Tính tương thích hệ thống:
Tính tương thích hệ thống của quy trình phân tích được xác định trên giá trị và độ lặp lại của các thông số kỹ thuật của hệ thống khi tiến hành thực hiện quy trình trên mẫu chuẩn và mẫu thử với 6 lần tiêm mẫu liên tiếp.
- Tiến hành: Chuẩn bị mẫu thử và mẫu chuẩn.
Chạy sắc ký 6 lần với mẫu chuẩn và mẫu thử.
Khảo sát các thông số: thời gian lưu, diện tích đỉnh.
Xử lý thống kê các giá trị thu được.
- Yêu cầu: RSD ≤ 2%.
Thẩm định quy trình:
Tính đặc hiệu
- Tiến hành: Chuẩn bị mẫu thử và mẫu trắng (là mẫu chỉ gồm tá dược), mẫu dung môi pha mẫu, mẫu dung dịch nước acid phosphoric 0,2%.
Tiến hành chạy sắc ký.
- Yêu cầu: Mẫu trắng, mẫu dung môi, mẫu dung dịch nước acid phosphoric 0,2% không có các pic trùng với đỉnh chính (tương ứng với quercetin).
Tính tuyến tính
- Tiến hành: Chạy sắc ký và xác định hàm lượng 6 dung dịch chuẩn với nồng độ khác nhau.
Xây dựng đường chuẩn và xác định R2.
Thẩm định lại phương trình đường chuẩn bằng phương pháp thống kê.
- Yêu cầu: R2 ≥ 0,99.
- Tiến hành: Xử lý 6 mẫu thử nồng độ bằng nhau.
Xác định hàm lượng quercetin trong mỗi mẫu thử.
Tính hàm lượng trung bình và RSD%.
- Yêu cầu: RSD nằm trong giới hạn cho phép của AOAC.
Độ đúng
- Tiến hành: Thêm lượng chất chuẩn quercetin tương ứng với khoảng 80%, 100%, 120% hàm lượng quercetin có trong mẫu thử.
Định lượng tìm lại hàm lượng hàm lượng quercetin đã thêm vào để xác định tỷ lệ phục hồi.
- Yêu cầu: Tỷ lệ phục hồi trong giới hạn cho phép của AOAC.