Phải biết số lượng cũng như thành phần của
lipid đ ể nghiên cứu và tìm hiểu nĩ.
Do khơng tan trong nước nên phải sử dụng
dung mơi hữu cơ để tách chiết, quá trình tách chiết cĩ nhiều điểm khác quá trình tách chiết protein hay carbohydrate (là những chất
khơng tan trong nước) và dựa vào tính phân cực và độ hịa tan khác nhau trong dung mơi hữu cơ của hỗn hợp lipid để tách chiết. Đối với lipid chứa liên kết ester hoặc amide với acid
béo phải được xử lý bằng phản ứng xà phịng hĩa.
a)Tách chiết lipid bằng dung mơi hữu cơ
• Lipid trung tính như triacylglycerol, sáp sắc tố…
được tách chiết bằng ether, chloroform hoặc benzen là dung mơi ngăn khơng cho các phân tử lipid co cụm do tương tác kỵ nước bị phá vỡ.
• Lipid màng sinh học phải được tách chiết bằng dung
mơi cĩ độ phân cực lớn như ethanol và methanol.
• Thực tế sử dụng tổ hợp dung mơi tách chiết kết hợp
đầy đủ ưu điểm hệ dung mơi: hỗn hợp chloroform, methanol và nước với tỉ lệ 1:2:0.8, nghiền kỹ, bổ sung nước, lắc đều, để yên trong thời gian nhất định.
• Dung dịch phân tách 2 lớp: lớp trên là methanol và
b) Tách chiết bằng phương pháp sắc ký hấp thụ.
Hỗn hợp lipid sau khi tách sơ bộ sẽ được tách phân đoạn
tiếp theo bằng phương pháp sắc ký hấp phụ dựa trên độ phân cực khác nhau của chúng (thường sử dụng trên nền chất mang phân cực silicagel Si(OH)4 dạng hạt mịn và nhồi trong cột).
Hỗn hợp lipid trong dịch chloroform nạp vào phần trên của
cột.
Thành phần lipid phân cực mạnh sẽ hấp phụ vào nền cột. Lipid trung tính khơng hấp thụ mà di chuyển dọc theo cột
và ra ngồi cùng dịch rửa chloroform.
Phần lipid phân cực cịn lại trên nền cột được tách từ từ
từng phần, theo đà tăng dần độ phân cực dung mơi cột rửa.
Lipid phân cực nhưng khơng mang điện như cerebroside
được rửa bằng acetone, lipid phân cực mạnh hoặc mang điện như glycerophospholipid được rửa bằng methanol.
• Ngồi ra để tách chiết lipid cịn sử dụng phương pháp
sắc ký bản mỏng trên nền silica gel: