Sau khi tiêm, phôi ựược ấp tiếp ở 370C, theo dõi phôi ở các thời ựiểm 24 giờ ựến 96 giờ. Kiểm tra và cho những phôi chết vào tủ lạnh 40C. Sau 96 giờ cho toàn bộ số phôi sống và chết vào tủ lạnh 40C trong 24 giờ. Mổ cả phôi sống và phôi chết, cho ra ựĩa lồng và kiểm tra bệnh tắch của phôị Xác ựịnh tổng số phôi có bệnh tắch (phôi nhiễm) và tổng số phôi không có bệnh tắch (phôi không nhiễm) ở từng nồng ựộ.
.Tắnh tỷ lệ phôi nhiễm ở các nồng ựộ theo công thức:
Tắnh EID50 theo công thức của Reed Muench: Lg EID50 = lgA + X lgf Á-50 X = Á-B' Tỷ lệ phôi nhiễm (%) = Tổng số phôi nhiễm
Tổng số phôi nhiễm + tổng số phôi không nhiễm
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ kinh tế nông nghiệp ... 36
Trong ựó:
X: khoảng cách cân ựối
A: ựộ pha loãng virus gây nhiễm cận trên A′: Tỷ lệ % phôi nhiễm cận trên 50% B′: Tỷ lệ % phôi nhiễm cận dưới 50% f: bậc pha loãng của virus